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两种冻存方法在肿瘤微转移检测中的运用被引量：3: 2000年; 目的　建立科学的外周血有核细胞的冻存方法 ,为肿瘤的微转移逆转录PCR检测打好基础。方法　分离15例CEA分泌性肿瘤患者外周血有核细胞 ,分别用两种方法冻存 ,设为两组。对细胞进行总RNA的抽提 ,测定RNAOD值并行 1%琼脂糖凝胶电泳 ,进一步逆转录PCR反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析最终产物。结果　经两种方法冻存的细胞 ,其总RNAOD值差异无显著性 ,电泳均见竹节样带。两组逆转录PCR结果一致 ,阳性率均为 66.7%。结论　在肿瘤的微转移逆转录PCR检测中 ,抽提组织或细胞总RNA是重要的环节 ,而对于后者来说 ,原始标本的冻存是很关键的。该实验中所采用的两种冻存方法都切实可行。; 李荔霞王晓怀郑文岭王捷林金容; 关键词：冻存方法肿瘤微转移逆转录PCR 外周血有核细胞

RT-PCR检测CEA分泌性肿瘤患者血中的CEA mRNA被引量：15: 2000年; 目的 :建立一种外周血循环中肿瘤微转移检测的方法。方法 :2 0例CEA分泌性肿瘤患者及 8例健康对照 ,用逆转录PCR(ReverseTranscription PolymeraseChainReaction ,简称为RT PCR)方法检测血中的CEAmR NA ,同时用放免法检测血清CEA水平。结果 :2 0例患者CEAmRNA阳性率为 5 5 % ,而健康对照均为阴性。外周血CEAmRNA的存在与CEA分泌性肿瘤远处转移密切相关 ,而与CEA水平无明显关系。结论 :RT PCR是肿瘤微循环检测的灵敏方法。; 李荔霞王晓怀郑文岭王捷林金容; 关键词：RT-PCR CEA CEAMRNA 肿瘤转移

癌胚抗原分泌性肿瘤患者外周血中癌胚抗原mRNA的表达被引量：3: 2001年; 目的观察外周血中癌胚抗原（ＣＥＡ）分泌性肿瘤标志基因的表达。方法设计特异的引物，用逆转录ＰＣＲ方法检测正常人及肿瘤病人外周血有核细胞成分中的ＣＥＡｍＲＮＡ。结果４６例肿瘤患者中有２５例检出ＣＥＡｍＲＮＡ，阳性率为５４．３５％；正常对照者１２例均阴性。肿瘤临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的患者血清ＣＥＡｍＲＮＡ检出率明显高于Ⅰ、Ⅱ期的病人（Ｐ＜０．０５）。ＣＥＡｍＲＮＡ阳性率与血清ＣＥＡ水平无显著性关系（Ｐ＜０．０５）。临床有远处转移者ＣＥＡｍＲＮＡ阳性率明显高于无远处转移者（Ｐ＜０．０５）。对临床无远处转移征兆，而ＣＥＡｍＲＮＡ检测阳性的１２例患者进行半年的随访，３例出现脏器的转移。结论外周血标志基因检测是肿瘤微转移检测的灵敏方法。ＣＥＡｍＲＮＡ阳性率与肿瘤临床分期正相关，与肿瘤的远处转移密切相关，而与血清ＣＥＡ水平无显著性关系。血中标志基因阳性可能提示肿瘤的早期转移。; 李荔霞王晓怀郑文岭王捷林金容周殿元; 关键词：基因表达肿瘤转移癌胚抗原 MRNA

含不同启动子的人癌胚抗原重组质粒的构建与表达被引量：3: 2003年; 构建含不同启动子的人癌胚抗原重组表达质粒,观察肌肉注射该重组质粒后人癌胚抗原基因在小鼠舌肌中的表达情况。方法:将7天前肌肉注射0.75%布比卡因的小鼠分成4组,每组4只,分别将含不同启动子的重组质粒pCEA、pLCEASN及阴性对照质粒pcDNA3、pLXSN注射于小鼠的舌肌内,每周1次,每次100μg,共3次;注射前及每次注射后2天,取尾静脉血用放免法测其癌胚抗原的含量,最后1次注射2天后,处死小鼠并取其舌、脑、肝、脾、肾、心脏及股四头肌用免疫组化法(ABC法)检测癌胚抗原的表达。结果:构建并鉴定了两种新的癌胚抗原重组表达质粒;免疫组织化学法检测显示:癌胚抗原ABC染色仅在用人癌胚抗原重组表达质粒注射过的舌肌切片中阳性,而在脑、肝、脾、肾、心脏及股四头肌的切片中均阴性;放免法检测显示:所有血液样本中癌胚抗原的浓度均未达检测值(<5ng/ml)。结论:含不同启动子的癌胚抗原重组表达质粒可在注射部位有效地表达人癌胚抗原。; 李云贵王晓怀杨太成赖晃文江悦华; 关键词：癌胚抗原重组质粒核酸疫苗原位表达

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广东省自然科学基金(960667)