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关于生物制品残余DNA质量控制问题被引量：42: 2011年; 随着生物医药技术的飞速发展,越来越多的哺乳动物细胞,尤其是连续传代细胞系用于生产疫苗和治疗性生物制品。重组蛋白制品的用量随着临床治疗效果的需求越来越大,由微克级上升到了毫克甚至克级,需要长期反复用药的生物制品也越来越多。同时疫苗的使用者为健康人群,而且很多疫苗使用人群也扩大到婴幼儿,这使得药品监管部门不得不更加重视疫苗等生物制品的安全性,其中细胞残余DNA的质量控制一直是人们关注的热点。本文就不同时期国内外对于DNA残留问题的看法、DNA残留量质控标准的制定、DNA残留量检测方法等研究进展作一综述,并提出残余DNA问题未来需要进一步开展的工作。; 王兰王军志; 关键词：生物制品

应用ELISA测定睫状神经营养因子中卡那霉素残留量被引量：7: 2011年; 目的：建立ELISA检测卡那霉素残留量的方法并进行方法学验证,用于重组技术产品的质量控制。方法：采用间接竞争ELISA方法,样本中残留的卡那霉素将和微孔板上预包被的偶联抗原竞争抗卡那霉素抗体,加入酶标二抗后,用3,3,5,5-四甲基联苯胺（TMB）底物显色,样本吸光值与残留卡那霉素的含量成负相关,用酶标仪进行检测并用SOFT MAX分析软件进行分析。结果：ELISA方法测定卡那霉素残留量在0.5~40.5 ng.mL-1范围内线性良好,且符合四参数方程式：y=（A-D）/[1＋（X/C）B]＋D,r2≥0.99;板内变异小于15%,板间变异小于20%,实验重复性好,加标回收率在80%~120%之间;该方法检测与庆大霉素、盐酸四环素、链霉素和氨苄西林药物未显示交叉反应。应用该法对1批睫状神经营养因子（CNTF）原液的卡那霉素残留量进行测定,结果表明,每人用剂量CNTF（100μg）卡那霉素残留量小于0.5 ng。结论：该方法具有灵敏度高、操作简便、检测迅速等特点,可用于重组技术产品中卡那霉素残留量的检定。; 王兰毕华饶春明; 关键词：ELISA 卡那霉素残留量

PEG化重组人促红素质量控制方法和标准研究被引量：7: 2012年; 目的:建立PEG化重组人促红素质量控制方法和质量标准。方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用iCE毛细管等电聚焦电泳分析异构体,用离子色谱确定N-糖链指纹图谱,反相HPLC进行Lys-C蛋白内切酶酶切的肽图分析以及纯度测定。其余检测项目按2010年版中国药典三部方法进行。结果:建立的方法经过比较和对PEG化重组人促红素的检测,结果稳定可靠,重复性好,各指标符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2010年版中国药典三部的要求。结论:本研究建立了一套完善的PEG化重组人促红素质量控制体系。; 周勇王丽于传飞杨鹏云王箐舟侯继锋王军志; 关键词：活性离子色谱反相高效液相纯度测定

生物技术药物质量控制与转化医学被引量：1: 2011年; 转化医学旨在推动基础研究成果快速临床转化并用于疾病诊断、预防和治疗,其核心理念是在基础研究和临床实践之间建立一个双向转化通道。生物技术药物作为医药领域研究的重要成果和本世纪最具发展潜力的高新技术产业,已为人类的疾病防治带来更多的手段。在生物药物产业化进程中,质量控制与标准化研究作为转化医学的一部分,是确保其安全有效、质量可控的重要保障。; 高凯王军志; 关键词：生物技术药物药品监管

5种TNFα单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性的比较被引量：4: 2012年; 目的:比较5种以TNFα为治疗靶位的治疗性单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性。方法:以Anti-TNFαrhmMcAb为参比品,采用TNFα杀伤抑制法测定其他4种制品的TNFα杀伤抑制活性,剂量-反应曲线进行四参数拟合后,测定抑制1.0 ng·mL-1TNFα杀伤的半数有效浓度(EC50)。以Anti-TNFαrhmMcAb的EC50值除以待测样品EC50值计算样品的相对活性。结果:相对于Anti-TNFαrhmMcAb,TNFαⅡR-Fc、Anti-TNFαrhuMcAb、Anti-TNFαsrhmMcAb和Anti-TNFαarhuM-cAb的TNFα杀伤抑制活性分别为4860%,248%,505%,90%。结论:TNFα杀伤抑制方法可以快速测定治疗性抗TNFα单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性,不同制品的测定结果之间具有一定可比性,可以根据测定结果对不同制品的生物学活性进行评价和比较。; 张峰郭玮刘春雨孟淑芳王佑春; 关键词：抗肿瘤坏死因子Α 活性比较

应用成像毛细管等点聚焦技术分析重组人促红素的研究: 目的:建立成像毛细管等电聚焦分析重组人促红素的异构体和等电点的方法。方法 :应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术对重组人促红素成像毛细管等点聚焦分析。结果 :采用优化的成像毛细管等电聚焦电泳技术,可较好地分析重组人促红素...; 王丽周勇王军志; 关键词：重组人促红素等电点; 文献传递

液质联用法分析重组抗肿瘤抗病毒蛋白的一级结构被引量：7: 2011年; 目的通过液质联用法分析重组抗肿瘤抗病毒蛋白(乐复能)的一级结构。方法采用高效液相-电喷雾四级杆飞行时间质谱技术(High performance liquid chromatography-electrospray ionization-quadrupole-time of flight-mass spectrometry,HPLC-ESI-Q-TOF-MS)绘制乐复能经胰蛋白酶酶切后的液质肽图,并定位二硫键;采用电喷雾四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定乐复能的精确相对分子质量。结果乐复能液质肽图的22个理论酶切肽段中,有6个肽段(T2、T5、T12、T15、T19、T22)共7个氨基酸未被检测到,氨基酸覆盖率为96%;通过分析胰蛋白酶酶切液质肽图,发现1种二硫键连接方式:Cys1-Cys29、Cys99-Cys139;质谱测定相对分子质量为19 311.63,与理论相对分子质量(19 311.27)的相对误差为0.000 02%。结论建立了乐复能的液质肽图分析方法,为该类制品的质量控制及其参考品的研制提供了参考。; 李萌裴德宁陶磊李永红王兰高凯饶春明王军志; 关键词：液质联用重组蛋白质类氨基酸序列二硫键定位分子量

重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白(rhG-CSF-Fc)的质量研究被引量：2: 2012年; 目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。; 高凯王兰陶磊于雷李响史新昌刘兰饶春明; 关键词：反相高效液相色谱等电聚焦电泳生物学活性

成像毛细管等电聚焦电泳分析糖蛋白类生物技术药物被引量：3: 2012年; 目的建立成像毛细管等电聚焦电泳分析糖白蛋类生物技术药物的异构体和等电点的方法。方法应用优化的成像毛细管等电聚焦电泳技术,对3种糖蛋白类生物技术药物即聚乙二醇化重组人促红素(PEGlysated erythropoietin,PEG-EPO)、重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体(Recombinant human TNK mutant of tissue type plasminogen activator,rhTNK-tPA)和全人源化单抗A的异构体和等电点进行分析。结果采用优化的成像毛细管等电聚焦电泳技术,可较好地分析PEG-EPO、rhTNK-tPA和全人源化单抗A的等电点和异构体,该方法可靠、快速,具有较好的分离度和重现性。结论成像毛细管等电聚焦电泳技术可用于分析糖蛋白类生物技术药物的异构体和等电点,为保证糖蛋白类生物技术药物生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。; 王丽周勇王军志; 关键词：等电聚焦糖蛋白类生物技术电泳仪

重组人源化兔抗血管内皮生长因子单克隆抗体的抗原结合活性测定被引量：1: 2011年; 目的采用直接ELISA法测定重组人源化兔抗血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的抗原结合活性。方法以VEGF-Fc为包被抗原,采用直接ELISA法测定不同浓度重组人源化兔抗vEGF单抗参考品和供试品与抗原的结合活性,根据供试品及参考品的EC50值计算供试品的相对结合力,并分析该法的精密性。结果重组人源化兔抗VEGF单抗供试品及参考品的抗原结合均存在量效关系,且符合四参数方程。同一批次的供试品单抗原液的相对结合活性分别为参考品的(90.43±18.74)%、(123.56±18.40)%和(106.83±18.47)%,均值为(106.94±16.57)%。3次试验的变异系数分别为20.72%、14.89%和17.29%。同一批次的供试品成品的相对结合活性分别为(97.34±18.42)%、(123.30±11.08)%和(93.91±4.57)%,变异系数分别为18.93%、8.96%和4.87%。结论直接ELISA法精密性良好,操作简便,可用于重组人源化兔抗VEGF单抗抗原结合活性的常规检测。; 范文红毕华饶春明; 关键词：血管内皮生长因子类酶联免疫吸附测定

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国家科技重大专项(2009ZX09307-001)

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