国家教育部博士点基金(20030183068)
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 相关作者：孙宏晨苏涛张红卢东民刘超更多>>
- 相关机构：吉林大学口腔医院湖州师范学院美国国立卫生研究院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 绿荧光蛋白基因质粒表达载体对SACC-83的转染效率及瞬时表达特点被引量：1
- 2007年
- 目的:检测绿荧光蛋白基因(EGFP)质粒表达载体pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP对SACC-83的转染效率及瞬时表达,为应用这两种启动子诱导促凋亡基因转染SACC-83以发挥治疗作用提供依据。方法:实验于2004-07/2005-05在吉林大学口腔医学院口腔生物实验室完成。①在体外扩增并酶切鉴定pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP质粒。②以脂质体介导法转染pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP进入SACC-83细胞,根据质粒和脂质体比例不同分别转染6组,1组:1g/4L;2组:1g/8L;3组:1g/12L;4组:2g/4L;5组:2g/8L;6组:2g/12L。③应用荧光显微镜观察各组转染效率及瞬时表达情况,并进行统计学分析。结果:①质粒的检测及鉴定:质粒pACTERT-EGFP和pACCMV-EGFP经转化、酶切电泳证实,均出现约800bp的片段,与原作者提供的数据一致。②荧光显微镜观察:绿荧光蛋白在基因转染24h后开始表达,48～72h最高,1周后表达逐渐减弱。③荧光细胞数的统计学分析:对不同浓度质粒与脂质体转染72h的荧光细胞数进行方差分析,质粒与脂质体比例为1g/8L和2g/8L组荧光细胞数显著高于其余各组,其差异具有统计学意义,说明转染效率与脂质体和质粒的比例有关。结论:按照合适的质粒和脂质体比例,pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP转染SACC-83的效率可以达到30%,是转染SACC-83较为理想的瞬时表达载体。
- 苏涛
- 关键词：绿色荧光蛋白质类转染
- AdTERT-TRAIL对腺样囊性癌细胞株SACC-83靶向转基因作用的研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控TRAIL基因在端粒酶阳性的涎腺肿瘤细胞SACC-83中靶向表达的作用。方法通过同源重组构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,并转染SACC-83细胞和端粒酶阴性的HEL细胞,通过RT-PCR检测TRAIL基因表达,MTT法检测TRAIL基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果转染AdTERT-TRAIL后,TRAIL基因在SACC-83细胞中明显表达,对该肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,而且诱导细胞凋亡比率增加;而在HEL细胞中未能诱导TRAIL基因表达,对该细胞的增殖没有影响,也没有诱导明显的细胞凋亡。结论成功构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,对涎腺肿瘤细胞具有靶向转基因作用。
- 苏涛孙宏晨郑长玉张红卢东民
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子腺病毒涎腺肿瘤
- hTERT Promoter/Bax靶向性涎腺恶性肿瘤基因治疗系统的构建
- 2004年
- 目的 :构建hTERTPromoter/Bax靶向性涎腺恶性肿瘤基因治疗系统。方法 :采用氯化钙法在大肠杆菌DH5α中扩增pACTERT -EGFP和 pACCMV -Bax质粒。DNA提取纯化试剂盒提取细菌中生长的质粒 ,经电泳 ,紫外分光光度计检验后用BamHI,EcoRI核酸内切酶分别对这两个质粒进行单酶酶切。琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段 ,切取其中 8.38,0 .5 8kbp两个片段长度的凝胶。凝胶提取试剂盒提取其中所含DNA片断 ,T4DNA连接酶连接这两个片段 ,琼脂糖凝胶电泳检测连接结果。结果 :通过连接反应获得 8.96kbp的重组DNA片段。 结论 :成功构建hTERTPromoter/Bax重组表达单位。
- 苏涛孙宏晨欧阳喈
- 关键词：涎腺肿瘤基因治疗
- 涎腺肿瘤中Pax9基因的表达及其意义被引量：5
- 2006年
- 目的:检测正常涎腺组织及涎腺肿瘤中转录因子Pax9的表达。方法:采用免疫组化SABC法,研究Pax9在正常涎腺组织、多形性腺瘤、腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤、粘液表皮样癌和腺样囊性癌共48例中的表达情况。结果:除1例多形性腺瘤外,其余组织均表达Pax9。正常涎腺的腺泡细胞和导管内衬细胞、多形性腺瘤的上皮细胞、腺淋巴瘤的肿瘤上皮细胞和基底细胞腺瘤中Pax9弱阳性表达,差异没有显著性;而在增殖活跃的细胞如正常涎腺导管的基底细胞和恶性肿瘤细胞(粘液表皮样癌、腺样囊性癌)中表达增强,恶性肿瘤中Pax9的强阳性表达率明显增高,与正常和良性肿瘤相比具有显著差异(P<0.05)。结论:Pax9在涎腺肿瘤尤其是恶性肿瘤的发生过程中发挥重要的作用。
- 苗雷英李祥伟刘超王渝孙宏晨
- 关键词：涎腺肿瘤免疫组化基因表达
- 靶向转基因抑制涎腺腺样囊性癌增殖的实验研究
- 2007年
- 目的探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因在涎腺腺样囊性癌细胞(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)-83中表达及对 SACC-83增殖的影响。方法脂质体介导 pACTERT-TRAIL 转染 SACC-83和人胚肺成纤维细胞(human embryonic lungfibroblast,HEL),通过 RT-PCR 检测 TRAIL 表达,甲基噻唑基四唑法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 hTERT 启动子调控 TRAIL 基因在 SACC-83中明显表达,抑制其增殖(存活率62.80%),且诱导细胞凋亡比例增加(10.89%);而在 HEL 细胞中未能诱导 TRAIL 基因表达,对该细胞的增殖和凋亡无明显影响。结论 hTERT 启动子可诱导 TRAIL 基因在 SACC-83中特异性表达及诱导细胞凋亡。
- 苏涛孙宏晨臧光祥张红卢东民
- 关键词：转基因端粒酶
