新疆维吾尔自治区高校科研计划(XJEDU2004G10)
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 相关作者：林仁勇温浩王星张春桃王俊芳更多>>
- 相关机构：新疆医科大学第一附属医院新疆医科大学武警新疆总队医院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高校科研计划国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Em18.3重组蛋白的表达及其免疫诊断特性的研究被引量：7
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免疫诊断特性。结果:rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE电泳显示相对分子量为45kDa。Western blot结果表明,rEm18.3-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。对56例多房棘球蚴病(AE)、88例细粒棘球蚴病(CE)、24例其他寄生虫病、24例其他疾病和24例健康者共236份血清进行ELISA检测结果显示,对AE血清诊断的敏感性为10.7%,特异性为99.4%,阳性预测值85.7%,阴性预测值78.1%。结论:rEm18.3-GST免疫诊断价值较低,Em18抗原重要的表位可能位于1-40位氨基酸。
- 林仁勇张春桃温浩王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰无
- 关键词：泡球蚴免疫检测
- 泡球蚴Em18多克隆抗血清的制备和鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western blot法鉴定其特异性。结果:(1)SDS-PAGE检测表明,rEm18-GST蛋白得到成功表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。(2)纯化后获得高纯度的rEm18-GST蛋白。(3)ELISA结果表明,抗Em18抗血清的抗体滴度为1∶25600;Western blot结果表明抗Em18抗血清能与rEm18-GST蛋白发生特异性结合。结论:获得了特异性识别rEm18-GST蛋白的多克隆抗体,为进一步筛选Em18模拟抗原表位奠定基础。
- 王俊芳林仁勇张春桃王星王俨卢晓梅张琰张建龙温浩
- 关键词：泡球蚴
- 抗泡球蚴重组Em18抗原多克隆抗体的纯化与鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的:制备抗泡球蚴18(Em18)抗原多克隆抗体,纯化并鉴定。方法:表达并纯化rEm18-GST蛋白。用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体IgG,用Western blot及ELISA法检测并进行初步鉴定。结果:免疫制备获得兔抗rEm18-GST抗体,随着免疫次数的增加,抗体滴度不断升高,于第10周达到最高。ELISA检测抗体效价为1∶51200。Western blot及ELISA法鉴定表明Em18-GST抗体去除了与GST的交叉反应。结论:获得了去除与GST交叉反应的抗Em18多克隆抗体,为进行噬菌体肽库筛选奠定基础。
- 杨晨晨张蓓王俊芳张春桃王俨许晏王星张静萍张琰温浩林仁勇
- 关键词：泡球蚴多克隆抗体纯化
- 应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的:从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据。方法:用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较。结果:经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性。结论:所得肽段可能是Em18抗原模拟表位。
- 张蓓杨晨晨林仁勇王俊芳张春桃王俨卢晓梅张静萍张琰许晏温浩
- 关键词：噬菌体肽库模拟表位
- 泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化方法的优化被引量：3
- 2007年
- 目的:筛选和优化泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中表达和纯化的方法,为进一步筛选Em18抗原表位奠定基础。方法:原核表达pET41a-Em18重组质粒,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达,获得rEm18-GST蛋白,采用不同的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别采用GST柱、His柱及两者结合方法,改变不同的平衡、洗涤和洗脱缓冲液浓度,纯化rEm18-GST蛋白。结果:(1)rEm18-GST蛋白在相对分子质量为50kDa处有表达条带,蛋白表达量随诱导时间的延长而增加;(2)超声程序为工作1s,间歇3s,每个循环时程10min,加入蛋白酶抑制剂,可降低目的蛋白的降解;(3)采用单纯His柱可获得回收量高、纯度高的rEm18-GST蛋白。结论:(1)对含有GST-tag和His-tag双重标签重组蛋白的纯化,应用His柱更有效,更经济;(2)建立和优化一套从大肠杆菌细胞中分离纯化重组Em18蛋白的有效方法。
- 王俊芳王星张春桃王俨林仁勇卢晓梅张琰张建龙温浩
- 三种人类8型疱疹病毒特异性抗原表达及复合抗原血清学检测方法的建立被引量：3
- 2007年
- 目的建立人类8型疱疹病毒(HHV-8)血清学检测办法。方法利用E.coli系统合成HHV-8三个抗原性较强的融合蛋白:K8.1,ORF65和ORF73 C,作为检测抗原,阳性血清为本地12份卡波西肉瘤患者血清和32份AIDS相关型卡波西肉瘤患者血清;阴性血清为20份皮肤肿瘤患者血清和77份15岁以下儿童血清。以Western印迹及ELISA法确定各重组蛋白免疫原性和该混合抗原ELISA法的敏感度和特异度。结果获得高纯度的3种8型疱疹病毒特异重组蛋白,均具备较强的抗原特性。应用上述复合抗原ELISA法与传统免疫荧光法共同筛查同批次阳性和阴性血清,发现前者敏感度远高于后者,分别为81.8%和34.4%,特异度则为97.9%。结论K8.1、ORF65、ORF73 C是建立HHV-8血清学检测方法较佳的候选抗原,有更高的敏感度和特异度。
- 王星何方平卢晓梅赵淑君林仁勇何斌温浩
- 关键词：抗原重组融合蛋白质类
- 泡球蚴体外培养方法的改进及培养产物的初步鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的对泡球蚴体外培养模型进行改进,并对培养产物进行初步鉴定。方法培养肝癌细胞（Bel7404）,留取细胞上清液。取泡球蚴组织,用含肝癌细胞培养上清的DMEM完全培养基于37℃5%CO2培养箱中培养27 d。实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡最大、最小直径,绘制生长曲线。培养结束后,取培养囊泡壁及其囊液分别进行DNA鉴定和蛋白定量。结果泡球蚴在含肝癌细胞上清液的DMEM中能生长,囊泡直径0.5-5.0mm;囊液蛋白含量为1.8 mg/ml,囊壁DNA经PCR扩增出Em特异性200 bp条带。结论1）泡球蚴体外生长因素可不依赖培养细胞本身;2）由于体外与动物体内的培养环境的不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白含量有所差异;3）DNA检测证明培养产物为泡球蚴;4）利用肝癌细胞上清液建立泡球蚴体外培养改良模型具有一定的可行性。
- 马海龙张亚楼周晓涛吕国栋林仁勇温浩
- 关键词：体外培养
