国家自然科学基金(30760159)
- 作品数：9 被引量：63H指数：5
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- 荧光原位杂交技术及其在植物染色体基因定位中的应用
- 荧光原位杂交技术(Fluorescence in Situ Hybridization,FISH)是20世纪80年代末由放射性原位杂交发展起来的一种非放射性原位杂交技术。FISH综合应用细胞遗传学和分子生物学的原理,成为...
- 石凤敏云锦凤赵彦
- 关键词：荧光原位杂交染色体基因定位
- 文献传递
- 蒙古冰草LEA3基因RNAi表达载体的构建
- 本研究以蒙古冰草LEA3基因为靶标,设计2对分别含有XhoI-EcoRI和HindIII-ClaI酶切位点的引物S2、N2,通过RT-PCR扩增获得目的基因LEA3的部分cDNA片段(467bp),并将扩增的2个基因片段...
- 赵彦云锦凤石凤敏刘亚玲王俊杰张众
- 关键词：蒙古冰草RNA干涉
- 文献传递
- 氯化钠胁迫下3种披碱草属牧草生理特性的研究被引量：25
- 2010年
- 为研究披碱草属(Elymus Linn.)3种优良牧草在盐胁迫下生理指标的变化,用浓度为0%,0.5%,1.0%,1.5%,2.0%的氯化钠溶液分别处理老芒麦(Elymus sibiricus L.)、披碱草(Elymus dahuricus Turcz.)和加拿大披碱草(Elymus canadensis L.)的幼苗,处理7 d后测定叶片组织相对含水量(RWC)、细胞膜透性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及游离脯氨酸(Pro)含量等抗性指标。结果表明:在盐胁迫下,随着盐浓度的增加,各材料的RWC,SOD活性呈下降趋势;电导率,MDA含量随盐浓度增加呈上升趋势;Pro含量为先上升后下降的单峰曲线。
- 刘锦川云锦凤张磊
- 关键词：披碱草属盐胁迫生理指标
- 蒙古冰草MwLEA3基因植物表达载体的构建
- 2010年
- 以植物双元表达载体pCAMBIA2300为基础,设计分别带有酶切位点XbaI和PstI的一对引物,从克隆载体pGM-T-MwLEA3中扩增到目的基因MwLEA3。用XbaI和PstI双酶切该目的基因及表达载体pCAMBIA2300,回收后利用T4DNA连接酶连接,获得植物表达载体pCAM-MwLEA3。通过冻融法将所获得的植物表达载体重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404菌株中,为该基因的功能鉴定及通过农杆菌介导法将MwLEA3基因导入植物提高相关抗性奠定了基础。
- 石凤敏云锦凤赵彦逯晓萍
- 关键词：蒙古冰草植物表达载体
- 蒙古冰草Actin基因片段的克隆及序列分析被引量：6
- 2009年
- 旨在利用同源序列法分离蒙古冰草(Agropyron mongolicumKeng)Actin基因同源片段,为研究其他基因在蒙古冰草中的表达和调控提供内标参照。根据禾本科植物小麦Actin基因(AB181991)的保守序列设计2对引物A4和A5,采用RT-PCR扩增蒙古冰草的Actin基因片段,分别得到656 bp和848 bp的片段,使用DNAman和DNAuser等分子生物学软件进行序列分析,将2个片段的重复序列合并后获得一段长度为962 bp的基因片段,编码237个氨基酸,将克隆的Actin基因片段命名为MwACT。该序列与其它植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在80%以上,其中与小麦、大麦的同源性达到94%;与氨基酸序列的同源性均在90%以上。
- 赵彦云锦凤石凤敏刘亚玲
- 关键词：蒙古冰草ACTIN基因克隆
- 蒙古冰草MwLEA3基因ihpRNA表达载体的构建
- 2011年
- 采用RT-PCR方法从蒙古冰草中克隆出MwLEA3基因的特异性cDNA序列,并连入克隆载体pGM-T中。根据植物中ihpRNA原理,成功构建了35S启动子调控的具有MwLEA3基因反向重复结构的ihpRNA表达载体pART27-MwLEA3(HB)-MwLEA3(EX),并通过冻融法转化将MwLEA3基因的ihpRNA表达框架成功导入根癌农杆菌LBA4404中。
- 石凤敏云锦凤赵彦
- 关键词：蒙古冰草
- 蒙古冰草肌动蛋白基因片段的克隆与组织表达分析被引量：13
- 2011年
- 本研究利用同源序列法分离蒙古冰草Actin基因同源片段,并分析蒙古冰草Actin基因在根、茎、叶中的表达特征。根据禾本科植物小麦Actin基因的保守序列设计1对引物A1,经RT-PCR扩增,从蒙古冰草cDNA中克隆到1个长度为541 bp的Actin基因片段,使用DNAman和DNAUSER等分子生物学软件进行序列分析,结果表明,该序列编码179个氨基酸,并推测该片段具有Actin超基因家族的保守结构域,含有1个ATP结合位点,抑制蛋白结合位点和胶溶蛋白结合位点;该基因片段的氨基酸序列与小麦Actin基因的同源性为99%,与玉米同源性为96%,与水稻同源性为93%。组织器官特异性表达分析结果表明,该基因在根、茎、叶中的表达量恒定。将该基因片段命名为MwACT1,并在GengBank中登记注册,登录号为FJ490410。
- 云锦凤赵彦石凤敏王俊杰
- 关键词：蒙古冰草ACTIN基因克隆
- 蒙古冰草基因组类反转录转座子基因同源序列的克隆与序列分析被引量：4
- 2010年
- 以蒙古冰草DNA为模板,采用PCR扩增的方法从蒙古冰草（Agropyron mongolicumKeng）中分离得到了一个类反转录转座子基因序列,命名为MwRRT（GenBank：GQ855806.1）。序列分析结果表明：该序列长为1 005 bp,包含780 bp的开放阅读框,编码260个氨基酸。经GenBank中BLAST程序分析表明,该片段98~255处氨基酸与水稻（Oryza sativa）预测逆转录转座子蛋白Ty3-gypsy亚类、预测种属特异抗原—聚合酶（Gag-Pol）前体和预测聚合酶氨基酸同源性为47%;与高粱（Sorghum bicolor）的预测GAG-POL前体氨基酸同源性为52%。
- 石凤敏云锦凤赵彦张瑞霞
- 关键词：蒙古冰草反转录转座子
- 蒙古冰草Lea3抗旱基因片段的分离与鉴定被引量：7
- 2008年
- 研究旨在利用同源序列法分离蒙古冰草抗旱基因同源片段。根据已知禾本科植物抗旱基因Lea第3组的保守区段设计一对简并引物,采用PCR方法对蒙古冰草幼苗的基因组DNA进行扩增。获得了1个蒙古冰草的抗旱基因Lea3基因片段,长度为497 bp,包含124 bp的非翻译区,共编码124个氨基酸。核苷酸序列分析表明,该序列与小麦抗旱基因LEA第3组的Wrab19同源性为93%,与小麦受ABA诱导的WRAB1基因同源性为93%;与一个来源于玉米mRNA的逆境胁迫基因克隆9124同源性为96%;与大麦受ABA诱导的pHVA1基因同源性为94%;与大麦HVA1基因同源性为91%。Southern杂交表明该基因在蒙古冰草基因组中以基因家族形式存在。
- 赵彦云锦凤石凤敏高翠萍
- 关键词：蒙古冰草LEA基因同源序列
- 野生黄花苜蓿冷诱导基因克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 根据紫花苜蓿抗寒基因cas15B(登录号:L12462)的cDNA序列,设计1对特异引物,以经过低温胁迫的黄花苜蓿总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获得了550bp的cDNA片段。测序和序列分析结果表明,扩增片段长度为550bp,编码159个氨基酸。主要由Gly(甘氨酸)、Glu(谷氨酸)、His(组氨酸)、Lys(赖氨酸)这4种氨基酸组成,占总量的70%。含1个重复了5次的10肽基序,其序列为Lys-Gly-Glu-Gln-His-Gly-His(Phe)-Val(Leu)-Gly-Gly。经序列比较分析,该片段与紫花苜蓿冷诱导基因CAS15B的核苷酸、氨基酸的同源性均为90%,命名为MfCAS15-1。亚细胞结构定位分析结果显示,MfCAS15-1是一种定向到核的蛋白,在调节或维持核的结构与功能方面起作用。本研究在黄花苜蓿中成功获得了抗寒基因同源序列,为最终克隆黄花苜蓿MfCAS15-1抗寒基因全长奠定了基础。
- 刘亚玲王俊杰云锦凤赵彦石凤敏
- 关键词：黄花苜蓿冷诱导基因克隆
