石家庄市科技局“科技支撑计划项目”(09150293A)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 犬瘟热病毒单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2013年
- 将从水貂中分离的犬瘟热病毒(CDV)HB株,以培养纯化的犬瘟热病毒HB株免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,通过ELISA筛选,获得3株能稳定分泌抗犬瘟热病毒结构蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。3株单克隆抗体菌属于IgG1亚类,其腹水效价可达到1∶51 200和1∶204 800,细胞培养上清液效价可达到1∶256和1∶512。ELISA分析表明,单抗仅与CDV发生特异性反应,而与犬细小病毒(CPV)和犬腺毒(CAV)没有交叉反应;荧光免疫染色检测进一步表明单克隆抗体的特异性好。该特异性单抗的制备为建立有效检测犬瘟热病毒感染的方法奠定基础。
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- 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体
- 犬细小病毒(CPV-2)的分子生物学特性与进化被引量：2
- 2013年
- 对犬细小病毒的分子生物学特点和进化规律进行了综述,阐述了犬细小病毒分子生物学特点和进化两者之间的关系,对我国在犬细小病毒方面的未来研究工作进行了展望。
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- 关键词：犬细小病毒分子生物学特点进化
- 检测犬瘟热病毒和犬细小病毒复合型胶体金免疫层析试纸的研制被引量：2
- 2013年
- 为了制备检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)复合型胶体金免疫层析试纸,试验采用辛酸-硫酸铵法纯化获得的单克隆抗体样品,采用一膜包被2个抗体的方法,用混合后的金标记抗貉源细小病毒VP2单克隆抗体和胶体金标记抗水貂源犬瘟热病毒单克隆抗体作为示踪物,建立了CPV和CDV感染快速鉴别诊断试纸条。结果表明:本方法特异性强,灵敏度高,且操作简便、结果判定直观,可以用于貉、貂、狐等毛皮动物CPV和CDV感染的检测与鉴别诊断。
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- 关键词：犬瘟热病毒犬细小病毒单克隆抗体
- 抗酵母表达犬细小病毒蛋白VP2的单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2012年
- 以纯化的酵母重组表达的犬细小病毒VP2单位免疫BALB/C小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,通过ELISA方法筛选,获得4株能稳定分泌抗犬细小病毒CPV结构蛋白VP2的单克隆抗体杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体中,2株属于IgG2b亚类,2株属于IgG1亚类,其腹水效价可达到1∶51 200和1∶204 800,细胞培养上清液效价可达1∶256、1∶512。ELISA分析表明,这些单抗仅与CPV及其VP2发生特异性反应,而与CDV和CAV-1及CAV-2没有交叉反应;荧光免疫染色病毒检测进一步表明单克隆抗体的特异性效果好。这些特异性单抗的制备为建立有效的检测犬细小病毒感染奠定了基础。
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- 关键词：犬细小病毒单克隆抗体
- 犬细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和在毕赤酵母中表达被引量：7
- 2013年
- 表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV-VP2),用于重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并为犬细小病毒病的诊断奠定基础。采用PCR方法对CPV-VP2基因进行扩增,将CPV-VP2基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZAA中,构建真核重组表达载体pPICZAA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,甲醇诱导表达CPV-VP2,SDS-PAGE和Western-blotting鉴定表达蛋白。结果,成功扩增了CPV-VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZAA-VP2,在毕赤酵母菌中表达出约68 000蛋白。Western-blotting鉴定表明,表达蛋白为目的蛋白VP2。表达菌株扩大表达体系于培养基中培养,上清液用70%过硫酸铵4℃沉淀浓缩,采用His选择镍-亲和层析柱分离纯化获得重组的酵母表达的带组氨酸标签的VP2蛋白,表达量约3mg/L。结果表明,在毕赤酵母中成功地表达了CPV-VP2蛋白,且能被犬细小病毒VP2单克隆抗体特异识别。
- 贺英史秋梅潘素敏张艳英邵欣华
- 关键词：毕赤酵母真核表达
