湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目(T200811)
- 作品数：17 被引量：29H指数：4
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- 相关机构：郧阳医学院附属人民医院湖北医药学院武汉大学更多>>
- 发文基金：湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PEP-1-SOD1融合蛋白抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ型胶原的合成被引量：3
- 2013年
- 目的研究穿透肽(PEP-1)介导的铜-锌超氧化物歧化酶1(SOD1)(PEP-1-SOD1)融合蛋白对血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFbs)Ⅰ型胶原合成的影响,并探讨其机制。方法利用基因工程技术表达和纯化PEP-1-SOD1融合蛋白。提取原代大鼠CFbs并传代培养,采用2～5代细胞进行实验,实验分为对照组、ANGⅡ诱导组、SOD1预处理组和PEP-1-SOD1预处理组。SOD1预处理组和PEP-1-SOD1预处理组细胞分别以2μmol.L-1的SOD1和PEP-1-SOD1预处理2 h后,再给1μmol.L-1的ANGⅡ诱导24 h,用免疫荧光法检测细胞内超氧阴离子(O2-)水平,微量丙二醛(MDA)检测试剂盒检测各组细胞MDA含量。结果 Western blot和细胞免疫荧光结果显示PEP-1-SOD1成功穿透入CFbs;Western blot结果显示,与ANGⅡ诱导组比较,PEP-1-SOD1预处理组Ⅰ型胶原和α平滑肌肌动蛋白表达显著降低(P<0.01),细胞内O2-和MDA水平也显著降低(P<0.01)。结论 PEP-1-SOD1融合蛋白穿透入大鼠心脏CFbs内,通过降低细胞内O2-水平,抑制CFbs的激活,减少Ⅰ型胶原的合成。
- 杨波谭利国张蕾郑飞孔霞郭凌郧杨建业王家宁
- 关键词：心脏成纤维细胞
- PEP-1超氧化物歧化酶融合蛋白对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨PEP-1超氧化物歧化酶(SOD1)融合蛋白对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡指数、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 SD大鼠40只,制作心肌缺血再灌注模型,分为假手术组、缺血再灌注组、PEP-1-SOD1 100、300和500 μg组,每组8只。TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡指数(AI)及Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果假手术组AI、Bax及Bcl-2蛋白表达水平均较低。PEP-1-SOD1各组AI和Bax蛋白的表达较缺血再灌注组明显降低,Bcl-2蛋白的表达明显增加,Bax/Rcl-2比值明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论 PEP-1-SOD1可抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡,原因可能为其减轻氧化应激、下调Bax和上调Bcl-2蛋白表达水平。
- 张友恩王家宁唐俊明杨建业郭凌郧黄永章付守芝
- 关键词：心肌再灌注细胞凋亡超氧化物歧化酶
- PEP-1介导过氧化氢酶对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用
- 2009年
- 目的:研究细胞穿透肽PEP-1携带过氧化氢酶(CAT)穿透大鼠离体心肌的能力,并探讨PEP-1-CAT融合蛋白预处理对大鼠离体心肌缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,随机分为5组(n=10):缺血-再灌注组(I/R组)行平衡30 min、停灌30 min与再灌注60 min,CAT组、PEP-1-CAT融合蛋白预处理组(A、B、C、D组)在平衡15 min后依次以10,5,10,20μmol/L的融合蛋白预处理15 min,停灌、复灌与I/R组相同。记录各组左室舒张末压(LVEDP)、左室收缩压(LVSP)、左室内压最大变化速率(±dp/dtmax)及冠脉流量(CF)变化,测定平衡15 min时、再灌注15 min时冠脉流出液乳酸脱氢(LDH)活性。测定再灌注60 min时心肌丙二醛(MDA)含量。结果:PEP-1-CAT融合蛋白能高效转导入离体心肌组织并呈现剂量依赖性。在平衡15 min末,各组LVEDP、LVSP、±dp/dt max以及LDH活性比较差异无统计学差异(P>0.05)。与I/R组比较,B、C、D组在再灌注后各时间点LVEDP降低(P<0.01),LVSP、±dp/dt max以及CF升高(P<0.01),灌注15 min时冠脉流出液LDH活性降低(P<0.01),再灌注后60 min心肌MDA含量降低(P<0.01)。CAT处理组所有结果和对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:PEP-1-CAT融合蛋白能高效转导入离体心肌织并对大鼠离体心肌缺血-再灌注损伤具有明显的保护作用,将为其治疗心肌缺血再灌注损伤奠定坚实的实验基础。
- 王磊王家宁柯尊平黄永章唐俊明杨建业
- 关键词：再灌注损伤过氧化氢酶氧自由基
- PEP-1-SOD1融合蛋白转导入大鼠肝脏组织的能力及酶活性被引量：2
- 2008年
- 目的研究PEP-1-SOD1融合蛋白转导入大鼠肝脏组织的能力及其酶活性。方法实验分为SOD1组和PEP1-SOD1组,分别经尾静脉注射500μgSOD1和500μgPEP-1-SOD1融合蛋白入大鼠体内,于0.5,1,2,4,8和24h时间点取肝脏(n=6,每组,每个时间点)。免疫荧光技术检测PEP-1-SOD1的转导能力。黄嘌呤氧化酶法测定肝脏组织SOD1活性。结果SOD1蛋白不能进入肝脏组织内。PEP-1-SOD1可转导入肝脏组织内,SOD1活性于注射后0.5h开始升高,1h达高峰,持续存在达24h,两组各个时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。SOD1组内各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PEP-1-SOD1以天然酶活性形式转导入肝脏组织,为进一步的动物模型实验及临床疾病进行蛋白质治疗提供理论基础。
- 张友恩王家宁唐俊明杨建业郭凌郧黄永章付守芝
- 关键词：细胞穿透肽缺血再灌注损伤锌-超氧化物歧化酶
- YARA介导增强型绿色荧光蛋白穿透人血管平滑肌细胞
- 2012年
- 目的:研究细胞穿透肽YARA介导大分子蛋白穿透人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cells,HVSMC)细胞膜的能力。方法:用基因工程的方法制备并纯化YARA-EGFP融合蛋白,将其和培养的人平滑肌细胞共同孵育,在荧光显微镜下直接观察YARA介导目的蛋白EGFP转导入人平滑肌细胞的能力。结果:荧光显微镜下观察到,荧光蛋白穿透细胞膜进入并分布在人血管平滑肌细胞内。结论:YARA能有效携带目的蛋白进入人血管平滑肌细胞,这为将来用细胞穿透肽YARA介导有生物活性的大分子抗血管平滑肌细胞增殖,进行糖尿病血管病变的蛋白治疗奠定了基础。
- 陈思思王家宁黄永章郭凌郧孔霞
- 关键词：细胞穿透肽增强型绿色荧光蛋白蛋白转导人血管平滑肌细胞糖尿病血管病变
- PEP-1-CAT融合蛋白预处理减轻在体大鼠心肌缺血再灌注损伤
- 2011年
- 氧自由基学说是心肌缺血再灌注损伤的关键性机制。过氧化氢酶（catalase,CAT）是机体三大抗氧化酶之一,但它是生物大分子,不能有效穿透细胞,从而限制了它在缺血再灌注损伤防治中的应用。利用基因工程手段纯化出了PEP-1-CAT融合蛋白,且成功将此蛋白转导入细胞内,明显减轻了过氧化氢诱导细胞的氧化损伤[1]。本实验利用在体大鼠,
- 张永军王家宁唐俊明黄永章杨建业郭凌郧郑飞
- 关键词：心肌缺血再灌注损伤融合蛋白在体大鼠预处理自由基学说
- PEP-1-CAT融合蛋白预处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用被引量：5
- 2010年
- 目的:研究PEP-1-CAT融合蛋白预处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、低剂量预处理组(I/R+100μgPEP-1-CAT)、中剂量预处理组(I/R+300μgPEP-1-CAT)、高剂量预处理组(I/R+500μgPEP-1-CAT)。假手术组和缺血/再灌注组预先注射1mL的0.9%氯化钠溶液,低中高剂量预处理组分别注射100、300、500μg的PEP-1-CAT融合蛋白,7h后结扎冠状动脉前降支1h,再灌注2h后,检测心肌组织中的丙二醛(MDA)和血液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)含量,TTC染色测定心肌梗死面积,一步法TUNEL测定凋亡率,免疫荧光测定凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:与I/R组相比,低中高剂量预处理组显著减少心肌梗死面积(P<0.05或P<0.01),减少MDA的形成(P<0.01)和LDH、CK的释放,使凋亡率下降(P<0.01),下调Bax的表达,上调Bcl-2的表达,使Bax/Bcl-2比值下降。结论:PEP-1-CAT融合蛋白预处理能够明显减少心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与PEP-1-CAT融合蛋白具有抗氧化、抗凋亡作用有关。
- 张永军王家宁唐俊明黄永章杨建业郭凌郧孔霞郑飞
- 关键词：PEP-1过氧化氢酶BAX
- 细胞穿透肽PEP-1介导人过氧化氢酶转导入在体大鼠心肌组织被引量：4
- 2009年
- 目的:观察PEP-1介导CAT转导入心肌组织的能力,检测转导的CAT是否具有天然活性.方法:用基因工程手段表达并纯化出PEP-1-CAT和CAT融合蛋白.以生理盐水为对照,分别从SD大鼠尾静脉注射500μg PEP-1-CAT和CAT融合蛋白,在0.5,1,2,4,8,24 h时将其处死,取其心脏,免疫荧光及Western Blot检测CAT的转导能力,用试剂盒检测心肌CAT的酶活性.结果:SDS-PAGE和Western Blot证实目的蛋白PEP-1-CAT和CAT得到了高表达,且纯度在90%左右.生理盐水组及CAT组,荧光显微镜下均未见到绿色荧光,Western Blot亦未检测到目的蛋白;PEP-1-CAT各组均可观察到绿色荧光,且8 h时强度最大,同时Western Blot也检测到了目的蛋白,8 h时量最多;酶活性检测显示,CAT组与生理盐水对照组差别无统计学意义,而PEP-1-CAT组随着时间的延长,心肌组织中CAT的活性逐渐增加,在8 h时达到峰值,为对照组的4.20倍.结论:PEP-1能够介导CAT以天然活性方式转导入大鼠心肌组织,且其转导呈时间依赖性.
- 张永军王家宁唐俊明杨建业郭凌郧黄永章
- 关键词：PEP-1过氧化氢酶心肌再灌注损伤
- PEP-1-SOD1对离体缺血再灌注损伤大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
- 2011年
- 目的:研究细胞穿透肽PEP-1介导人铜锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD,SOD1)对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)细胞凋亡的影响。方法:采用Langendorff灌流系统对离体大鼠心脏进行停灌-复灌建立心肌缺血再灌注损伤模型。大鼠随机分为对照组、SOD1蛋白预处理组,25、50、100μmol/L PEP-1-SOD1蛋白预处理组。复灌结束后,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫荧光法检测心肌组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组及SOD1组相比,各PEP-1-SOD1组心肌细胞凋亡指数(AI)显著下降,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:PEP-1-SOD1融合蛋白可抑制离体心脏缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax表达及下调Bcl-2表达有关。
- 柯尊平王家宁王磊唐俊明杨建业黄永章张宏考
- 关键词：心肌缺血再灌注损伤PEP-1
- 细胞穿透肽PEP-1介导过氧化氢酶转导大鼠心肌H9C2细胞被引量：4
- 2010年
- 目的:探索细胞穿透肽PEP-1介导的人过氧化氢酶转导入H9C2细胞的能力。方法:利用基因工程方法表达和纯化His-tag-PEP-1-CAT及His-tag-CAT融合蛋白后,与体外培养的H9C2细胞株共孵育,利用免疫细胞荧光技术和Westernblot检测PEP-1-CAT融合蛋白是否转导入H9C2细胞内;并检测H9C2细胞内的过氧化氢酶活性。结果:制备的PEP-1-CAT融合蛋白纯度为90%以上,其浓度达0.501mg/mL;PEP-1介导的CAT融合蛋白能高效转导入H9C2细胞内,呈时间及剂量依赖性,6h时达峰值;转导入H9C2细胞内的融合蛋白的过氧化氢酶活性亦呈现出时间及剂量依赖的特点。结论:PEP-1-CAT能高效稳定转导入H9C2细胞内,为PEP-1介导的过氧化氢酶防治心肌缺血/再灌注损伤研究奠定基础。
- 黄光庆王家宁唐俊明郭凌郧郑飞孔霞
- 关键词：过氧化氢酶H9C2细胞
