国家自然科学基金(21177091)
- 作品数：21 被引量：43H指数：4
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- 多重引物HRMA对成骨不全患者COL1A1/2基因突变的筛查与分析
- 2020年
- 目的建立多重引物高分辨熔解曲线分析(high resolution melting analysis,HRMA)方法并运用该方法筛查两例成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)COL1A1/2的突变基因。方法收集两例OI患者临床资料,采集患者及50例正常对照的血液标本。设计COL1A1、COL1A2基因103个外显子所对应的引物,将满足一定条件的两对引物相互配对,与单份样本DNA混合作为扩增体系。运用HRMA筛查产物突变情况,基因测序确定突变位点。结果本研究中共涉及到COL1A1和COL1A2的103个外显子,其中成功配对39对,未配对成功的有3个COL1A1外显子和22个COL1A2外显子,成功率为75.73%。先证者1筛查结果HRMA熔解曲线在COL1A141号外显子上存在异常,测序结果为c.2877delT杂合突变,即cDNA2877位碱基T缺失,编码的缬氨酸变成色氨酸。先证者2筛查结果HRMA熔解曲线在COL1A116号外显子上存在异常,测序结果为c.1028delC杂合突变,即cDNA1028位碱基C缺失,编码的脯氨酸变成亮氨酸。两种突变类型在中国人群中均未见报道,为新发现的两种剪切突变,且与传统HRMA筛查结果一致。结论多重引物HRMA方法在传统HRMA基础上进行了创新,将两对引物与单份样本DNA混合作为扩增体系,HRMA筛查产物突变情况,且与传统HRMA筛查结果一致,具有一定创新性和可行性,为成骨不全患者基因突变及其他遗传病致病基因的筛查提供了新的思路。
- 杨立张天可周怀蔚鞠明艳白雪李克秋任秀智李光
- 关键词：成骨不全点突变
- 成骨不全患儿COL1A1基因第45外显子两个突变位点的筛查及分析被引量：1
- 2016年
- 目的应用聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线分析（polymease chain reaction-high-resolutionmelting analysis, PCR-HRMA）技术筛查成骨不全症（osteogenesis imperfecta, OI）患者COL1A1/COL1A2基因的突变，并探讨突变位点与疾病的关系。方法采集家系成员（患儿、患儿父母）以及50名正常对照的血液样本，应用PCR-HRMA技术筛查患儿家系及正常对照者的COL1A1／COLIA2基因突变，并用基因测序验证。应用蛋白预测软件PolyPhen、SIFT及AlignGVGD对两个杂合突变进行预测。结果该患儿及其父母COL1A1基因第45外显子区域的PCR-HRMA结果显示异常，标准熔解曲线和差异熔解曲线与正常对照比较均存在明显差异。测序结果显示，患儿COL1A1基因第45外显子区域发生两个杂合突变（c．3235G〉A、c．3247G〉A），临床诊断为Ⅳ型OI。c．3235G〉A来源于患有OI的父亲，使α螺旋结构域1079位氨基酸由甘氨酸（Gly）突变为丝氨酸（Ser）。c．3247G〉A来源于表型正常的母亲，使1083位氨基酸由丙氨酸（Ala）突变为苏氨酸（Thr）。50名正常对照均未发现这两种突变。3种蛋白预测软件PolyPhen、SIFT及AlignGVGD均预测c．3235G〉A突变可能影响蛋白的功能。而c．3247G〉A突变，PolyPhen软件预测其可能为良性。结论COL1A1基因第45外显子上同时存在c．3235G〉A、c．3247G〉A突变的病例在人类胶原突变数据库中未见报道。COL1A1基因c．3235G〉A突变可能是导致该患儿成骨不全的主要原因。
- 鞠明艳张天可白雪任秀智李克秋李光
- 关键词：成骨不全基因诊断
- PCR-HRM分析筛查成骨不全一家系患儿基因突变被引量：1
- 2014年
- 目的采用PCR-高分辨率熔解曲线(HRM)分析筛查成骨不全(OI)一家系患儿(先证者)COL1A1基因突变位点,探讨其基因型与临床表型的联系。方法对先证者进行家族史及临床资料的调查,采集先证者、家属及50名正常对照者血液标本,应用PCR-HRM分析筛查先证者及正常对照者COL1A1基因突变,基因测序确证突变位点。结果先证者COL1A1基因17外显子筛查结果异常,其熔解温度(Tm)值比正常对照者Tm值低约0.4℃。先证者与正常对照者的标准熔解曲线及差异熔解曲线均有明显差异。测序结果为c.1138G>A,突变导致380位氨基酸由甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser):p.(Gly 380 Ser),为错义突变。先证者父亲、祖母均具有相同突变位点。先证者母亲及正常对照者基因测序结果无此突变。该突变在中国人群中未见报道。该家系遗传特征为常染色体显性遗传,先证者临床诊断为Ⅳ型OI,临床表型较严重。结论 PCR-HRM分析是有效的OI基因筛查新方法。COL1A1基因c.1138G>A突变在中国人群中为新发现的突变位点。α螺旋结构域Gly被替换可能导致较严重的临床表型。
- 白雪李克秋任秀智何晓波王毅官士珍景亚青李光
- 关键词：成骨不全遗传筛查点突变系谱高分辨率熔解曲线分析
- 高分辨率熔解曲线分析在成骨不全相关基因突变筛查中的应用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨高分辨率熔解曲线分析（HRMA）在成骨不全（OI）相关基因突变筛查中的应用价值。方法收集2012年3月至12月于天津医院住院的5例0I患儿临床资料。采集患儿、有家族史患儿父母及查体健康者（正常对照）血液标本，PCR—HRMA筛查患儿COL1A1／COL1A2基因所有外显子及其侧翼序列，基因测序确定突变位点。有家族史患儿父母基因测序进行验证。结果PCR-HRMA显示，5例患儿分别在COL1A1基因11、39、8外显子及COL1A2基因19外显子区域结果异常，患儿熔解曲线与正常对照比较存在差异，提示患儿基因变异，标准熔解曲线显示患儿基因型均为杂合子。5例患儿基因测序结果分别为COL1A1基因c．768dupC、C．2644c〉T、C．635G〉A以及COL1A2基因c．982G〉A、C．948C〉T。患儿1、2基因突变导致提前形成终止密码子，临床诊断均为Ⅰ型OI。患儿3、4基因突变均使α螺旋结构域甘氨酸（Gly）被替代，临床诊断为Ⅳ型OI。患儿5基因变异未造成氨基酸的改变，该变异不是导致0I的原因，可能的致病原因有待研究。结论PCR—HRMA因具有成本低、操作简便快速、高通量、无污染等优势，成为0I基因筛查有效的新方法。COL1A1基因突变C．768dupC为新发现的突变位点。
- 白雪李克秋李光任秀智常小丽张天可官士珍王毅
- 关键词：成骨不全高分辨率熔解曲线
- 持久性有机污染物暴露人群DNA损伤修复基因表达的研究被引量：1
- 2014年
- 目的了解电子垃圾处理区域人群中持久性有机污染物(POPs)暴露与DNA损伤修复的关系。方法于2011年11月,检测某电子垃圾处理区域居民(暴露组,n=23)及非暴露地区居民(非暴露组,n=25)外周血POPs含量。以RNA测序比较两组血样中DNA损伤修复通路中126个基因的表达情况。结果暴露组人群外周血多氯联苯(PCBs)、多溴联苯醚(BDEs)、得克隆(DP)的含量高于非暴露组;17个基因出现差异表达,其中NEIL3、EXO1、MAPK12、TP73表达出现统计学差异。17个差异表达基因中9个基因下调,8个基因上调。MAPK12、EXO1、NTHL1、GADD45G、RAD51、RAD51B仅在女性暴露组和非暴露组间出现差异;而RAD54L、DMC1、BBC3、UNG、XRCC6BP1、TP73仅在男性出现差异表达。结论本次调查的电子垃圾处理区域人群外周血POPs含量高于非暴露组,DNA损伤修复相关基因表达量存在一定差异。机体对POPs所致DNA损伤的应答机制可能存在性别差异。
- 何晓波景亚青李克秋赵玉霞杨彩红杨巧云邱兴华李光
- 关键词：电子垃圾持久性有机污染物DNA损伤修复基因
- 钙离子通道亚基Cacnb3对小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用被引量：1
- 2019年
- 间充质干细胞在治疗骨相关疾病中具有重要意义,但其在成骨分化中的机制尚未完全阐明。该研究通过分析GEO数据库中有关组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)处理过的小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1 preosteoblasts)的生物芯片数据,筛选出22个在成骨分化中上调,在成脂分化中下调,且受HDACi紧密调控的基因。这22个基因中有6个基因(Cacnb3、Lpcat2、Cd248等)与Ca2+调节功能相关,提示Ca2+可能在MSCs分化中发挥重要作用。在后续实验中,我们观察到电压依赖性钙通道亚单位β3(calcium voltage-gated channel auxiliary subunit beta 3, Cacnb3)和磷脂酰基转移酶2(lysophosphatidylcholine acyltransferase 2, Lpcat2)在小鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)、人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)和小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)的成骨分化过程中上调,提示Cacnb3、Lpcat2可能参与ADSCs的体外成骨分化。此外,利用钙离子荧光探针检测方法,发现敲低Cacnb3后3T3-E1细胞内Ca2+浓度明显低于对照组,同时,成骨相关基因(ALP、Runx2)表达显著下调,表明Cacnb3可能通过影响Ca2+浓度调控细胞的成骨分化,该研究为进一步探索间充质干细胞成骨分化的机制奠定了基础。
- 伏玺王峰
- 关键词：脂肪组织间充质干细胞钙离子基因表达谱
- 调节性树突状细胞的获取途径及其诱导免疫耐受的临床应用被引量：2
- 2014年
- 树突状细胞(DCs)是体内作用最强的抗原提呈细胞,具有双向免疫调节功能,既可诱导免疫应答,又可诱导免疫耐受。调节性树突状细胞(DCreg)具有负向免疫调节功能,可降低T细胞的免疫活性,诱导免疫耐受。DCreg可通过不同机制经药物、细胞因子、局部微环境产生,其诱导的免疫耐受作用在器官移植、自身免疫性疾病中具有重要的临床意义。近期,DCreg的耐受性和安全性已在1型糖尿病和类风湿关节炎的临床试验中得到证实。本文就DCreg的获取途径及其诱导免疫耐受的临床应用综述如下。
- 李颖曦陈丹李克秋李光
- 关键词：树突细胞免疫耐受器官移植类风湿调节性树突状细胞
- 大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定及免疫调节性能初探被引量：2
- 2015年
- 目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),鉴定其向脂肪细胞和软骨细胞的分化潜能,并探讨其免疫调节性能。方法无菌条件下摘取Sprague-Dawley(SD)大鼠股骨和胫骨,全骨髓贴壁法培养BMSCs,胰酶消化传代培养。待培养至第3代时进行流式鉴定,检测分离的BMSCs分化为脂肪细胞的潜能。与Wistar大鼠脾脏来源T细胞进行共培养,分为直接接触组和Transwell共培养组,探讨其对T细胞亚群的影响,并研究其相关机制。结果BMSCs呈梭形生长,生长至第3代的细胞经检测发现几乎不表达CD34和CD45,高表达CD29、CD44和CD90,且经诱导后细胞可分化为脂肪细胞和软骨细胞。与脾脏来源T细胞共培养可有效降低CD8+的效应T细胞(Teffs)的比例,并且增加CD4+CD25+双阳性的调节性T细胞(Tregs)数量,具有一定的免疫调节性能。与T细胞共培养后BMSCs的IL-10和TGF-β1基因表达显著增强,其中与T细胞直接接触组效果更为明显。结论 BMSCs可能通过直接接触以及分泌细胞因子来发挥免疫调节功能。
- 张志强刘义李克秋李光
- 关键词：间质干细胞细胞分化神经免疫调节
- 成骨不全患者COL1A1/COL1A2基因突变筛查及分析
- 目的 采用PCR-高分辨率熔解曲线分析方法(PCR-high-resolution melting curve analysis,PCR-HRMA)筛查了87例成骨不全(osteogenesisimperfecta,OI...
- 李克秋白雪任秀智张天可鞠明艳王建海张晓宁常小丽官士珍王毅李光
- 关键词：成骨不全基因诊断高分辨率熔解曲线分析基因型表型
- 肝移植术后急性排斥患者血清差异性表达蛋白的研究
- 2018年
- 目的寻找肝移植术后急性细胞排斥反应(ACR)的血清蛋白标志物。方法收集肝移植术后病理证实为ACR患者和未见明显排斥症状患者的血清,应用同位素相对标记与绝对定量(iTRAQ)技术筛选鉴定ACR患者血清中的差异性表达蛋白,并利用酶联免疫吸附法(ELISA)进行进一步分析。结果经iTRAQ技术筛选鉴定,在ACR患者血清中发现10个差异性表达蛋白,其中3个表达上调,7个表达下调。ELISA结果显示,补体因子H在ACR患者血清中表达下调,具有统计学意义。结论该研究鉴定出ACR患者血清中的10个差异性表达蛋白,并发现补体因子H的表达下调与ACR的发生密切相关,这对开发肝移植急性排斥早期诊断标志物的有重要意义。
- 蒋琪于洋
- 关键词：肝移植蛋白标志物补体因子H
