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广东省自然科学基金(05300230)

作品数：4 被引量：35H指数：3
相关作者：郭勇韩双艳罗文华刘柳范晓丹更多>>
相关机构：华南理工大学更多>>
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相关领域：生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇生物学

主题

  • 3篇豆豉
  • 3篇豆豉纤溶酶
  • 2篇纤溶酶基因
  • 2篇酶基因
  • 2篇枯草杆菌
  • 2篇基因
  • 1篇英文
  • 1篇溶酶
  • 1篇重叠PCR
  • 1篇纤溶
  • 1篇纤溶酶
  • 1篇菌种
  • 1篇可溶性
  • 1篇可溶性表达
  • 1篇克隆
  • 1篇基因表达
  • 1篇基因克隆
  • 1篇分离纯化
  • 1篇杆菌
  • 1篇纯化

机构

  • 4篇华南理工大学

作者

  • 4篇郭勇
  • 2篇罗文华
  • 2篇韩双艳
  • 1篇范晓丹
  • 1篇张少平
  • 1篇陈亮
  • 1篇刘柳

传媒

  • 2篇华南理工大学...
  • 1篇生命科学研究
  • 1篇应用与环境生...

年份

  • 1篇2010
  • 3篇2007
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
豆豉纤溶酶在枯草杆菌WB800中的高水平表达(英文)被引量：13
2007年
一个来源于豆豉产生菌DC12的新的纤溶酶基因序列被克隆测序.为了实现在枯草杆菌中高水平表达豆豉纤溶酶,将来源于枯草杆菌168的重叠启动子P43序列以及转录终止信号序列通过重叠延伸融合,将融合序列克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3中,构建了pBEP43载体.将豆豉纤溶酶基因插入到载体pBEP43后转化枯草杆菌WB800.结果表明,在P43启动子驱动下,豆豉纤溶酶基因在重组菌中的对数生长期和平衡期均获得了表达且分泌到培养基中.重组菌经培养后上清液中的纤溶酶活性最高达1270U/mL,是豆豉纤溶酶基因在自身启动子驱动下表达量的1.87倍和野生菌株枯草杆菌DC12表达量的4.1倍.
罗文华郭勇韩双艳
关键词：豆豉纤溶酶枯草杆菌重叠PCR基因表达
豆豉纤溶酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化(英文)被引量：3
2010年
豆豉纤溶酶是从豆豉中发现的新型纤溶酶.从枯草杆菌DC-12中提取总DNA,PCR法扩增pro-DFE基因.将pro-DFE基因插入载体pET-32a,构建表达质粒pET-pro-DFE,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株进行变温诱导表达,重组菌株于37℃培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG于24℃进行诱导,SDS-PAGE显示可溶性重组融合蛋白约占重组蛋白的60%.且少量融合重组蛋白发生自切割,形成成熟的豆豉纤溶酶,破菌上清中含有成熟的豆豉溶栓酶,纤溶活性为200IU/mL.重组酶经纯化后比酶活为1280IU/mg.
张少平陈亮郭勇
关键词：豆豉纤溶酶可溶性表达大肠杆菌
产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化被引量：18
2007年
为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质,从广泛收集的豆豉中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.将该菌突变株DC-12N8的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,获得电泳纯的豆豉纤溶酶,每升发酵液可得到4.5mg活性酶蛋白,每克酶蛋白活力达1.18mol/s,纯度为发酵原液的53.6倍,回收率为11.7%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶是单链蛋白质,其分子质量约为28ku.
范晓丹郭勇刘柳
关键词：纤溶酶纯化
枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达被引量：10
2007年
为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3非翻译区的全长1400 bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB800获得了DFE的重组表达菌.试验结果表明:DFE基因在自身启动子驱动下,在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分泌表达;重组表达菌株培养30 h后,培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL.
罗文华郭勇韩双艳
关键词：豆豉纤溶酶枯草杆菌基因克隆
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