湖北省科技攻关计划(2006AA301B52-4)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：于愿王从俊陈堃吉文伟郑建伟更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院华中科技大学同济医学院附属同济医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带mda-基因的复制缺陷型腺病毒通过促进线粒体释放促凋亡蛋白杀伤肝癌细胞被引量：5
- 2008年
- 目的探讨黑色素瘤分化相关基因7／白介素24（mda-7／IL-24）基因选择性杀伤肝癌细胞的机制。方法应用携带mda-7基因的复制缺陷型腺病毒Ad．mda-7感染正常肝细胞l02和肝癌细胞HepG2。通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附实验（ELISA）及Westernblot方法，观察mda-7／IL-24基因的表达；应用Hoechst染色和流式细胞仪观察mda-7／IL-24对肝癌细胞的杀伤作用；采用RT—PCR和Westemblot方法，观察Bcl-2家族和caspase-9基因表达的变化，分离不同感染时点细胞内线粒体和胞浆蛋白，并检测线粒体释放促凋亡蛋白细胞色素C（Cyt-C）和Smac／DIABLO的变化过程。结果Ad．mda-7能介导mda-7／IL-24在两种细胞株中的高效表达。能选择性杀伤肝癌细胞，感染24h后，HepG2细胞凋亡率为24．0％±4．6％，而对正常的肝细胞没有影响。RT—PCR和亚细胞蛋白的分析结果显示，胞浆内Bcl-2和Bcl-xL的表达在HepG2细胞中明显下降，而在1-02细胞中的表达无变化，Bax在肝癌细胞中的表达明显增强，Bak的表达无变化；Ad．mda-7能促进细胞线粒体释放Cyt-C和Smac／DIABLO蛋白，并促进caspase-9的表达。结论Ad．mda-7能选择性杀伤肝癌细胞HepG2，通过促进线粒体促凋亡蛋白的释放而诱导肝癌细胞凋亡。
- 王从俊彭志海郑建伟陈堃胡回忆吉文伟于愿薛新波
- 关键词：MDA-7/IL-24凋亡细胞色素CSMAC/DIABLO
- 腺病毒介导的mda-7／IL-24抑制肝癌VEGF和MMP-9的表达被引量：6
- 2010年
- 目的 观察mda-7/IL-24基因对高转移性人肝癌细胞HCCLM6中VEGF和MMP-9的作用,从而探讨mda-7/IL-24基因在抑制肿瘤转移方面的作用.方法 构建Ad.Mda-7并转染至HCCLM6;transwell实验检测侵袭能力的变化;通过RT-PCR和Western Blot分别检测转染mda-7/IL-24基因前后VEGF和MMP-9表达mRNA和蛋白的变化;构建HCCLM6高转移型裸鼠模型,采用Ad.Mda-7肿瘤内注射法干预,观察mda-7/IL-24对裸鼠生存状况的影响和肿瘤内VEGF和MMP-9 的变化.结果 复制缺陷型腺病毒能介导外源基因mda-7/IL-24在肝癌细胞中高效表达;mda-7/IL-24能显著下调肝癌细胞中VEGF和MMP-9的表达.Ad.mda-7能延长裸鼠的生存时间,抑制肿瘤的生长,瘤体内VEGF和MMP-9表达明显降低（P〈0.05）.结论 mda-7/IL-24基因能明显抑制肝癌细胞的侵袭力,其机制可能与下调VEGF和MMP-9的表达有关.
- 于愿薛新波陈堃郑建伟吉文伟王从俊
- 关键词：MDA-7/IL-24VEGFMMP-9肝细胞癌基因治疗
- 黑色素瘤分化相关基因-7和白介素-24选择性杀伤肝癌细胞和诱导增殖阻滞的体外研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨黑色素瘤分化相关基因-7/白介素-24基因(mda-7/IL-24)对不同种类肝癌细胞的选择性杀伤作用。方法将携带人 mda-7/IL-24基因的复制缺陷型腺病毒(Ad.mda-7)感染人正常肝细胞和各种肝癌细胞,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)实验观察mda-7/IL-24基因的表达,MTT 法观察肝癌细胞的生长抑制,Hoechst 染色及 Annexin-V 和 PI 双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况及用流式细胞仪检测细胞周期。结果 RT-PCR 和 ELISA 提示Ad.mda-7能介导外源基因 mda-7/IL-24在各种肝癌细胞株和正常肝细胞中高效表达。MTT 实验结果提示 mda-7/IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoechst 染色和流式细胞仪检测提示 mda-7/IL-24能选择性杀伤肝癌细胞,细胞周期分析提示 mda-7/IL-24阻滞肝癌细胞在 G2/M 期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡和增殖阻滞作用。结论 mda-7/IL-24基因能选择性杀伤各种肝癌细胞,促进细胞增殖阻滞及诱导细胞凋亡。
- 王从俊彭志海于愿陈堃郑建伟胡回忆吉文伟薛新波
- 关键词：基因治疗凋亡
