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以GFP为报告基因的酿酒酵母mRNA在哺乳动物细胞中的表达被引量：1: 2005年; 目的　研究酵母mRNA在哺乳动物细胞中的翻译表达。方法　半乳糖诱导GFP基因在酿酒酵母细胞中表达,提取其mRNA ,RT -PCR鉴定,并以脂质体为介导,对血管内皮细胞HUVEC以及绿猴肾细胞COS - 7进行体外转染。结果　被转染HUVEC和COS - 7细胞分别出现绿色荧光,报告基因GFPmRNA在动物细胞中被识别、翻译。结论　提示酵母mRNA可能作为基因治疗物质应用于口服基因治疗的研究。; 王弘郑文岭杨太成冼江马文丽; 关键词：GFP 报告基因酿酒酵母 MRNA 哺乳动物细胞

以UPS构建的重组酿酒酵母表达载体及其稳定性研究被引量：2: 2005年; 采用通用载体质粒融合系统UPS构建了一种以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体pYES-GFP,并研究了其在重组酿酒酵母中的稳定性。实验表明,所构建的附加型质粒pYES-GFP在经近100代传代后,仍未发生丢失,具有良好的稳定性。同时,通过实验验证了,UPS在进行表达载体构建时快速、简便、高效。; 王弘郑文岭杨太成冼江; 关键词：酿酒酵母 GFP基因 UPS 重组酿酒酵母表达载体构建酵母表达载体绿色荧光蛋白

Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选被引量：2: 2008年; 构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.; 武婕杨金易张宏斌潘科王弘雷红涛郑霖肖治理孙远明; 关键词：克百威

抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达被引量：1: 2011年; 构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。; 陈舒迟何永盛徐小艳陆田珍王弘; 关键词：克伦特罗单链抗体毕赤酵母蛋白表达

农产品安全检测中生物传感器的应用被引量：3: 2005年; 围绕农药和化肥残留、重金属污染、激素和兽药残留以及生物污染物等农产品安全性的主要指标,该文对生物传感器在农产品安全检测领域中最新的发展动态进行了综述,并对其发展前景和存在问题进行了评述。; 王弘陈山刘仲明; 关键词：农产品生物传感器安全检测痕量分析

以GFP为报告基因的重组酿酒酵母消化道转基因研究被引量：1: 2005年; 目的以GFP为报告基因,研究重组酿酒酵母消化道途径转基因的可能.方法以6～8周龄Balb/c小鼠为实验对象,根据管饲材料不同对动物进行分组:第1组为空白对照组;第2组管饲酿酒酵母INVScl;第3组管饲携带酿酒酵母-哺乳动物细胞穿梭载体pYES-CMV-GFP的重组酿酒酵母;每次每只Balb/c小鼠灌胃0.3lml(108个)重组酿酒酵母悬浮液,2 d 1次,持续4周后采用免疫组织化学染色法检测小鼠小肠、肝脏、脾脏组织中GFP基因的表达.结果在第3组小鼠小肠、肝和脾组织中,有免疫组化呈阳性的检测结果,其中6只小鼠中的4只小肠组织免疫组化结果呈阳性,肝脏、脾脏分别有1只免疫组化结果呈阳性,而阴性对照组中小鼠的各组织结果均呈阴性.结论以酿酒酵母作为基因载体实现消化道途径转基因存在可能,为进一步研究酿酒酵母在基因治疗药物载体上的应用提供了实验基础.; 王弘郑文岭詹纯利肖育华马文丽; 关键词：转基因研究 GFP基因报告基因免疫组织化学染色法小肠组织脾脏组织

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国家自然科学基金(30400354)