国家教育部博士点基金(0631004)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 小鼠胚胎干细胞饲养层制备条件的研究被引量：3
- 2008年
- 目的:建立稳定高效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系,用于分离克隆胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)。方法:取妊娠13.5～14.5d的胎鼠,采用组织消化法结合组织块培养法分离、培养小鼠成纤维细胞;MTT法测定细胞生长曲线,结合倒置显微镜观察筛选小鼠成纤维细胞饲养层的最佳种植密度;MTT法筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。取妊娠3.5d的小鼠囊胚在经丝裂霉素C处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞生长情况。结果:组织消化法结合组织块培养法是分离培养小鼠成纤维细胞的较好的方法;1×105～2×105个/ml种植密度适于饲养层铺板;丝裂霉素C 10μg/ml作用3.5h或20μg/ml作用2.5h能抑制成纤维细胞增殖,细胞至少在7d内维持稳定的水平;妊娠3.5d小鼠囊胚在饲养层上培养能形成ES集落。结论:制备的胎鼠成纤维细胞饲养层能有效地支持小鼠胚胎干细胞的生长。
- 王璐王亚平
- 关键词：胚胎干细胞饲养层胚胎成纤维细胞小鼠
- 胚龄及分离方法对小鼠胚胎生殖细胞扩增效率的影响
- 2008年
- 目的：应用原始生殖细胞进行全能干细胞的研究具有与胚胎干细胞同样广阔的前景,尤其适合于难以从囊胚内细胞团中分离培养胚胎干细胞的动物。但胚胎生殖细胞体外培养条件一直是制约这方面发展的瓶颈。实验设计了体外有效扩增小鼠原始生殖细胞的方法,拟搭建稳定高效的原始生殖细胞培养平台。方法：实验于2006-10/2007-08在重庆医科大学组织胚胎学教研室重庆市生物化学分子药理学重点实验室完成。①实验材料：清洁级昆明孕鼠由重庆医科大学动物实验中心提供,见阴栓计为0.5d胚龄,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取胚龄8．5d胎鼠尾端尿囊及周围组织，取胚龄9．5～10．5d胎鼠后肠及周围组织，取胚龄11．5d，12．5d胎鼠生殖嵴及周围组织，分别经0．25％胰酶一0．02％EDTA消化并接种于0．1％明胶包被的培养皿中。比较不同妊娠时间点取材对原代、F1代胚胎生殖细胞克隆形成的影响。采用SSEA-1免疫组织化学法计数细胞阳性率，计数胚胎生殖细胞克隆联合MTT法比较胚龄11．5d，12．5d两个时间点原始生殖细胞的增殖能力。比较上述两种取材培养方法对胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞扩增的影响。采用碱性磷酸酶染色、免疫组化检测SSEA一1、免疫荧光检测Nanog，体外分化实验鉴定分化能力。结果：①胚龄11．5d，12．5d胎鼠原代和F1代集落形成率较胚龄8．5～10．5d高，扩增效率显著提高（P〈0．01）。②免疫组织化学法检测分离的胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞SSEA-1阳性率差异不显著（P〉0．05）。原代第3天克隆计数显示，胚龄11．5d胎鼠高于12．5胚龄胎鼠（P〈0．01），MTT数据显示11．5胚龄组稍高于12．5胚龄组。③两种方法对胚龄11．5d，12．5d胎鼠胚胎生殖细胞集落形成无显著性差异（P〉O．05），但生长方式有所不同。�
- 王璐刘永刚李芳菲姜蓉王亚平
- 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞扩增
- 转录因子Nanog在小鼠原始生殖细胞的时空表达
- 2008年
- 目的探讨Nanog在小鼠原始生殖细胞发育过程中的时空表达。方法采用免疫荧光技术定性研究Nanog在妊娠7.5~15.5d胚胎原始生殖细胞的表达;抗SSEA-1、抗Nanog双标记激光共焦扫描进一步定量分析妊娠11.5~15.5d小鼠原始生殖细胞中Nanog的表达变化。结果尿囊、后肠及背肠系膜、生殖嵴的原始生殖细胞中均可见Nanog的阳性表达。妊娠11.5d小鼠原始生殖细胞中Nanog的表达阳性率最高、荧光强度最强,雌性小鼠在妊娠12.5d后Nanog表达急剧下降,雄性小鼠在妊娠13.5d后Nanog表达急剧下降。结论Nanog在增殖的小鼠原始生殖细胞中稳定表达,其表达下调可能与原始生殖细胞的分化启动有关。
- 王璐姜蓉李芳菲刘永刚王亚平
- 关键词：原始生殖细胞NANOG免疫组织化学小鼠
- 转录因子Oct-4、Nanog与胚胎干细胞的自我更新被引量：1
- 2007年
- 胚胎干细胞自我更新分子机制是胚胎干细胞研究的前沿及热点课题。除外源性信号如LIF、BMP、Wnt能维持胚胎干细胞的未分化状态外,转录因子Oct-4和Nanog特异性表达于全能胚胎干细胞,并与其它转录因子如Sox2一起构成调控网络,共同调控与胚胎干细胞多能性相关的一系列重要分子,是保持胚胎干细胞自我更新和多潜能性的关键分子。
- 王璐王亚平
- 关键词：细胞自我更新胚胎干细胞OCT-4调控网络特异性表达
- 造血干细胞衰老及其机理的研究被引量：3
- 2007年
- 机体衰老是干细胞水平衰老,造血干细胞衰老经历了数量减少和质量的下降。其机制研究表明造血干细胞端粒缩短、mtDNA损伤、p16INK4a基因表达上调、细胞记忆相关蛋白表达的改变等参与造血干细胞衰老的调控。本文就以上内容综述造血干细胞衰老及可能的调控机制。
- 周玥王亚平
- 关键词：造血干细胞细胞衰老细胞水平机体衰老端粒缩短
