浙江省自然科学基金(Y3110432)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 翘嘴红鲌Vasa基因cDNA克隆及其组织表达特征被引量：1
- 2014年
- 为了研究Vasa基因在翘嘴红鲌生殖细胞发育中的作用,本研究以翘嘴红鲌冬片鱼种的精巢组织为材料,提取总RNA,采用RT-PCR和RACE技术分离、克隆Vasa基因的cDNA全序列,与其他21个物种的Vasa氨基酸序列进行同源性比较,并利用荧光定量PCR分析Vasa基因在翘嘴红鲌各组织的表达。结果表明:该基因序列全长为2 713 bp,编码684个氨基酸,具备DEAD-box家族特有的8个保守基序;翘嘴红鲌与草鱼的同源性最高达96%;Vasa仅在翘嘴红鲌精巢和卵巢中表达;与成鱼繁殖期的性腺组织相比,后者表达量高,差异显著(P<0.05),同期精巢、卵巢Vasa基因表达量差异不显著。由此可见,Vasa可作为翘嘴红鲌生殖细胞的标志基因。该基因全序列的获得为今后进一步探讨翘嘴红鲌生殖发育规律奠定了基础。
- 曹访刘莉采克俊李景芬
- 关键词：VASA基因克隆MRNA表达翘嘴红鲌
- PolyI:C体外诱导草鱼PKR基因的克隆与表达被引量：3
- 2011年
- [目的]克隆草鱼的PKR基因,为草鱼抗病毒基因研究奠定基础。[方法]依据GenBank上斑马鱼(AJ852023.1)和鲫鱼(AY293929.1)的PKR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了3对简并引物;采用100μg/ml PolyI:C体外分别处理草鱼肾细胞(Ctenopharyngodon indellus kidney cells,CIK)12、36、48 h,并提取处理后细胞的总RNA,逆转录后用降落PCR方法扩增这3个处理时间细胞中PKR基因。[结果]处理12 h时未扩增出PKR基因,处理36和48 h时都扩增到了PKR基因,并且表达量随处理时间的增加有所升高,扩增到的部分序列与鲫鱼和斑马鱼的该段序列同源性分别为100.00%和81.48%。[结论]试验成功获得了草鱼PKR基因的部分序列,PolyI:C高效诱导草鱼PKR蛋白表达将有助于开创治疗草鱼类病毒病的一种新思路。
- 李景芬刘莉曹访
- 关键词：PKR草鱼克隆
- 反向、巢式、降落PCR技术克隆奥尼罗非鱼MSTN基因3'侧翼序列被引量：1
- 2014年
- 为获得奥尼罗非鱼侧翼MSTN基因的3'未知序列以完成奥尼罗非鱼MSTN基因全序列的克隆,采用反向、巢式、降落等3种PCR技术对该未知序列进行克隆,对克隆到的序列进行测序,并与已有的奥尼罗非鱼MSTN基因核苷酸序列进行比对,获得MSTN基因3'端1 376 bp新序列,从而完成奥尼罗非鱼MSTN基因全序列的克隆,为奥尼罗非鱼MSTN基因功能的进一步研究以及奥尼罗非鱼的分子育种研究奠定基础。说明反向、巢式、降落PCR相结合是扩增已知基因侧翼序列行之有效的方法。
- 李景芬采克俊曹访孙君艳梅杨玲
- 关键词：反向PCR降落PCR奥尼罗非鱼MSTN基因
