国家自然科学基金(31172164)
- 作品数：6 被引量：8H指数：3
- 相关作者：孙兆增赵彦斌任秀梅胡仲明许琴更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学兰州军区乌鲁木齐总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 比格犬卵巢子宫内雌激素受体ERα、ERβ的免疫组织化学定位被引量：3
- 2013年
- 目的研究雌激素受体α,β在比格犬卵巢及子宫内的定位。方法采用免疫组化SP法DAB显色结合BCIP/NBT及AEC显色检测ERα、ERβ在比格犬子宫及卵巢内的表达。结果比格犬ERα主要表达于卵泡颗粒细胞、卵巢间质腺腺上皮细胞及子宫内膜腺体腺上皮细胞胞核内,胞质内仅有少量表达,而在卵泡膜内膜的间质细胞,腺体周围的基质细胞及小动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞、小静脉内皮细胞的胞核内有少量表达。而ERβ则以相同的组织特异性主要表达于上述组织细胞的胞质内,在胞核内有微弱表达。ERα表达于膜黄体细胞的胞核内,而在黄体颗粒细胞胞核与胞质内均有表达。而ERβ则仍特异表达于不同生理阶段黄体细胞的胞质内。BCIP/NBT与AEC双染未见ERα、ERβ在子宫内有明显的共表达现象。结论比格犬ERα、ERβ在子宫与卵巢组织内定位不同,ERα主要定位于胞核,在胞质内有微弱表达,而ERβ主要定位于胞质,在胞核内有零星表达。
- 许琴李建瑛任秀梅赵彦斌胡仲明许永华孙兆增刘一刘文森
- 关键词：比格犬雌激素受体Α雌激素受体Β细胞定位
- 比格犬一种新雌激素β受体可变剪切体的克隆及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序表明其中一种为新的可变剪切体,目前此可变剪切体尚未见报道。结论得到了雌激素β受体的一种新的可变剪切体,有助于研究雌激素β受体可变剪切体的功能及其在生殖调控过程中的作用。
- 任秀梅赵彦斌孙兆增许琴白杰英刘一胡仲明靳朝曾林
- 关键词：比格犬雌激素受体Β基因克隆
- 间情期与发情期比格犬子宫与卵巢组织形态学的比较被引量：3
- 2012年
- 目的比较比格犬的子宫、卵巢在间情期与发情期的组织形态学的差异,为后期研究奠定基础。方法用化学发光法测定了23只经产比格母犬的血清性激素水平,选取经血清学鉴定处于发情期的比格犬2只,间情期的比格犬4只的卵巢和子宫标本,中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规HE染色镜检,拍照。结果间情期犬子宫及其内膜较薄,间质纤维增生,黄体中以初级卵泡为主,可见1～2个次级卵泡,未见成熟卵泡,卵泡和黄体细胞间纤维较多、血管少。发情期犬子宫及其内膜增厚,内膜腺体腔较大,部分腺体呈分枝状弯曲,腺上皮肿大,胞浆淡染,少数可见核下空泡。卵巢中卵泡数量较多,有初级、次级和1～2个成熟卵泡。黄体细胞数量多,排列规则,境界清楚,间质纤维比较疏松,血管多,未见空泡变性。间情期和发情期犬卵巢中未见明显白体。结论间情期比格犬的性激素维持在一比较低的水平,在发情前期雌激素水平迅速增高,而在排卵后比格犬的孕酮水平较高。随发情周期的变化,卵巢和子宫在形态学上发生相应的变化。
- 许琴任秀梅赵彦斌胡仲明李建瑛孙兆增隋丽华刘一刘文森
- 关键词：比格犬发情期间情期形态学
- 荧光定量RCR检测比格犬雌激素β受体mRNA在间情期与发情期表达量的差异
- 2014年
- 目的对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量,明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况,为深入研究比格犬发情机制提供基础。方法作为调控生殖的关键基因,ERβ基因位于比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上,因此分别取处于发情期和间情期的比格犬,提取下丘脑、垂体、卵巢和子宫的RNA,反转录后对ERβ基因mRNA的表达量进行荧光定量PCR检测。结果间情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA的表达量分别是发情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA表达量的0.35倍、0.17倍、0.44倍、0.43倍。结论 ERβ基因在处于发情期的比格犬下丘脑-垂体-性腺轴内表达量均上调。
- 钟睿甘艺任秀梅许琴赵彦斌刘冰孙兆增朱宇旌栾新红胡仲明张勇曾林
- 关键词：发情期间情期比格犬
- 比格犬雌激素受体β的原核表达、纯化及鉴定
- 2013年
- 目的研究比格犬雌激素受体β（Estrogenreceptorβ，ERβ）及其剪接异构体在生殖调控中的功能，构建比格犬ERβ的pMAL-p5x／ERβ 480DE3E．coli重组菌株，并进行纯化和鉴定。方法Trizol法提取发情期比格犬下丘脑总RNA，RT-PCR获得cDNA，以NCBI网站公布的比格犬ERβ基因CDS序列设计特异性引物，扩增ERβ保守区基因编码序列（16-496bp），连接原核表达载体pMAL-p5x，筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α，再转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达，表达产物经经麦芽糖亲和树脂（AmylomResin）亲和层析分离纯化，并对纯化的融合蛋白进行鉴定。结果构建了pMAL-p5x／ERa480重组质粒，在DE3大肠杆菌中诱导表达出MBP-ERβ融合蛋白，SDS-PAGE显示分子量约为60000，与预期结果一致：优化了MBP-ERβ表达体系的表达条件：分别在0．2％葡萄糖，1000g／mlAmpcillin，0．1mmol／LIPTG37℃培养5h或在0．2％葡萄糖，50μg／mlAmpcillin，0．2mmol／LIPTG37℃培养3h，融合蛋白表达效果比较好。结论构建了pMAL-p5x／ERβ480原核表达重组质粒，获得了比格犬MBP—ERB融合蛋白，为犬种属特异性ERB多克隆抗体的制备及功能分析奠定了基础。
- 许琴赵彦斌任秀梅孙兆增叶华虎刘一李微白杰英曾林胡仲明
- 关键词：比格犬原核表达
- 比格犬ERβ_(1293)基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位被引量：1
- 2014年
- 目的观察比格犬Myc标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长。Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。
- 甘艺钟睿任秀梅赵彦斌胡仲明刘冰陈旖孙兆增曾林杨焕民
- 关键词：比格犬蛋白定位
