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IFNγ修饰的DC对T细胞增值及杀伤肿瘤细胞作用影响的研究被引量：6: 2008年; 目的探讨结肠癌细胞抗原致敏的IFNγ修饰的树突状细胞(DC)对T淋巴细胞增殖和分化的影响,以及活化T细胞对结肠癌LoVo细胞的杀伤作用。方法构建携带人IFNγ基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(Ad-IFNγ),用其感染人外周血单个核细胞来源的DC;以流式细胞仪检测DC表型的变化。用反复冻融裂解法提取的结肠癌LoVo细胞抗原致敏DC,将其与自身T淋巴细胞共同培养,观察T细胞增殖和分化的情况以及活化T细胞对LoVo细胞的杀伤作用。结果Ad-IFNγ转染后24h内几乎不影响DC的吞噬功能,DC自身表达的IFNγ在一定程度上能促进DC的成熟;IFNγ修饰的DC经LoVo细胞抗原致敏后能明显促进T淋巴细胞的增殖并使其向Th1细胞分化,Th1细胞对结肠癌LoVo有明显的特异性杀伤效应。结论IFNγ修饰的DC能增强促进T淋巴细胞的增殖,诱导细胞免疫,增强T细胞的细胞毒作用,从而有效地杀伤肿瘤细胞。; 薛刚程莹曹永宽王培红田伏洲黄文林; 关键词：结肠肿瘤 IFNΓ 树突状细胞免疫治疗

人次级淋巴组织趋化因子腺病毒载体的构建和鉴定被引量：2: 2008年; 目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子的重组腺病毒载体(Ad-6Ckine),并观察其在真核细胞中的表达,为进一步的肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法 RT-PCR法从人淋巴结中扩增出人次级淋巴组织趋化因子cDNA,利用AdMax腺病毒包装系统在细胞内同源重组出Ad-6Ckine,然后用Ad-6Ckine感染真核细胞,观察6Ckine蛋白在真核细胞中的表达。结果成功构建了重组Ad-6Ckine,PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,构建的Ad-6Ckine所携带的6Ckine基因能在真核细胞中得到表达。结论 AdMax腺病毒包装系统是一种简便高效的重组腺病毒构建方法,构建的重组Ad-6Ckine可用于肿瘤基因治疗的体内外研究。; 薛刚程莹曹永宽刘然义田伏洲黄文林; 关键词：肿瘤次级淋巴组织趋化因子基因治疗腺病毒载体

1-磷酸鞘氨醇对淋巴管内皮细胞生物学特性调节作用的研究: 2009年; 目的:研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)对淋巴管内皮细胞(HDLEC)的生物学特性的调节作用及其调节机制。方法:应用RT-PCR方法检测HDLEC是否表达SPK及S1P受体,应用MTT法、细胞扩散盒技术检测S1P对HDLEC增殖、迁移特性的影响,并用Western印迹方法检测S1P对HDLEC的MAPK信号通路的调节。结果:HDLEC表达SPK及S1P受体,包括S1P1,S1P2,S1P3和S1P4。外源性S1P对HDLEC没有促增殖作用,但可促进其迁移,并可通过S1P1和S1P2诱导MAPK快速磷酸化。结论:初步研究结果提示,S1P可以影响淋巴管内皮细胞的生物学特性,有可能成为调控淋巴管生成及其功能的新靶点。; 肖秀斌王华李庆芳严俊杨月峰徐尹张伟京王立生; 关键词：1-磷酸鞘氨醇淋巴管内皮细胞细胞增殖迁移

重组腺病毒-p53基因治疗患者基因变异和血清抗体检测及其临床意义被引量：1: 2005年; 目的检测应用重组人腺病毒-p53(SBN-1)基因抗癌注射液的临床试验病例的机体免疫反应和组织样本p53基因变异状况,以客观评价临床疗效。方法通过对22例SBN-1治疗前后患者肿瘤组织样本的p53基因进行分析,明确用于重组腺病毒p53基因联合放疗二期临床试验的肿瘤标本中p53基因的变异状况并检测癌症患者血清中抗SBN-1抗体水平;用免疫组织化学技术检测p53基因的表达水平;显微切割技术分离微量肿瘤组织制备DNA进行聚合酶链反应扩增;变性高效液相色谱技术(DHPLC)和DNA测序技术检测内源性p53基因突变的分布和类型。采用酶联免疫吸附实验检测血清中抗腺病毒抗体水平、血清中腺病毒IgG和IgM抗体水平。结果有p53突变的病例中完全缓解率较高,通过免疫组织化学检测阳性率为40%(6/15),DHPLC和DNA测序检测点突变为32%(7/22)。实验结果也表明试验者绝大多数近期未感染过腺病毒,IgM阳性率低于6%(1/16),接受SBN-1治疗的患者随注射SBN-1次数增加,血清中抗SBN-1特异性抗体水平升高。结论通过对入组病例临床样本p53基因变异和SBN-1抗体水平的检测,为客观评价临床疗效提供了基因和蛋白水平的指标。; 赵敏肖绍文杨静贤张珊文吕有勇; 关键词：P53基因抗体基因变异高效液相色谱

重组人p53基因联合放疗、热疗治疗晚期软组织肉瘤的临床观察被引量：18: 2007年; 目的:评价重组人p53基因腺病毒注射液(rAdp53)结合放疗、热疗治疗软组织肉瘤的疗效及安全性。方法:自2001年11月～2005年7月,采用rAdp53制剂“今又生”结合放疗、热疗共治疗晚期软组织肉瘤12例。“今又生”用法:每周1次,每次1×1012VP(病毒颗粒),平均8±2次。放疗方案:每次2Gy,每周5次,肿瘤量为16-70Gy/8-35次/2-8周,平均56.3±6.3Gy。热疗方法:采用浅部或深部热疗,每周1-2次,平均9±3次。观察肿瘤变化、患者的自觉症状改变与不良反应,并以CT评价疗效。结果:CR8.3%(1/12),PR33.3%(4/12),SD58.4%(7/12)。7例SD病人中亦达到止痛、减轻局部症状的目的。1年生存率为58.3%(7/12),2年生存率为16.7%(2/12),SD>6个月4例,实际临床获益率(CR+PR+SD>6月)为75%(9/12)。12例患者都接受多次“今又生”瘤内注射,除了出现一时性发热外,未发现其它不良反应。结论:软组织肉瘤瘤内注射rAdp53结合放疗、热疗是安全而有效的。rAdp53是一种很有潜力的治疗恶性软组织肿瘤的基因治疗药物。; 肖绍文刘长清孙艳蔡勇李东明苏星朱广迎徐博吕有勇王长胜张珊文; 关键词：放疗热疗软组织肉瘤

鼻咽癌放疗效果与p53基因多态关系的临床研究: 2008年; 目的探讨p53基因的单核苷酸多态与鼻咽癌(NPC)放疗为主的治疗效果的关系。方法应用PCR-RFLP(聚合酶链反应-限制性片断长度多态性)分析方法,对74例以放疗为主治疗的NPC患者,进行p53第72密码子Arg-Pro多态检测,治疗结束后进行效果评价。以非条件Logistic回归模型比较不同基因型与治疗效果的关系。结果携带Arg/72Pro基因型患者的疗效是携带72Arg/Arg与Pro/Pro基因型患者的2.49倍(95%CI=0.913～6.810,P=0.075);I+II期患者的疗效是III+IV期的3.32倍(95%CI=1.028～10.720,P=0.045);男性患者的疗效是女性的2.39倍(95%CI=0.862～6.670,P=0.094);年龄不是影响敏感性的因素(P=0.194);治疗方式的不同,对疗效未见显著影响。结论与其他两种基因型的携带者相比,携带p53第72密码子Arg/Pro基因型鼻咽癌患者的疗效有可能提高。; 王长胜肖绍文张珊文; 关键词：P53 鼻咽癌

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响被引量：3: 2007年; 目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。; 李金凤段海峰吴彬毕建进孙同柱付小兵王立生吴祖泽; 关键词：肝细胞生长因子增生性瘢痕成纤维细胞腺病毒

一种高效感染血液细胞的新型靶向性腺病毒载体的构建被引量：1: 2006年; 人C组5型腺病毒(Ad5)载体能够有效感染上皮来源的细胞,但对造血细胞的感染效率很低,限制了其在造血调控基础研究以及血液病基因治疗中的应用。为了建立高效感染血液细胞的新型靶向性腺病毒载体系统,对5型腺病毒载体的纤维顶球进行了改造,以AdEasy系统为基础,应用递归PCR的方法人工合成人B组11p型腺病毒的部分纤维(fiber)基因,采用一系列分子生物学方法将其替换AdEasy骨架质粒中的人5型腺病毒的fiber基因,得到新的腺病毒骨架质粒命名为pAdEasy-1/F11p,应用带有GFP报告基因的穿梭质粒pShuttle-GFP与AdEasy-1/F11p腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得重组腺病毒,命名为Ad5F11p-GFP。以Ad5-GFP作对照,同时感染K562、U937等白血病细胞系,流式细胞仪检测GFP的表达。初步检测结果显示:在10MOI时,Ad5F11p-GFP能够有效感染K562、U937等白血病细胞系,感染细胞效率>90%,对照Ad5-GFP感染细胞效率<30%,这表明改建后的腺病毒AdEasy-1/F11p可以高效介导基因转移到血液细胞,是一种很好的血液细胞靶向性腺病毒载体。; 倪芳鲁茁壮王立生瞿成奎汪思应; 关键词：血液细胞靶向腺病毒载体

鼻咽癌口腔黏膜急性放射损伤与p53基因多态的关系被引量：1: 2007年; 目的探讨p53基因的单核苷酸多态与鼻咽癌(NPC)口腔黏膜急性放射损伤的关系。方法以PCR-RFLP (聚合酶链反应-限制性片断长度多态性)分析方法,对56例单纯放疗或同步放化疗的NPC患者,进行p53的72密码子Arg-Pro多态检测,并对口腔黏膜的急性放射损伤评级。结果携带72Pro等位基因的患者的口腔黏膜急性放射损伤程度与未携带72 Pro等位基因的患者之间的差异无统计学意义(P>0.05);单次剂量大与同步放化疗患者的口腔黏膜急性放射损伤的程度明显增加,差异有统计学意义(分别P<0.01和P<0.05)。结论鼻咽癌患者p53的72密码子Arg-Pro基因型与口腔黏膜急性放射损伤无关。; 王长胜肖绍文张珊文; 关键词：P53 鼻咽癌

外源p53基因联合热疗和放射治疗76例晚期软组织肉瘤临床研究被引量：2: 2017年; 目的评价重组人p53基因（rAdp53）注射液在不可切除晚期软组织肉瘤的临床疗效及安全性.方法 2005-2012年间共收治不可切除的晚期软组织肉瘤患者76例,其中rAdp53＋放疗、热疗（p53组）41例,放疗、热疗（对照组）35例.rAdp53瘤内注射或腔内灌注,1 次/周,1~2×1012VP/次,平均8次.放疗2 Gy/次,5 次/周,平均PTV剂量p53组为（56.3±5.3） Gy,对照组为（58.1±4.2） Gy （P〉0.05）.热疗采用浅部或深部热疗,2 次/周,平均8次.分别比较两组临床特征、有效率、疾病进展时间、OS期及不良反应.应用Kaplan-Meier法计算OS并Logrank检验和单因素分析,余用x2检验.结果 p53组较对照组疗后2个月获益率（PR＋CR＋SD）和LC率明显提高（85%∶54%,P=0.003和49%∶23%,P=0.020）,疾病进展时间及OS明显延长（12个月∶5个月,P=0.010及48个月∶31个月,P=0.049）.除一过性发热外,未见加重的放疗及热疗不良反应（P〉0.05）.结论软组织肉瘤采用重组人p53基因注射液结合放疗、热疗是安全而有效的.; 肖绍文徐诣芝张珊文刘长青方志伟白楚杰李东明李永恒蔡勇孙艳郑宝敏苏星徐刚

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国家重点基础研究发展计划(2004CB518801)

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