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斯氏艾美耳球虫热休克蛋白70基因的克隆及表达分析被引量：4: 2017年; 为了获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的热休克蛋白70(HSP70)的全基因序列,并诱导表达重组HSP70蛋白,试验根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种HSP70蛋白序列设计引物,通过c DNA末端快速扩增法(RACE)获得E.stiedai HSP70的全基因序列,将其连入原核表达载体p ET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)p Lys S,通过IPTG诱导表达重组HSP70蛋白,并进行Western-blot分析。结果表明:HSP70序列全长为2 727 bp,最大ORF为2 010 bp。HSP70在诱导后37℃培养4 h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下无表达。说明试验成功获得E.stiedai HSP70的全基因序列以及重组HSP70蛋白。; 景瑾张帅仇保丰董蓉莲蒋荧梅朱顺星田颖超刘春吴刘成宋鸿雁邵义祥; 关键词：斯氏艾美耳球虫克隆原核表达重组蛋白

普通级与SPF级新西兰兔肝脏、十二指肠病理、超微结构及肝功能的比较研究: 2014年; 为了研究普通级与SPF级新西兰兔肝脏及肠道病理、超微结构和肝功能的变化差异,从而为正确选择、应用实验兔开展相关科学试验提供参考依据,试验分别选择6只普通级与SPF级新西兰白兔,采集粪便经饱和盐水漂浮法检查是否感染兔球虫;采血测定肝功能生化指标;解剖兔取部分肝脏和十二指肠,制作切片后进行H.E.染色,观察病理变化和超微结构。结果表明:在病理及超微结构比较上,普通级兔肝脏、十二指肠均出现明显的变化,主要表现在普通级兔肝脏、十二指肠表面与实质出现大小、数量不一的球虫结节,结节病灶有大量兔球虫卵囊,侵入周围组织、细胞,进而影响肝脏、十二指肠正常的病理结构与超微结构。与SPF级兔相比,普通级兔肝功能相关的5项指标中有3项出现显著差异,2项出现极显著差异。说明普通级兔肝脏正常的机理功能受到影响,提示有条件时应选用微生物控制等级更高的SPF级兔开展相关科学实验。; 王胜洁吴刘成宋鸿雁刘春邵义祥; 关键词：新西兰兔肝脏十二指肠超微结构肝功能

斯氏艾美耳球虫感染兔血常规及肝脏功能分析被引量：5: 2017年; 为了对斯氏艾美耳球虫感染兔的血常规、肝功能和凝血4项进行检测分析。通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服接种的途径感染8只2月龄的无球虫新西兰兔,8只不感染的设为阴性对照组。感染30 d后,心脏采血采集血液样本,测量血常规、肝功能和凝血4项等血液指标。血液检测结果显示,与肝功能相关的8项指标中,仅有谷氨酰肽转移酶、血清胆碱酯酶差异显著,其余均差异极显著,血常规和凝血4项亦差异极显著。表明兔感染斯氏艾美耳球虫1个月后肝功能严重受损。; 宋鸿雁景瑾蒋荧梅邵义祥; 关键词：斯氏艾美耳球虫新西兰兔血常规肝功能凝血4项

斯氏艾美耳球虫感染兔肝脏组织超微结构观察被引量：1: 2016年; 为了给兔斯氏艾美耳球虫感染的有效防治方法和途径提供理论依据,试验通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服感染6只2~3月龄的无球虫新西兰兔,6只不感染兔为阴性对照组,30d后,对其肝脏、胆管以及十二指肠进行超微结构观察比较。结果表明：肝脏、胆管以及十二指肠均出现显著病变,器官和细胞结构严重破坏。肝脏组织中肝细胞结构破坏,细胞器消失,可清晰地观察到斯氏艾美耳球虫的超微结构;胆管上皮细胞亦有部分细胞器消失;十二指肠微绒毛断裂、脱落。说明斯氏艾美耳球虫感染兔后,对兔的消化器官造成了极大的损害。; 景瑾宋鸿雁蒋荧梅邵义祥; 关键词：斯氏艾美耳球虫新西兰兔肝脏胆管十二指肠超微结构

兔斯氏艾美耳球虫感染模型的建立及病理学初步研究被引量：3: 2017年; 建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,为研究斯氏艾美耳球虫感染兔的有效防治方法提供适合的动物模型。2月龄普通级新西兰兔16只,分组单笼饲养。从自然感染的肝脏中收集斯氏艾美耳球虫卵囊,培养孢子化,孢子化的卵囊1.0×105个/mL,3mL孢子化卵囊口服感染新西兰兔,建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,并对感染1个月后的新西兰兔的肝脏、十二指肠进行病理学观察比较。结果显示:斯氏艾美耳球虫对新西兰兔部分致病性观察发现,新西兰兔在感染后出现明显的临床症状,严重制约了其生长发育。形态学观察发现肝脏感染严重,表面布满白色结节,胆囊中胆汁浓稠,颜色呈金黄色,而十二指肠虽未感染球虫,却也有较显著的病变。病理学观察发现肝脏中存在大量斯氏艾美耳球虫,十二指肠中不存在球虫,但组织结构亦被破坏,十二指肠绒毛遭到严重破坏。结果表明:本试验成功建立了兔斯氏艾美耳球虫感染模型。; 景瑾宋鸿雁蒋荧梅邵义祥; 关键词：新西兰兔斯氏艾美耳球虫肝脏病理

柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆及分析: 2017年; 根据Gen Bank中已发表的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)SAG10基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从E.tenella江苏株的第2代裂殖子中成功克隆出SAG10基因。将该基因与Gen Bank中国内外不同E.tenella分离株的SAG10基因进行比对,发现E.tenella江苏株与北京株的SAG10基因同源性最高,高达99%,其后依次为杨凌株、豪顿株。4种不同分离株SAG10基因的ORF之间有11个碱基不同,其中3个为无义突变,8个为有义突变。分析4种分离株SAG10基因推导蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性发现,国内外不同E.tenella分离株SAG10蛋白的抗原性总体比较接近且很强,但国内不同分离株之间的抗原性更加接近,并优于国外的豪顿株,这可能是由于氨基酸突变引起蛋白质的空间构象和亲水性等发生变化而引起。将上述SAG10基因序列与复顶门原虫的其他相关SAGs基因序列进行遗传进化分析,发现Eimeria属球虫SAGs基因之间相对比较保守,且与犬新孢子虫(Neospora caninum)、N.hughesi、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的SAG基因之间同源性较低,与已有观点一致;但神经肉孢子虫(Sarcocystis neurona)的2条SAG1基因序列却与E.tenella的SAG1基因序列表现出更高的同源性,这与其他研究结论不符。; 仇保丰景瑾董蓉莲宋鸿雁刘春朱顺星邵义祥刘文斌李建; 关键词：柔嫩艾美耳球虫克隆

柔嫩艾美耳球虫核糖体蛋白S3a基因的克隆及分析: 2016年; 根据Gen Bank中收录的柔嫩艾美耳球虫核糖体蛋白S3a基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从纯化的柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子中提取总RNA,然后应用RT-PCR技术扩增出约810 bp的产物,将其连入p MD18-T载体,经双酶切和PCR鉴定正确后,进一步进行DNA序列测定。将本研究测序结果与Gen Bank收录的柔嫩艾美耳球虫S3a基因进行比对,发现两序列间有6个碱基发生突变,其中3个为无义突变,其余为有义突变,同源性为97.9%;本研究扩增的S3a基因包含了一个全长795 bp的完整开放阅读框(ORF),编码264个氨基酸,蛋白分子量约为29.9 KD,ORF碱基同源性为99.0%,推导氨基酸序列同源性为98.1%。将本研究克隆的核糖体蛋白S3a基因与Gen Bank中收录的人和哺乳动物、植物、真菌、禽鸟等共15种真核生物的核糖体蛋白S3a基因进行比对发现,虽然本研究克隆和Gen Bank中收录的柔嫩艾美耳球虫S3a基因之间同源性最高,但是两者却与硕大利什曼原虫和布氏锥虫这2种原虫的S3a基因同源性较低,反而与禽鸟S3a基因的同源性较高。; 仇保丰董蓉莲宋鸿雁顾炳泉景瑾刘文斌邵义祥高逢结李建; 关键词：柔嫩艾美耳球虫克隆

Epidemic Status and Research Progress on Prevention of Rabbit Coccidiosis in China: 2014年; Rabbit is not only an economic animal,but also an important experimental animal.Rabbit coccidiosis seriously affects development of rabbit industry and quality safety of experimental rabbits.Currently,infections of rabbit coccidiosis are very common in China,which mostly are mixed infections in clinical,with multiple species of coccidia.The current prevention against rabbit coccidiosis mainly depends on anticoccidial drugs,while live vaccine,subunit vaccines and genetic engineering vaccine for coccidia are developing.; Song HongyanQiu BaofengShao Yixiang; 关键词：兔球虫病亚单位疫苗经济动物

斯氏艾美耳球虫ASP基因的克隆表达与免疫特性分析被引量：2: 2018年; 根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种天冬氨酸蛋白酶（ASP）蛋白序列设计引物，通过cDNA末端快速扩增法（RACE）获得斯氏艾美耳球虫（E．stiedai）ASP的全基因序列，将其连入原核表达裁体pET-28a（＋），转化CompetentRosetta2（DE3）pLysS，通过IPTG诱导表达重组ASP蛋白，并进行Westernblot分析。结果显示，ASP序列全长为1568bp，最大ORF为1407bp。Westernblot分析发现，ASP在诱导后37℃培养4h条件下有表达，但全部为不溶性表达；在诱导后20℃过夜培养条件下有表达，且有少量可溶性表达；证实重组ASP蛋白确实对E．stiedai有免疫原性。结果表明，试验成功获得E．stiedaiASP的全基因序列以及重组ASP蛋白．; 宋鸿雁景瑾董蓉莲仇保丰蒋荧梅朱顺星王生存邵义祥; 关键词：ASP 克隆原核表达重组蛋白

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国家自然科学基金(31301926)

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