国家自然科学基金(31172170)
- 作品数：27 被引量：50H指数：5
- 相关作者：潘兴华阮光萍庞荣清王金祥杨建勇更多>>
- 相关机构：成都军区昆明总医院昆明医科大学湖北科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 树鼩血清与多种二抗的交叉反应:可在树鼩疾病动物模型中广泛应用被引量：1
- 2015年
- 背景:由于树鼩是介于食虫目和灵长目之间的代表,进化程度高,较价廉的灵长类动物,医学生物学的用途很高,已受到广大学者的重视。目的:检测通常用的二抗能否与树鼩的血清发生免疫反应。方法:用Western和ELISA的方法检测树鼩的血清是否与抗兔、抗羊、抗人、抗小鼠、抗大鼠、抗猴的二抗发生交叉反应。结果与结论:Western结果表明树鼩的血清与抗兔、抗羊、抗人、抗小鼠、抗大鼠的二抗均不发生反应,与抗猴的二抗有交叉反应。ELISA的结果也表明树鼩的血清与抗猴的二抗有交叉反应,而与其他二抗没有交叉反应。结果说明通常卖的二抗不能用于树鼩IgG的免疫检测,只有抗猴的二抗与树鼩的血清发生交叉反应,必需制备抗树鼩IgG的单克隆和多克隆抗体,在没有现成抗体可用时,可采用抗猴的二抗替代检测,能在树鼩疾病动物模型的研究中得到广泛应用。
- 阮光萍姚翔刘菊芬王金祥何洁杨建勇潘兴华
- 关键词：实验动物树鼩国家自然科学基金
- 鸡卵清提取液中小于3kDa的成分有促细胞增殖的作用被引量：4
- 2014年
- 在前期研究中发现,鸡卵清提取液有促细胞存活与增殖的作用。在该研究中,作者进一步分离鸡卵清提取液的各成分,找到促细胞增殖的主要成分。用超滤管将鸡卵清提取液分为大于3 kDa和小于3 kDa的成分,用于细胞增殖活性测定,发现鸡卵清提取液中小于3 kDa的成分有促293T细胞增殖的作用。可将鸡卵清提取液分离小于3 kDa的成分作为促293T细胞增殖的有效成分。
- 阮光萍王金祥刘菊芬舒帆杨建勇庞荣清潘兴华
- 关键词：细胞增殖小分子物质
- 四种细胞移植重建C57BL雌鼠免疫功能的对比
- 2012年
- 背景:据报道肌肉来源的细胞能重建造血功能,还需要进一步观察其他系细胞是否也能重建造血功能。目的:对比不同细胞对C57BL雌鼠造血功能恢复的作用。方法:摘眼球取绿色荧光蛋白转基因雄鼠外周血,溶血后制成白细胞,再取脾脏、肝脏制成脾细胞和肝细胞悬液,同时制备骨髓细胞。将C57BL雌鼠半致死量射线照射后,回输4种细胞,并在移植后18,39,53d检测外周血绿色荧光蛋白阳性细胞。同时标记CD4-PE和CD8-PE,并在移植后100d杀鼠取骨髓检测Y染色体阳性率。结果与结论:移植后18,39,53d均在C57BL雌鼠外周血检测到绿色荧光蛋白阳性细胞;C57BL雌鼠外周血绿色荧光蛋白阳性细胞百分比:回输脾细胞和骨髓细胞>回输肝细胞>回输外周血白细胞。同时在回输脾细胞和骨髓细胞的C57BL雌鼠外周血中检测到绿色荧光蛋白和CD4双阳性细胞、绿色荧光蛋白和CD8双阳性细胞,而回输肝细胞和外周血白细胞的C57BL雌鼠外周血中几乎未检测到双阳性细胞。移植后100d检测到的Y染色体阳性率与外周血中绿色荧光蛋白阳性率呈正相关。结果说明绿色荧光蛋白转基因雄鼠的外周血白细胞、脾细胞、肝细胞和骨髓细胞均有重建造血功能的作用,其中脾细胞与骨髓细胞作用相似,作用大于肝细胞,肝细胞作用大于白细胞。
- 阮光萍王金祥姚翔邓永丽庞荣清蔡学敏王强马丽花潘兴华
- 关键词：转基因鼠造血功能造血重建脾细胞
- 实验性猕猴2型糖尿病模型的建立及评价
- 2016年
- 背景:目前国内外关于2型糖尿病的非人灵长类动物模型研究报道很少,缺乏标准化制作方法和评价标准。目的:建立一种安全、有效的猕猴2型糖尿病模型及评价方法。方法:将12只猕猴随机分为实验组(n=9)与对照组(n=3),实验组高糖高脂饮食喂养4周后,一次性腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素,建立2型糖尿病模型;对照组注射等量生理盐水。注射第12周,采集外周血血清,测定空腹血糖、血脂、胰岛素、C-肽水平,通过静脉葡萄糖耐量试验、C-肽释放试验检测胰腺胰岛功能,取胰腺、肾脏、肝脏组织行病理组织学检查。结果与结论:(1)注射第12周时,实验组空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇均显著高于对照组(P<0.05),C-肽及胰岛素显著低于对照组(P<0.05);(2)实验组静脉葡萄糖耐量试验曲线下面积较对照组增大(P<0.05),C-肽释放试验曲线下面积明显减小(P<0.05);(3)实验组胰腺、肝脏、肾脏组织切片显示均发生了典型糖尿病病理改变;(4)因此认为高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素诱导猕猴2型糖尿病模型成功,是一种简单安全、有效的方法。
- 宋巧巧周慧良镇海涛王娜邓晶王金祥潘兴华
- 关键词：2型糖尿病猕猴链脲佐菌素高糖高脂饮食国家自然科学基金
- 巨细胞病毒pp65抗原检测的新方法被引量：6
- 2012年
- 目的传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光,操作麻烦,步骤较多,整个实验需要6个多小时,而且只能定性。需要寻找一种简便的可以定量的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。因此我们设计了流式的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。方法我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行了流式标记移植病人外周血中的WBC,操作步骤明显简便了,只需不到2 h就可完成检测,而且可以定量检测CMVpp65抗原阳性细胞。同时我们用荧光定量PCR检测病人尿中的CMV基因的拷贝数。结果流式检测阳性率高的标本,用间接免疫荧光方法检测也为阳性,同时流式检测强阳性的病人尿用荧光定量PCR检测到CMV基因,表明病人处于CMV病毒血症。结论我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行流式标记,成功检测了移植病人的CMVpp65抗原阳性细胞的百分比,新方法可以定量,与荧光定量PCR方法检测病人尿中的CMV基因的结果符合率较高,可以推广应用。
- 阮光萍王金祥姚翔庞荣清邓永丽吕燕波王强马丽花潘兴华
- 关键词：巨细胞病毒PP65抗原间接免疫荧光流式细胞术荧光定量PCR
- 经诱导的绿色荧光蛋白转基因C57BL雄鼠脾细胞移植重建雌鼠造血功能研究
- 2011年
- 目的探讨雄性C57BL绿色荧光蛋白(GFP)鼠诱导的脾细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法建立小鼠造血衰竭模型,移植鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞,检测诱导后细胞的干细胞标志抗原表达;观察受体存活时间,检测外周血白细胞计数、外周血GFP阳性细胞,进行荧光原位杂交检测Y染色体;各组受体脾和肺切片观察GFP细胞分布。结果鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞比未诱导的脾细胞表达更多的干细胞标志抗原。1×106个脾细胞经尾静脉回输经致死剂量照射的雌性小鼠,明显延长小鼠存活时间,提高小鼠外周血白细胞计数。诱导组受体外周血中检测到GFP阳性细胞,骨髓中检测出60%的细胞含Y染色体。诱导组受体脾和肺切片观察到GFP阳性细胞分布。结论鱼卵提取物诱导的小鼠脾细胞中含较多的多能干细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建其造血功能。
- 阮光萍姚翔王金祥邓永丽庞荣清王强潘兴华
- 关键词：转基因鼠绿色荧光蛋白造血重建
- 重编程的机制研究进展
- 2015年
- 旧的观点认为发育是不可逆的过程,而从分化的供者细胞克隆出哺乳动物驳斥了这个观点。现已证明卵母细胞能重编程供者核到胚胎状态,并发育成一个新的生物。未来将研究替代核移植的重编程方法,不使用卵母细胞,在培养皿中重编程。本文综述了重编程的几种方法,包括核移植、细胞融合、细胞提取物、培养诱导和分子介导重编程的方法,对重编程的机制进行了探讨。
- 阮光萍姚翔刘菊芬何洁王金祥杨建勇庞荣清潘兴华
- 关键词：重编程核移植细胞融合
- 干细胞移植治疗糖尿病肾病被引量：9
- 2013年
- 背景:糖尿病肾病所致的终末期肾病已成为慢性肾功能衰竭的主要原因,传统的血液透析和肾脏移植已无法满足临床治疗的需求,以干细胞为基础的再生医学研究有可能为糖尿病肾病的治疗带来新的希望。目的:综合分析不同来源干细胞治疗糖尿病肾病的机制及临床研究进展。方法:应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中2006年1月至2011年8月关于干细胞治疗糖尿病肾病的文章,在标题和摘要中以"胚胎干细胞;骨髓间充质干细胞;诱导性多能干细胞;糖尿病肾病"或Embryonic stem cells;Bone marrow mesenchymal stem cells;induced poluripotent stem cells;induced multipotent stem cells;diabetic nephropathy"为检索词进行检索。最终选择26篇文章进行综述。结果与结论:胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、诱导性多能干细胞均具有向肾脏组织细胞分化的潜能,大量研究表明干细胞移植对肾脏损伤和修复具有积极的作用。通过对干细胞相关特性的描述和相关机制的研究,干细胞移植有可能为糖尿病肾病提供一种新型的治疗方案。
- 杨晓燕潘兴华阮光萍庞荣清蔡学敏
- 关键词：干细胞胚胎干细胞诱导性多能干细胞糖尿病肾病国家自然科学基金
- 体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展
- 2013年
- 背景:克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。目的:探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以"重编程,方法,体细胞,干细胞,分化"或"reprogramming,method,somatic cell,stem cell,differentiation"为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。结果与结论:一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。
- 阮光萍王金祥杨晓燕宋巧巧姚翔庞荣清潘兴华
- 关键词：干细胞多能干细胞胚胎干细胞重编程体细胞
- SPIO、DAPI双重标记猕猴骨髓间充质干细胞：对细胞活性及增殖的影响被引量：3
- 2015年
- 背景:传统的细胞移植示踪方法均需要在体外状态下进行组织学切片鉴定和分析,这显然限制了干细胞移植进入临床应用,因此,探索无创的、可多次重复应用的活体示踪方法已成为迫切亟待解决的问题。目的:观察SPIO和DAPI双标记猕猴骨髓间充质干细胞的效果及对干细胞存活、增殖的影响。方法:全骨髓贴壁法分离培养猕猴骨髓间充质干细胞,并采用流式细胞术对骨髓间充质干细胞进行鉴定。用SPIO和DAPI双标记骨髓间充质干细胞,通过荧光显微镜观察DAPI标记阳性率,普鲁士蓝染色和透射电镜鉴定SPIO标记阳性率,MTT检测标记细胞的活性、增殖能力。结果与结论:采用全骨髓贴壁法成功获得高纯度猕猴骨髓间充质干细胞,纯度达95.1%。SPIO和DAPI成功标记骨髓间充质干细胞,标记阳性率达95%-98%,且对干细胞的活性、增殖无影响。
- 宋巧巧周慧良潘兴华
- 关键词：干细胞骨髓干细胞细胞标记骨髓间充质干细胞猕猴SPIODAPI
