国家自然科学基金(30400397)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：韩普莫晓宁钟丽君杨彬娄雅欣更多>>
- 相关机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化
- 2006年
- 目的核凋亡诱导因子1(Nuclearapoptosis-inducingfactor1,NAIF1)是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因,为了通过Polldown实验研究其结合蛋白,在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1(73-327)的截短体。方法通过PCR方法扩增出NAIF1(73-327)cDNA,并插入pGEX-KG载体,实现插入基因的融合表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)检测分析。结果DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX-KG-NAIF1(73-327),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物分子量约为53kD,与预期一致,表达量约占菌体总蛋白的22%,纯化蛋白经Westernblot和二级质谱(MS/MS)分析证明表达蛋白为GST-NAIF1(73-327)融合蛋白。结论获得了重组GST-NAIF1(73-327)融合蛋白的高效表达,为下阶段NAIF1的结构与功能研究打下了基础。
- 韩普莫晓宁钟丽君杨彬马大龙娄雅欣
- 关键词：重组蛋白蛋白纯化大肠杆菌
