国家自然科学基金(30400394)
- 作品数：13 被引量：26H指数：3
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- Bestatin下调卵巢癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制作用
- 2009年
- 目的探讨氨肽酶N抑制剂Bestatin对肿瘤患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg的生物学效应及机理。方法将Bestatin加入PHA刺激新鲜分离的卵巢癌患者外周血Treg细胞的体外培养体系，采用流式细胞术分析Foxp3和CTLA-4的表达。进而分析Bestatin对Treg细胞抑制CD4^＋CD25T细胞活化增殖的影响。结果Bestatin可抑制Treg胞表达Foxp3和CTLA-4，并促进Treg细胞和CD4^＋CD25^＋T细胞的体外共培养体系中T细胞的增殖。结论抑制氨肽酶N可下调Treg细胞的免疫抑制作用，对肿瘤治疗具有潜在应用价值。
- 陆恬葛彦居颂文蒋林华张弛孙雪薇居颂光
- 关键词：氨肽酶NCD13BESTATINTREG
- 4-1BBL介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平;流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡,同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和IFN-γ及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中,活化T细胞表达的4-1BBL分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子,进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。
- 居颂文居颂光仇红霞王凤鸣王明元胡玉敏刘彤刘高勤张学光
- 关键词：4-1BBL逆向信号共刺激分子T细胞活化
- “一箭双星法”构建Flt3转基因细胞株
- 2005年
- 目的构建稳定表达Flt3分子的转基因细胞株。方法将Flt3基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染能力的完整重组病毒载体,进而采用“一箭双星法”即同时感染BaF和L929细胞,构建Flt3转基因细胞株。结果成功获得稳定表达Flt3的转基因细胞株BaF/Flt3和L/Flt3。结论采用“一箭双星法”成功构建Flt3转基因细胞株,为以Flt3为靶分子的研究奠定了物质基础,也为类似的高难度的转基因细胞株的构建提供了有价值的经验。
- 居颂光居颂文仇红霞傅晋祥周斌王凤鸣胡玉敏朱华亭刘彤刘高勤张学光
- 关键词：FLT3
- 一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究
- 2008年
- 目的:鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人4-1BBL分子的基因转染细胞L929/4-1BBL为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术分析和多次克隆化培养,筛选特异性杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法对单抗的生物学特性进行鉴定,并采用体外细胞计数和ELISA检测分析单抗对单核细胞的作用。结果:获得1株持续、稳定分泌鼠抗人4-1BBL单抗的杂交瘤细胞株,命名为3E7。该单抗能识别人白血病细胞株和单核细胞表面的4-1BBL分子。对单抗生物学功能的研究结果表明,该单抗能有效地促进外周血单核细胞体外生长,并促进IL-6和TNF-α的分泌。结论:成功地获得了一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体3E7,该单抗能特异地识别人4-1BBL分子,并有效地通过激发4-1BBL逆向信号通路促进单核细胞的体外生长及细胞因子的分泌。
- 王旭东周斌李文香於葛华张光波张学光
- 关键词：4-1BBL单克隆抗体共刺激信号杂交瘤
- FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应被引量：3
- 2005年
- 目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。
- 居颂光居颂文傅晋翔仇红霞王明元周斌王凤鸣刘彤刘高勤邱玉华张学光
- 关键词：FL转基因细胞U937细胞转基因细胞FL细胞膜型L929细胞
- 人4-1BBL转基因细胞株的构建及其生物学功能的研究被引量：1
- 2006年
- 目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能,构建人4-1BBL转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4-1BBL与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。3H-TdR掺入实验分析4-1BBL转基因细胞对T细胞增殖的影响,ELISA法分析细胞因子的分泌。结果流式细胞仪表型分析结果表明,L929/4-1BBL转基因细胞稳定表达人4-1BBL分子。体外实验表明,L929/4-1BBL细胞能够促进T细胞活化、增殖及IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌。结论该研究成功克隆了人4-1BBL基因,构建了能稳定表达4-1BBL分子的转基因细胞株L929/4-1BBL,该株转基因细胞能提供有效的4-1BBL共刺激信号,促进T细胞活化、增殖及细胞因子的分泌。
- 居颂文居颂光仇红霞胡玉敏王凤鸣王明元王勤张学光
- 关键词：4-1BBL转基因细胞T细胞
- 4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达被引量：3
- 2006年
- 目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,细胞计数法和3H-TdR掺入法评价细胞系的体外生长和增殖。结果:FACS结果显示4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系上有不同程度的表达,其中髓性白血病细胞系U937、HL60及B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi上呈现较高水平的表达。细胞计数和3H-TdR掺入实验结果表明mAb1F1对髓性白血病细胞系U937和HL60,具有较强的促增殖效应。结论:共刺激分子4-1BBL分子在髓性白血病细胞系和B淋巴瘤细胞系上表达率较高;4-1BBL分子可通过介导逆向信号促进髓性白血病细胞系U937和HL60的生长和增殖。
- 仇红霞居颂光居颂文吴静妮张学光
- 关键词：4-1BBL逆向信号
- CD137信号下调乳腺癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制功能被引量：3
- 2009年
- 目的探讨CD137信号对CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)的生物学效应及机制。方法采用激发型抗人CD137单抗加入PHA刺激的乳腺癌患者外周血T细胞培养体系及Treg细胞培养体系中,利用细胞计数及~3H-TdR掺入法分析T细胞的增殖,流式细胞术分析细胞膜分子和Foxp3表达,ELISA分析细胞因子的分泌。结果CD137分子表达于乳腺癌患者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞膜;抗人CD137单抗加入PHA活化的乳腺癌患者T细胞培养体系后,T细胞增殖明显增加,Foxp3^+Treg细胞比例明显下降;激发CD137信号可下调CD4^+CD25^+Treg细胞的Foxp3表达,抑制Treg细胞产生TGF-β1和IL-10,以及下调Treg细胞对PHA刺激的CD4^+CD25^-T细胞增殖的抑制效应。结论CD137信号可抑制Treg细胞的免疫抑制功能,CD137可能是对Treg细胞进行免疫干预的重要靶点。
- 陆恬蒋林华张弛孙雪薇居颂光
- 关键词：CD137CD4^+CD25^+调节性T细胞乳腺癌
- 人Flt3全长基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建
- 2005年
- 目的克隆人Flt3全长基因,构建PGE/Plt3逆转录病毒表达载体。方法以人骨髓cDNA等基因文库为模板,采用分段克隆、人工PCR延伸及PCR连接等方法,获得了人Flt3全长基因,并构建Flt3基因的逆转录病毒表达载体。结果成功克隆Flt3全长基因和构建PGEZ/Flt3逆转录病毒表达载体。结论F1t3全长基因克隆及构建逆转录病毒表达载体的成功,为构建Flt3转基因细胞和制备抗人Flt3单克隆抗体和研究Flt3的生物学功能奠定了物质基础,也为低丰度和长片段基因克隆提供了有价值的经验。
- 居颂光居颂文仇红霞傅晋祥周斌王凤鸣朱华亭胡玉敏刘彤刘高勤张学光
- 关键词：FLT3克隆
- 4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用被引量：7
- 2006年
- 目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。
- 仇红霞张学光居颂光居颂文吴倩妮刘高勤周斌王凤鸣
- 关键词：逆向信号
