全球变化研究国家重大科学研究计划(2006CB910802)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：吴敏聂晶于淼张令强许望翔更多>>
- 相关机构：军事医学科学院安徽医科大学天津大学更多>>
- 发文基金：全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- HP1γ通过与肝细胞核因子1α相互作用抑制其转录活性
- 2012年
- 目的初步探讨肝细胞核因子1α(HNF1α)与异染色质蛋白1γ(HP1γ)的相互作用及其功能。方法首先以成人肝cDNA文库为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出552 bp的HP1γcDNA片段,然后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Myc-HisB,转染HepG2细胞后提取总蛋白进行Western印迹鉴定,进而通过GST沉降实验验证HP1γ与HNF1α的相互作用区段,最后通过荧光素酶报告基因实验HP1γ/HNF1α相互作用的功能。结果通过测序证实真核表达载体Myc-HP1γ构建成功,Western印迹证明Myc-HP1γ可在真核细胞中表达;GST沉降结果表明HP1γ与HNF1α的N端1-189氨基酸相互作用;报告基因实验证明HP1γ抑制HNF1α的转录活性。结论 HP1γ通过与HNF1α相互作用抑制HNF1α的转录活性。
- 李典镕詹轶群许望翔于淼
- 关键词：蛋白质相互作用转录调节
- 蛋白酶体激活因子REGγ的重组表达及其体外功能的初步探讨
- 2010年
- 目的蛋白酶体激活因子11S调节蛋白复合物γ亚单位(11S regulator complex gamma subunit,REGγ)的重组表达,初步探讨其与骨形成负调控分子酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(caseinkinase-2interactingprotein-1,CK-IP-1)的相互作用。方法首先以质粒pCMV-Myc-REGγ为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出765bp的REGγcDNA片段,然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2并转化入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,表达产物超声破碎后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定,进而通过GSTPull-down实验验证REGγ是否与CKIP-1存在相互作用。结果通过测序证实原核表达载体pGEX-4T-2-REGγ构建成功,进一步表达鉴定发现GST-REGγ蛋白主要以可溶性的形式存在于裂解上清中;GSTPull-down实验表明REGγ与CKIP-1存在明显的相互作用。结论REGγ与CKIP-1在体外存在相互作用,为进一步深入研究REGγ对CKIP-1的调控作用奠定了基础。
- 吴敏聂晶张令强汪渊
- 关键词：质粒聚合酶链反应
