国家自然科学基金(30400388)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- siRNA抑制生存素基因对恶性黑素瘤细胞A375凋亡的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞株A375生存素基因表达后,对A375细胞凋亡的影响。方法构建针对凋亡抑制基因生存素的siRNA真核表达载体pU-生存素-siRNA,用电穿孔法转染A375细胞,采用蛋白质印迹技术检测生存素的表达,并用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果转染pU-生存素-siRNA后,生存素在A375细胞中的表达(0．24±0．02)较对照组(0．98±0．21)明显下降, 试验组细胞的凋亡率(83％)较对照组(28％)明显增加。结论通过RNA干扰技术可抑制生存素的表达, 诱导A375细胞的凋亡增加。
- 陈思远程璟黄长征钱悦涂亚庭
- 关键词：黑色素瘤生存素
- 人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因的克隆及其鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的为了研究人黑素瘤M IA/CD-RAP基因的生物学功能,克隆M IA/CD-RAP的cDNA,构建表达载体后,对其进行酶切和DNA测序鉴定。方法用RT-PCR从培养的人黑素瘤细胞A375中扩增M IA/CD-RAP cDNA,将其克隆到载体pcDNA3.1-MycH is上,经酶切及PCR扩增鉴定和测序。结果酶切电泳和DNA测序结果表明,成功地克隆了人黑素瘤M IA/CD-RAP cDNA。结论人黑素瘤M IA/CD-RAP cDNA的克隆,可为进一步研究其生物学功能奠定基础。
- 陈思远黄长征钱悦连昕涂亚庭
- 关键词：克隆黑素瘤
- 人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因启动子的克隆及其鉴定
- 2006年
- 目的:克隆MIA/CD-RAP的启动子序列并对其进行酶切和DNA测序鉴定。方法:从培养的人黑素瘤细胞A375基因组DNA中扩增出MIA/CD-RAP启动子序列,并将其克隆到载体pGL2-Ba-sic上,再经酶切及PCR扩增鉴定和测序。结果:酶切电泳和DNA测序结果表明,已成功克隆了人黑素瘤MIA/CD-RAP启动子序列。结论:人黑素瘤MIA/CD-RAP启动子序列的克隆,可为进一步研究MIA/CD-RAP基因的表达调控奠定基础。
- 陈思远黄长征钱悦涂亚庭
- 关键词：启动子克隆黑素瘤
- MIA基因-RNAi对人黑素瘤A375细胞增殖的影响
- 2006年
- 目的探讨RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞株A375MIA基因表达后,对A375细胞增殖的影响。方法构建针对人黑素瘤A375细胞(MIA)基因3个不同靶序列的RNAi真核表达载体pLTE-hMIA-RNAi,用磷酸钙细胞转染法把构建的载体分别转染HEK293细胞,采用Western技术和RT-PCR技术分别检测MIA基因蛋白的表达和mRNA水平。选择对MIA基因表达抑制作用最强的RNAi载体转染A375细胞后,用细胞计数检测细胞增殖的变化。结果构建的3个RNAi质粒和对照组相比,pLTE-hMIA-RNAi352质粒对MIA的表达减少量>80%,hMIA的mRNA水平下降约83%,与对照组比较差异有显著性意义。而pLTE-hMIA-RNAi203、pLTE-hMIA-RNAi343质粒对MIA的表达及mRNA水平的影响,与对照组比较差异无显著性意义。转染pLTE-hMIA-RNAi352质粒的A375细胞增殖能力较对照组显著下降。结论构建的针对人MIA基因352位靶序列的RNAi质粒pLTE-hMIA-RNAi352可显著抑制MIA的表达及A375细胞增殖。
- 陈思远黄长征钱悦连昕涂亚庭
- 关键词：黑素瘤RNA干扰
- 黑素瘤MIA启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统选择性杀伤黑素瘤细胞
- 2007年
- 目的:探讨黑素瘤抑制蛋白(melanoma inhibitory activity,MIA)启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统,对黑素瘤细胞A375的选择性杀伤作用。方法:构建腺病毒穿梭质粒pAdrMIA-CD/TK,在293细胞内包装、扩增、纯化后,体外转染人表皮黑素细胞HeMa-LP、黑素瘤细胞A375和人宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测基因CD和TK片段,加入前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或丙氧鸟苷(GCV),用MTT法测定该体系对细胞株的杀伤效应。结果:制备的病毒滴度为1×1011pfu/L,用100m.o.i.重组腺病毒感染细胞后,发现目的基因CD和TK片段可在黑素瘤细胞中表达,转染目的基因的黑素瘤细胞A375对5-FC和GCV具有一定的敏感性,细胞存活率较对照组显著下降(P<0.05),联合应用两种药物对A375细胞的杀伤作用较单用一种显著增强(P<0.05)。对人表皮黑素细胞HEMa-LP和人宫颈癌细胞HeLa无显著杀伤作用。结论:构建的黑素瘤MIA启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统,在体外可选择性杀伤黑素瘤细胞A375。
- 陈思远黄长征钱悦连昕冯爱平涂亚庭
- 关键词：黑素瘤自杀基因
