广西留学回国人员基金(0236005)
- 作品数：15 被引量：84H指数：7
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- H5和H7亚型禽流感病毒多重反转录聚合酶链反应快速检测及鉴别方法的建立被引量：12
- 2005年
- 参考禽流感病毒(AIV)M基因和HA基因序列设计了3对引物,其中1对为针对不同HA亚型AIV的通用引物,另外2对为分别针对AIVH5和H7亚型的特异性引物。这些引物所扩增的cDNA片段大小分别为244、860和634bp。利用这3对引物,通过对多重RTPCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别AIVH5、H7亚型的多重RTPCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术对AIVH5亚型同时扩增出2条大小分别为244bp和860bp的cDNA片段;对AIVH7亚型同时扩增出2条大小分别为244bp和634bp的cDNA片段;对AIVH5和H7亚型混合样品能同时扩增出3条大小分别为244、860和634bp的cDNA片段;对其他AIVHA亚型只扩增出1条244bp的cDNA片段;对其他常见禽病病原扩增均为阴性;该多重RTPCR对AIVRNA、AIVH5和AIVH7亚型RNA的最低检出量分别为10、100和100pg。
- 谢芝勋庞耀珊邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：H5亚型H7亚型禽流感病毒
- 11株新城疫病毒广西分离株P基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2007年
- 根据基因库的新城疫病毒(NDV)的磷蛋白(P)基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对11个NDV广西分离株的P基因进行RT-PCR扩增和序列测定,P基因阅读框的核苷酸序列全长均为1188bp,编码395个氨基酸。核苷酸及氨基酸全序列比较分析,结果表明:11个NDV广西分离株与10个参考株的核苷酸序列同源性为81.2%～97.8%,氨基酸同源性为78.8%～97.0%。
- 刘加波谢芝勋唐小飞庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：新城疫病毒克隆
- 多重RT-PCR快速检测鉴别新城疫病毒强毒株和弱毒疫苗株方法的建立被引量：13
- 2005年
- 根据新城疫病毒(NDV)基因结构的特点及强、弱毒株融合基因裂解位点的序列差异设计了4条引物,建立了一种可以快速鉴别NDV强毒株和弱毒疫苗株的多重PCR方法。检测结果显示,强毒株可以扩增出442 bp的特异性片段和671 bp的通用片段,弱毒疫苗株可以扩增出252bp的特异性片段和671 bp的通用片段。该方法只需进行一次RT-PCR,整个过程可在数小时内完成。经敏感性测定,该方法最低能检测到100 pg的NDV RNA。
- 唐小飞谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：新城疫病毒逆转录聚合酶链反应强弱毒株
- 3株新城疫病毒广西分离株L基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2006年
- 根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列，设计了3对引物（L1和L2、13和14、L5和L6）。用RT．PCR技术对3株新城疫病毒广西分离GX7／02、GX9／03、GX11／03的L基因进行了分段扩增和克隆，并对克隆出来的3个片段进行序列测定，用DNAstar软件比较分析后进行拼接，得到长约为6．8kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6704bp，拥有一个6615bp的开放阅读框，推导其编码的氨基酸数为2204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98．6％～98．7％；与ZJ1株同源性为98．8％～98．9％；与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92．0％～94．2％。
- 唐小飞谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：新城疫病毒克隆
- 新城疫病毒广西分离株M基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2009年
- 根据基因库中新城疫病毒M基因核苷酸序列,设计一对特异性引物,对2000年-2003年期间广西分离的11个NDV毒株的M基因进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定。结果表明,11个NDV广西分离株的M基因都为1223个核苷酸,含有1个1095bp核苷酸阅读框(ORF),编码364个氨基酸。序列分析结果表明,这11个NDV分离株核苷酸的同源性在86%～99.9%之间,推导氨基酸的同源性在89.3%～99.7%之间;11个毒株与国内外其他7个NDV毒株比较核苷酸的同源性在83.3%～98.5%之间,推导氨基酸的同源性在87.4%～98.6%之间。
- 唐小飞谢芝勋刘加波邓显文庞耀珊孙建华
- 关键词：新城疫病毒克隆
- 11株新城疫病毒广西分离株NP基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2005年
- 根据基因库中新城疫病毒(NDV)的NP基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000～2003年暴发新城疫的鸡群中分离的11株NDV毒株NP基因进行RT-PCR扩增和序列测定,拼接出11个NDV广西分离株的NP基因的全序列,10个NDV广西分离株的NP基因阅读框的核苷酸序列全长均为1470 bp,编码489个氨基酸,它们的NP基因核苷酸全序列及推导的氨基酸全序列与10个已发表的NDV参考株的NP基因全序列比较分析结果表明:核苷酸序列同源性为84.8%～98.2%,氨基酸同源性为89.8%～99.4%.
- 孙建华谢芝勋刘加波唐小飞庞耀珊邓显文
- 关键词：新城疫病毒F蛋白基因克隆
- 真核表达质粒pTracer-CMV2FIL2在鸡体组织中表达及分布规律
- 2009年
- 将3周龄的三黄鸡肌肉接种200μg真核表达质粒pTraeer-CMV2FIL2，巢式PCR法检测血清、心、脾脏、肺脏、法氏囊、脑、骨髓、胸腺和肌肉接种部位中pTracer-CMV2FIL2出现和存留的时间；荧光定量PCR法检测其在血液中的动态变化；RT-巢式PCR法检测其在上述部位的表达情况。结果显示，接种后2-3h血清中可检测到pTracer-CMV2FIL2，6h时在血液中的含量最高，7d时已经检测不到；4h后在上述器官中可陆续检测到pTracer-cMV2FIL2的出现，13d后陆续消失；1d后可陆续检测到质粒所转录的mRNA，13d后陆续消失；接种后2h可在接种部位肌肉的细胞中检测到pTracer-CMV2FII。2的出现，10h可检测到mRNA，150d时仍然可以在肌肉接种部位的细胞中检测到质粒和mRNA存在。
- 董建宝谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢丽基
- 关键词：DNA疫苗
- 多重RT-PCR快速检测鉴别H7亚型禽流感病毒方法的建立被引量：11
- 2005年
- 目的参考AIVM基因和HA基因序列,设计了两对引物。其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有亚型AIV,跨幅244bp;XZH7-1和XZH7-2为H7亚型特异性引物,跨幅634bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H7亚型AIV的多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术对H7亚型AIV同时扩增出两条大小分别为244bp和634bp的cDNA片段,对其他亚型AIV只扩增出244bp的cDNA片段,对其他常见禽病病原无特异性扩增,结果为阴性;该多重RT-PCR对AIVRNA的最低检出量为1pg,对H7亚型AIVRNA的最低检出量为10pg。
- 庞耀珊谢芝勋邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：反转录聚合酶链反应禽流感病毒H7亚型
- 新城疫病毒广西分离株F基因的克隆和序列分析被引量：13
- 2005年
- 根据GenBank中登录的新城疫病毒(NDV)F基因序列设计了2 对引物,对从广西分离的10株NDV毒株的F基因进行了分段扩增和序列测定,其基因序列全长均为1 662 bp,编码553个氨基酸,均有6个潜在的糖基化位点。将其F基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列与已发表的10株NDV 参考株的F 基因序列进行了比较。结果表明,核苷酸序列的同源性为82.6% ~98.1%,氨基酸的同源性为87.7%~98.7%。这10株NDV广西分离株在裂解位点的氨基酸序列(112R R Q K/R R F117)与NDV强毒株特征相符合。系统发育树、酶切位点分析和基因分型结果表明,10 株NDV广西分离株中GX1/00、GX2/00、GX4/00、GX6/02、GX7/02、GX9/03、GX10/03和GX11/03为基因Ⅶd亚型,GX3/00和GX5/00为基因Ⅲ型。
- 唐小飞谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文
- 关键词：新城疫病毒F基因克隆
- 3株H9N2亚型禽流感病毒广西分离株全基因组序列的测定与分析被引量：9
- 2007年
- 目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/00的全基因序列,并对所得序列进行了比较分析。结果同源性分析及遗传进化分析发现,所分离的3个毒株的各基因与A/Chicken/Guangdong/4/00和A/Chicken/Jiangsu/1/00的相应基因的核苷酸序列有着较高的同源性和较近的亲缘关系,可能起源于同一种系。所分离毒株中每个毒株的8个基因,在遗传进化树上的分支不具有统一性,说明此3个毒株可能为不同基因亚系间发生自然重排的产物。氨基酸序列比较发现,A/Chicken/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/003株AIV的na基因核苷酸序列在开放性阅读框架的187～195位均缺失了ACAGAGATA共9个核苷酸,它们所编码的氨基酸为T、E、I。3个分离株的HA蛋白第226位氨基酸均为Gln,证明它们为人类非易感性的H9N2亚型AIV。结论此3株H9N2亚型流感病毒为基因自然重排的产物,其na基因均存在缺失,且从分子水平上证明它们对人类不具有易感性。
- 谢芝勋董建宝唐小飞刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：禽流感H9N2亚型全基因组
