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DcR3在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义被引量：2: 2013年; 应用RT-PCR、Western blot、免疫组化分别检测甲状腺乳头状癌组织与癌旁正常甲状腺组织标本中DcR3 mRNA及蛋白的表达情况,探讨DcR3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。RT-PCR检测显示,甲状腺乳头状癌中DcR3 mRNA的表达明显高于正常甲状腺组织(P<0.05);Western blot提示,DcR3蛋白在甲状腺乳头状癌中表达比正常甲状腺组织高(P<0.05);免疫组化显示,DcR3蛋白在甲状腺乳头状癌中高表达(P<0.05)。DcR3 mRNA及蛋白质在甲状腺乳头状癌及正常甲状腺组织间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。DcR3基因及蛋白在甲状腺乳头状癌中高表达,提示DcR3可能促进了甲状腺乳头状癌的发生发展。; 赖永锋邢萍徐锦叶权明明金晓燕杨晶金张强梁勇; 关键词：甲状腺乳头状癌 DCR3 肿瘤坏死因子受体

丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析被引量：1: 2013年; 目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L,该载体能诱发小鼠产生高滴度的抗丙肝核心抗原的抗体,流式和real time结果证实该质粒能诱使小鼠T淋巴细胞由T0期向Th1和Th2转换,并以Th1为主,CTL杀伤结果显示该表达质粒能诱使小鼠产生高水平的细胞杀伤能力。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-core-CD40L,该质粒能够在小鼠体内正确表达,并能诱发高水平的细胞杀伤活性。; 陈佳玉戚永孝陈洁金晓燕张丽荣; 关键词：CD40 配体

HCV发夹状siRNA表达质粒的构建及作用研究被引量：1: 2013年; 目的建立HCV感染动物模型,并对HCV进行RNA干涉。方法制备HCV感染的HepG2细胞,RT-PCR法鉴定后腋下注射裸鼠,免疫组化法检测瘤组织内HCV NS3表达情况。制备带绿色荧光蛋白(GFP)的HCVsiRNA表达质粒,转染HepG2细胞,观察GFP表达情况。将此质粒注射模型小鼠,取瘤组织,RT-PCR及免疫组化法对其进行检测。结果在HCV感染的裸鼠实体瘤中检测到HCV NS3蛋白的稳定表达。成功构建了HCV发夹siRNA表达质粒,该质粒转染细胞后能够在其内正确表达。将该质粒尾静脉注射HCV感染的模型小鼠,注射4d后瘤组织内HCV NS3抗原阳性细胞阴转。结论成功建立了HCV感染的裸鼠模型,构建了HCV发夹siRNA表达质粒,该质粒能成功地干涉模型小鼠中的HCV。; 陈佳玉戚永孝王泰鑫张丽婷林平; 关键词：丙型肝炎病毒 RNA干涉

ECRG4蛋白与细胞膜上胆固醇之间的相关性研究: 2013年; 目的探讨ECRG4在脂筏中分布及与细胞膜胆固醇含量的相关性。方法通过RT-PCR及Westernblot鉴定ECRG4阳性表达细胞株,用甲基-β-环糊精去除细胞膜上的胆固醇,超速离心的方法分离细胞膜,Western blot检测ECRG4蛋白含量变化。密度梯度离心制备脂筏,通过Western blot检测ECRG4蛋白水平。结果ECRG4在DU4475细胞中高表达,降低细胞膜上胆固醇后,ECRG4水平未发生明显变化;同时Western blot结果证实ECRG4未分布于脂筏。结论 ECRG4蛋白未定位于脂筏,且与细胞膜胆固醇之间无相关性。; 陈佳玉张宇王泰鑫张丽婷; 关键词：胆固醇脂筏

RNA干扰用于柯萨奇病毒B3感染治疗作用研究: 2013年; 目的研究观察自行构建的siRNA表达载体对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的潜在治疗作用。方法以CVB3聚合酶编码区基因序列为靶点,构建发夹型siRNA真核表达载体pGCsi-U6/GFP/P及与CVB基因组序列无关的阴性对照pGCsi-U6/GFP/N。利用脂质体转染进入Hela细胞后,用CVB3毒株进行攻击,观察感染后Hela细胞病变情况,并用RT-PCR法检测细胞培养上清中的CVB3负链RNA水平。结果构建的表达质粒pGCsi-U6/GFP/P在Hela细胞能够正确表达,其表达产物能够使CVB3基因沉默,并间接抑制了CVB3的复制。结论本实验成功构建了能够抑制CVB3的发夹状siRNA表达质粒,该质粒具有增强细胞抗CVB3感染的能力。; 陈洁何嘉莉陈佳琪戴玲珊陈佳玉; 关键词：柯萨奇病毒B3 HELA细胞 RNA干扰

HCV NS3与CD40L胞外段融合蛋白表达载体的构建及免疫性: 2013年; 目的构建带有丙肝病毒NS3与CD40L胞外段融合蛋白的重组乳酸球菌表达载体,并探讨其电转乳酸球菌后的免疫原性。方法在乳酸球菌表达质粒pMG36e的基础上,应用基因重组技术构建重组表达载体pMG36e-NS3-CD40L。该载体电转乳酸球菌MG1363,口服的方式免疫雄性ICR小鼠。ELISA法检测小鼠外周血中抗NS3蛋白抗体,流式法检测小鼠脾T淋巴细胞亚型,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了乳酸球菌表达载体pMG36e-NS3-CD40L,该载体成功电转入乳酸球菌MG1363。ELISA检测结果显示,该重组乳酸菌口服免疫小鼠后,能诱发小鼠产生高滴度的抗NS3抗原的抗体。流式结果证实,该菌能上调小鼠CD8+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞比率,且以CD8+T淋巴细胞增加更为显著。CTL杀伤结果显示,该重组乳酸菌能上调小鼠CTL杀伤能力。结论成功制备了乳酸球菌表达载体pMG36e-NS3-CD40L,该载体转入乳酸球菌并经口服免疫小鼠后,能够诱发高水平的细胞杀伤活性。; 陈佳玉赵子通刘远洋戴玲珊陈佳琪; 关键词：NS3蛋白 CD40配体乳酸球菌

ECRG4在甲状腺乳头状癌组织中表达水平的研究: 2014年; 目的研究甲状腺乳头状癌组织中ECRG4基因的表达水平,及ECRG4在甲状腺乳头状癌中的作用。方法收取甲状腺乳头状癌组织30例作为病例组,选取相对应的20例正常甲状腺组织作为对照组,通过实时荧光定量PCR法(QRT-PCR)以及免疫组织化学法,检测ECRG4基因及其蛋白在甲状腺组织中的表达情况。结果 QRT-PCR检测结果显示,ECRG4 m RNA在甲状腺乳头状癌中呈现高表达,其表达水平明显高于对照组(P<0.01);免疫组织化学结果也显示,甲状腺乳头状癌中ECRG4蛋白呈现出高表达,显著高于对照组(P<0.01)。结论甲状腺乳头状癌组织中ECRG4基因及其蛋白呈现高表达,ECRG4在甲状腺乳头状癌中可能为一个促癌基因,其在甲状腺癌的发生及发展过程中起着重要作用。; 许平平陈佳琪戴玲珊赵子通金秀媛陈佳玉; 关键词：甲状腺乳头状癌

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浙江省自然科学基金(Y2100248)