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PP2A B56α调节亚基原核表达载体的构建及表达: 2016年; 为了构建PP2A B56α调节亚基原核表达载体,以p CEP-4HA-B56α质粒为模板,设计引物克隆人源PP2A B56αc DNA,连入p GEX-4T-1载体中,测序正确后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并将诱导表达重组蛋白的菌体超声破碎后,进行可溶性分析,对可溶性蛋白进行纯化.SDS-PAGE电泳及Western Blot分析鉴定重组蛋白.结果表明,经测序和酶切鉴定后成功构建重组质粒p GEX-4T-1-B56α,表达大小约79 k D的重组蛋白,可溶性表达的重组蛋白为菌体总蛋白质量的8.6%,经GST纯化系统纯化得到纯度约为78.9%的重组蛋白,回收率达到52.2%.因此,本研究成功构建了PP2A B56α原核表达体系,获得重组蛋白,为研究PP2A B56α的生物学功能奠定了基础.; 赵亚平程晓清孙晓莉李良渊张朝; 关键词：PP2A 原核表达

Circadian Regulation of Cardiac Sodium-Calcium Exchanger in Response to Physiological and Pathophysiological Stimulation: Aim This study was designed to investigate rhythmic expression of NCX1 and circadian clock genes as well as th...; Mingda WenCaihua YuanLiangyuan LiDachuan DongXiaoli SunChenchen ZhangYaping ZhaoZhao Zhang; 文献传递

麦冬皂苷D缓解多柔比星诱导的心肌细胞损伤: 本研究探讨麦冬皂苷D对多柔比星诱导心肌损伤的保护作用。结果表明,多柔比星可诱导H9c2细胞内质网应激相关蛋白的表达量显著上升,并导致细胞活性氧含量增加,活力下降。而麦冬皂苷D预处理可部分逆转多柔比星引起的上述变化,抗氧化...; 张赢予张国辉孟晨高艳红芮涛张朝; 关键词：麦冬皂苷D 多柔比星内质网应激

Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用被引量：1: 2009年; [目的]研究Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用。[方法]利用免疫共沉淀实验确定Snapin蛋白与Cav1.3在体外表达系统和心房组织存在相互作用。[结果]在过表达Snapin和Cav1.3的HEK293细胞及内源性表达二者的心房肌组织中,Snapin蛋白与Cav1.3钙离子通道存在相互作用。; 袁秀杰钱辉刘金旭张沙沙石洁赵钟钟张朝; 关键词：HEK293细胞心房

抗胚胎小鼠心肌α1D钙离子通道抗体的制备及鉴定被引量：1: 2009年; 目的制备针对胚胎小鼠心肌L型钙通道Cav1.3编码的α1D亚基胞内末端的多克隆抗体。方法通过基因重组从小鼠胚胎心脏中获得2种原核表达质粒pGEX-4T-α1DN/α1DC,在大肠杆菌中经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白,纯化得到α1D基因N端和C端产物GST-α1DN/α1DC,用此抗原经弗式佐剂、弗式不完全佐剂乳化后免疫新西兰家兔,收集的免疫血清经protein G Agarose亲和纯化后获得IgG型抗α1D蛋白的多克隆抗体。对这2种抗体采用Westernblot法进行特异性检测,ELISA法测定进行效价分析。结果成功构建α1D胞内片段的原核表达载体,表达纯化了GST融合蛋白GST-α1DC/α1DN,制备2种IgG型多克隆抗体,经ELISA检验证实二者效价均较高,滴度在1:256000时仍有信号,其中GST-α1DN的效价更高。用Westernblot法检测发现,2种抗体都均在相对分子质量240000处得到单一的蛋白印迹条带,特异性良好,能识别小鼠心肌细胞中α1D蛋白。结论用重组融合蛋白GST-α1D作为抗原制备出了具有高效价、强特异性的α1D抗体,为探讨α1D蛋白在小鼠胚胎心脏发育过程中分布的时空特征及研究胚胎发育过程中的钙离子相关信号调控活动奠定了基础。; 翟溯澜张沙沙赵钟钟钱辉张朝; 关键词：胚胎心脏多克隆抗体小鼠

麦冬皂苷D缓解多柔比星诱导的心肌细胞损伤: 本研究探讨麦冬皂苷D对多柔比星诱导心肌损伤的保护作用。结果表明,多柔比星可诱导H9c2细胞内质网应激相关蛋白的表达量显著上升,并导致细胞活性氧含量增加,活力下降。而麦冬皂苷D预处理可部分逆转多柔比星引起的上述变化,抗氧化...; 张赢予张国辉孟晨高艳红芮涛张朝; 关键词：麦冬皂苷D 多柔比星内质网应激; 文献传递

盐酸昌欣沙星抑制开放状态的HERG钾通道被引量：1: 2010年; 探讨一种新型氟喹诺酮类抗菌剂盐酸昌欣沙星(chinfloxacin hydrochloride,CFX)对HERG(human ether-à-go-go-related gene)钾离子通道动力学的影响。利用全细胞膜片钳技术,在HEK293细胞中记录异源表达的HERG钾电流,观察CFX对通道的抑制作用,分析其对通道激活、失活和去激活等动力学过程的影响。结果表明,CFX作用于HERG钾离子通道的开放状态,以浓度依赖的方式抑制HERG钾电流,半有效抑制浓度(IC50)为(162.1±14.2)μmol.L?1,是其改造前体盐酸莫西沙星的2倍,但CFX不改变通道动力学特性。由于改变细胞外液K+浓度,CFX对HERG钾电流抑制作用增强。; 张香梅朱中华孙晓莉郭佳赵钟钟张朝; 关键词：氟喹诺酮

Circadian Regulation of Cardiac Sodium-Calcium Exchanger in Response to Physiological and Pathophysiological Stimulation: Aim:This study was designed to investigate rhythmic expression of NCX1 and circadian clock genes as well as th...; 温明达袁彩华李良渊董大川孙晓莉张晨晨赵亚平张朝; 文献传递

The molecular mechanisms of dysfunctional HERG potassium channels caused by A422T mutation: ＜正＞Human hereditary long QT syndrome is a cardiac arrhythmic disease characterized by prolongation of the QT i...; Jia Guo~1; 文献传递

麦冬皂苷D通过减轻内质网应激对阿霉素所致心肌损伤产生保护作用被引量：26: 2014年; 研究麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OP-D)对阿霉素(doxorubicin,DOX)所致心肌损伤的保护作用。体外培养H9c2细胞,采用MTT法检测细胞毒性,MitoTracker探针法测定细胞内线粒体中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,实时定量PCR和Western blotting分别检测ATF6α,GRP78和CHOP的mRNA及其蛋白表达。结果表明,DOX可诱导H9c2细胞内质网应激相关蛋白的表达量显著上升,并导致细胞活性氧ROS含量增加,细胞活力下降。而OP-D预处理可部分逆转DOX引起的上述变化,siRNA干扰促凋亡转录因子CHOP或抗氧化剂NAC预处理也有类似效应。此外,OP-D可明显减轻DOX所致小鼠心脏超微结构异常。这些结果说明,OP-D通过降低DOX诱导的ROS累积,进而缓解内质网应激而对心肌产生保护作用。; 孟晨袁彩华张晨晨温明达高艳红丁小余张赢予张朝; 关键词：阿霉素麦冬皂苷D 心肌细胞内质网应激

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国家自然科学基金(30570662)

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