国家自然科学基金(30400435)
- 作品数：15 被引量：32H指数：3
- 相关作者：张强胡新华杨军刘程伟张志深更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院佳木斯大学附属第一医院中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省博士科研启动基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- JNK、p38 MAPK在移植静脉血管重塑过程中的表达研究被引量：3
- 2005年
- 目的 研究c Jun氨基末端激酶 (JNK)和p38蛋白激酶 (MAPK)在移植静脉血管重塑过程中的表达。方法 Wistar大鼠 80只 ,建立自体移植静脉模型 ,术后随机分为 6h ,1、3、7,1 4、2 8、4 2、5 6d等 8组 ,于相应时点取材 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测JNK和p38MAPK的mRNA表达 ,Western蛋白印迹检测JNK和p38的蛋白产物及磷酸化蛋白产物表达 ,原位杂交和免疫组化方法定位mRNA及蛋白产物表达 ,脱氧核苷酸转移酶末端标记法 (TUNEL)检测血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的变化。结果 移植静脉术后 6h ,JNK和p38的mRNA表达增强 ,在术后 1 4d达到高峰 ,表达值分别为(2 6± 1 0 ) %和 (5 9± 2 6 ) %,与各时点比较差异有统计学意义 (P <0. 0 1 )。JNK、p38的蛋白产物表达在1 4～ 2 8d达高峰 ,在 5 6d时仍维持一定表达量 (1 .4～ 1 . 2 )。原位杂交及免疫组化提示阳性表达多位于移植血管中层或增生内膜中的血管平滑肌细胞 (VSMC) ,p38与凋亡呈正相关 (r =0 . 892 2 ,P <0. 0 1 )。结论 JNK和p38MAPK通路的激活是移植静脉内膜增生以及血管重塑的关键环节 ,可能成为新的治疗靶点。
- 胡新华杨军刘程伟张宏伟张强
- 关键词：JNKP38静脉血管外科手术
- Ap-1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨Ap-1基因RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(VSMCs)基因对VSMCs增殖的影响。方法以Ap-1基因RNA干扰VSMCs基因,应用MTT比色试验检测VSMCs增殖情况,流式细胞仪检测VSMCs细胞周期,免疫细胞化学染色观察增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果siRNA转染后,3个阳性siRNA转染组Ap-1基因表达水平均降低;VSMCs的MTT吸光度值和PCNA表达量均降低;VSMCs出现明显的G0/G1期阻滞。结论RNA干扰介导的Ap-1基因沉寂可显著抑制VSMCs增殖。
- 张宏伟王欣霍鑫杜惠莲张强
- 关键词：基因AP-1RNA干扰血管平滑肌细胞细胞增殖
- 缺血预适应减轻大鼠后肢缺血再灌注后肺损伤的研究被引量：3
- 2005年
- 目的:探讨缺血预适应(IPC)对大鼠后肢缺血再灌注(I/R)后肺损伤的影响。方法:阻断肾下腹主动脉建立大鼠双侧后肢I/R损伤模型。观察肺组织形态学、湿/干重比、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)的变化。原位杂交和RT PCR检测胞间黏附分子1(ICAM1)mRNA,Western蛋白印迹检测ICAM1。结果:I/R组各项指标表达明显增加,与假手术组、缺血组比较差异显著(P<0.01)。IPC±I/R组的各项指标明显减少,与I/R组比较差异显著(P<0.01)。结论:IPC减轻大鼠双侧后肢缺血再灌注后肺损伤,其作用机制可能是通过抑制ICAM1介导的中性粒细胞在肺组织内的黏附、浸润而实现的。
- 杨军聂国利胡新华陈哲张强
- 关键词：缺血预适应缺血再灌注骨骼肌肺损伤
- 反义寡脱氧核苷酸抑制survivin基因表达对移植静脉内膜增生的影响被引量：7
- 2006年
- 目的探讨生存素(survivin)的反义寡脱氧核苷酸(ASODNs)抑制survivin基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠60只,建立自体静脉移植模型,然后随机均分为对照组、survivin ASODNs50μg和200μg组、正义寡脱氧核苷酸组(ODNs组)及Lipofectin+pluronic组共5组,施加不同的处理因素,分别在静脉移植术后7和14d取材。组织形态学方法比较移植静脉内膜增生程度,半定量RT-PCR法检测survivin基因mRNA的表达,Western blot检测survivin基因的蛋白产物表达,免疫组化法检测survivin及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,TUNEL检测血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的变化。结果对照组、ODNs组和Lipofectin+plu-ronic组移植术后7d、14d移植静脉内膜增生明显,但3组间差异无统计学意义(P>0.05),局部转染50μg survivinASODNs能明显抑制其内膜增生(P<0.05),200μg组受抑制程度更明显(P<0.05)。对照组survivin mRNA及蛋白产物表达显著增加,而survivin ASODNs组却显著减少(P<0.05),VSMC中PCNA表达也同时减少(P<0.05),而VSMC凋亡明显增加(P<0.05)。结论survivin ASODNs可显著抑制移植静脉内膜增生,其作用可能是通过抑制survivin的基因及蛋白产物表达,从而减轻VSMC增殖,促进其凋亡而实现的。
- 杨军胡新华刘程伟张志深张强
- 关键词：内膜增生生存素寡脱氧核苷酸
- 自体移植静脉中早期生长反应基因1的表达及意义
- 2005年
- 目的:研究自体静脉移植后早期生长反应基因1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用。方法:W istar大鼠80只,建立自体静脉移植模型。应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达,应用W estern蛋白印迹和免疫组化方法检测Egr-1蛋白表达情况,同时进行组织形态学研究。结果:自体静脉移植后,Egr-1mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化。移植1 h,Egr-1 mRNA阳性率为(35±7)%,6 h和24 h时下降,7 d时重新升高,4周达高峰(45±6)%。移植早期2 h即有Egr-1蛋白的表达,阳性率为(30±5)%,并持续至6h,24 h^3 d表达下降,移植4周Egr-1蛋白的阳性表达率达到高峰(40±9)%。结论:Egr-1的激活及表达与自体移植静脉内膜增生关系密切,Egr-1可能成为防治移植静脉内膜增生及狭窄、闭塞的一个新的干预靶点。
- 刘程伟胡新华杨军张雪松王新文辛世杰张强
- 关键词：早期生长反应基因1内膜增生
- 早期生长反应基因-1在自体移植静脉中的表达研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究自体静脉移植后早期生长反应基因-1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用。方法 Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型。术后分为1、2、6、24 h,3、 7、14、28、42 d组,取正常静脉作为对照。应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达,联合应用Western blot蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1的蛋白表达。结果自体静脉移植后, Egr-1 mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化。移植后1 h,Egr-1 mRNA基因表达值为2．21±0．85。 6-24 h时下降,7 d时重新升高,28 d达高峰为3．16±1．14。移植早期2 h:Egr-1蛋白的表达阳性率为 31％±6％,24 h至3 d下降,28 d达高峰为41％±8％。免疫组化显示:移植早期Egr-1蛋白阳性表达主要位于中膜血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞／巨噬细胞;移植后期Egr-1蛋白阳性表达主要位于新生内膜和中膜的VSMCs,同时部分内皮细胞也有表达。结论移植静脉内膜增生与Egr-1的激活及表达关系密切,因而与移植静脉内膜增生及狭窄有关。
- 刘程伟杨军张雪松杨德华张强胡新华
- 关键词：静脉早期生长反应基因-1
- 早期生长反应基因-1及其相关基因在大鼠自体移植静脉中的表达及意义被引量：2
- 2005年
- 目的探讨移植静脉中早期生长反应基因(Egr)-1、血小板源性生长因子(PDGF)-B、转化生长因子(TGF)-β1的表达之间的关系及其在内膜增生(IH)中的作用。方法Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型,将大鼠右颈总静脉端-端吻合于肾下腹主动脉。术后随机分为1、2、6、24h,3、7d,2、4、6周组,分别在相应时点静脉取材。应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1、PDGF-B、TGF-β1mRNA的表达,联合应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1、PDGF-B、TGF-β1蛋白表达情况,同时进行组织形态学研究。结果正常静脉中未检测到Egr-1、PDGF-B、TGF-β1mRNA和蛋白的表达,在移植静脉中Egr-1mRNA和蛋白的表达具有双相变化。应用原位杂交方法检测mRNA阳性细胞百分比Egr-1mRNA在移植4周达高峰(45%±6%);PDGF-B mRNA在移植2周达高峰(48%±6%);TGF-β1mRNA在移植1周达高峰(46%±9%)。应用免疫组织化学方法检测蛋白阳性细胞百分比Egr-1蛋白在移植4周达高峰(40%±9%);PDGF-B蛋白在移植4周达高峰(45%±4%);TGF-β1蛋白在移植2周达高峰(41%±7%)。移植早期Egr-1、PDGF-B、TGF-β1主要在中膜血管平滑肌细胞表达,而移植后期Egr-1、PDGF-B、TGF-β1则主要在新生内膜血管平滑肌细胞表达。结论移植静脉内膜增生与Egr-1、PDGF-B、TGF-β1的表达关系密切;PDGF-B和TGF-β1的激活及表达可能受Egr-1的调节,同时也可能通过反馈机制促进Egr-1的高表达。
- 刘程伟胡新华杨军张强张雪松段志泉
- 关键词：移植物闭塞血管血管内膜自体移植静脉
- 缺氧诱导因子-1α及相关基因在破裂性腹主动脉瘤中的表达及意义
- 2006年
- 目的研究缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)信号转导通路在破裂性腹主动脉瘤(ruptured abdominal aorta aneurysm,RAAA)中的表达,探讨AAA破裂的分子基础。方法选取RAAA标本18例,以20例AAA标本作对照。采用Northern杂交、Western蛋白印迹及免疫组织化学方法检测HIF-1α的mRNA及蛋白产物表达,Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,免疫组织化学抗CD34染色法检测微血管密度(microvessel density, MVD)。结果 RAAA组织中HIF-1α mRNA表达明显高于AAA组(P<0．01),免疫组化染色表明 HIF-1α阳性细胞百分率为(40．9±10．8)％,与AAA(17．6±5．2)％比较差异有统计学意义(P< 0．01);VEGF表达亦明显增强(P<0．01),与HIF-1α表达呈显著正相关(r值为0．725,P<0．01)。 HIF-1α阳性表达主要分布在AAA中层平滑肌细胞及外膜。RAAA中微血管密度明显增多(P< 0．01)。结论 HIF-1α及其相关基因过表达在RAAA的分子机制中可能发挥重要作用。
- 杨军胡新华刘程伟张志深杨德华张强
- 关键词：基因缺氧诱导因子-1Α
- PDGF-B基因转染骨髓间充质干细胞的研究
- 2006年
- 目的:探讨血小板源性生长因子B(PDGF-B)基因转染修饰大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的可行性。方法:应用FAM标记重组真核表达载体系统(pcDNA3-PDGF-B),以脂质体法转染原代MSC,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果:MSC的基因转染成功,持续表达时间超过了8周,没有发现明显的细胞毒作用及对细胞活力的显著影响。结论:采用真核转染技术可以介导外源基因转染MSC,MSC是一种理想的基因载体细胞,可用于PDGF-B的基因治疗。
- 李铁民程颖胡新华刘程伟赵宁张佳林刘永锋
- 关键词：血小板源性生长因子B转染脂质体
- 反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响
- 2006年
- 目的:观察以纳米粒子为载体的反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因,制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率、体外释放情况及粒子大小。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3d、7d、14d、28d取材,常规HE、Verhoeff染色,RT-PCR、Westernblot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生厚度7d、14d、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体,反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。
- 胡新华张强杨军刘程伟张志深杨德华
