国家自然科学基金(30800847)
- 作品数：21 被引量：107H指数：7
- 相关作者：吕爱军胡秀彩王艺程超朱爱华更多>>
- 相关机构：徐州师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“青蓝工程”基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 牙鲆钙调素基因在原核和真核细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 设计特异引物,以SMARTcDNA为模板,应用PCR方法扩增牙鲆钙调素基因(Paralichthys olivaceus calmodulin,PoCaM)。计算机辅助分析表明,PoCaM基因编码149个氨基酸的推定蛋白,其分子量为17kD,等电点为3.93,含有4个螺旋-环-螺旋样结构,与其它鱼类CaM氨基酸一致性为97.3%-100%。构建原核表达重组质粒pET32a/PoCaM,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE蛋白电泳,结果显示PoCaM在大肠杆菌中进行了特异性融合表达,融合蛋白分子量约为34kD,与预期分子量大小一致。同时,以绿色荧光蛋白(GFP)为表达标签,构建真核表达重组质粒pEGFP-N3/PoCaM,经Lipofectamine 2000介导转染鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC),荧光显微镜观察显示,PoCaM在EPC细胞中进行瞬时表达,主要分布于细胞核及胞浆中。
- 吕爱军胡秀彩
- 关键词：牙鲆原核表达真核表达
- 四种药物对斑马鱼急性毒性试验被引量：16
- 2012年
- 为探究消毒液和农药对斑马鱼的毒性与安全评价，首次选用高锰酸钾、甲醛、精碘和卡螨死四种试剂进行急性毒性试验，以24～96h半致死浓度（LC50）判断斑马鱼对四种药物的敏感性。结果表明，24、48、72、96h的LC50，高锰酸钾分别：勾1．15、1．12、1．12、1．11mg／L；甲醛为48、45、45、40mg／L；精碘分别为7．8×10^-3、5．8×10^-3、5．6×10^-3、5．3×10^-3mg／L；卡螨死分别为1．95×10^-7、1．23×10^-7、0．65×10^-7、0．62×10^-7mg／L。高锰酸钾、甲醛、精碘和卡螨死的安全质量浓度（SC）分别为1．07、11．8、0．96×10^-3和1．48×10^-6mg/L。参照我国化学物质对鱼类毒性分级标准，判定高锰酸钾对斑马鱼急性毒性为II级，甲醛为Ⅲ级，精碘和卡螨死对斑马鱼急性毒性为I级。
- 胡秀彩边延峰周捷吕爱军
- 关键词：斑马鱼急性毒性半致死浓度安全质量浓度
- 弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定与PCR-SSCP分析被引量：15
- 2011年
- 利用营养琼脂、MaC培养基从草鱼肠道中分离到3株细菌,暂时编号为TC-1、TC-2和TC-3,通过形态学观察、生理生化特征、药敏试验、动物试验、构建系统发育进化树及PCR-SSCP分析等系统鉴定,结果表明3株菌株均为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii),其中TC-2菌株对小鼠、斑马鱼有致病性;3株杆菌均对头孢噻肟、头孢曲松、洛美沙星、诺氟沙星等多种药物敏感;系统发育分析表明,3株弗氏柠檬酸杆菌16S rDNA序列与DSM30039模式株同源性分别为99.59%、99.47%和99.53%,且位于系统发育树的同一分支;进一步采用V3区PCR-SSCP分析结果显示弗氏柠檬酸杆菌SSCP图谱中菌株间带型存在差异。
- 胡秀彩王艺吕爱军
- 关键词：RDNAPCR-SSCP
- 斑马鱼肠道细菌的分离与生理生化特性被引量：9
- 2010年
- 为研究鱼类肠道细菌的分布情况,从模式生物斑马鱼肠道中分离纯化出4株革兰氏阳性菌,暂编号为ZF-1、ZF-2、ZF-3、ZF-4,并进行了菌体形态学观察、生理生化特性等方面的研究。结果表明,分离菌ZF-1株为球菌、ZF-2、、ZF-3、ZF-4株为杆菌、ZF-3株产芽孢;ZF-1和ZF-2株在普通固体培养基上形成圆形、表面湿润、边缘整齐的小菌落,而ZF-3和ZF-4株形成表面干燥、皱褶、边缘不整齐的大菌落;4株菌株均属发酵型代谢、无动力,葡萄糖酸盐、枸橼酸盐、山梨醇、硫化氢、吲哚试验为阴性,β-半乳糖苷酶、苯丙氨酸脱氨酶、七叶苷水解试验为阳性;其中ZF-1株能利用葡萄糖产气、棉子糖、木糖,ZF-2、ZF-4菌株则不能;ZF-3株能发酵侧金盏花醇、不能还原硝酸盐和液化明胶,其他菌株则特性相反。以上结果为进一步鉴定斑马鱼肠道中细菌奠定了基础。
- 吕爱军杨正行刘欢胡秀彩张艳华程超
- 关键词：斑马鱼肠道细菌生理生化特性
- 鲤鱼肠道细菌的分离及其生理生化特性研究被引量：7
- 2010年
- 从鲤鱼肠道中分离纯化细菌,获得CC-1、CC-2两株菌株,并进行生理生化特性、药敏试验研究。结果表明,CC-1和CC-2菌株均产生苯丙氨酸脱氢酶,分解葡萄糖产气,不产生硫化氢;CC-1菌株产生赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶,CC-2菌株则不产生;CC-1、CC-2菌株对头孢菌素类、氨基甙类、大环内酯类、磺胺类等抗生素敏感,而对氨苄青霉素、利福平、萘啶酸、头孢噻吩、先锋霉素等敏感性不同。该研究可为治疗鱼类疾病以及合理开发利用肠道微生物资源提供参考。
- 胡秀彩李会吕爱军
- 关键词：生理生化特性药敏试验
- 弗氏柠檬酸杆菌感染诱导斑马鱼皮肤免疫相关基因的差异表达被引量：16
- 2012年
- 从草鱼肠道中分离到1株细菌,通过形态学观察、生理生化特征和16S rDNA序列分析等鉴定为弗氏柠檬酸杆菌,动物试验结果表明,该菌对斑马鱼有致病性;从感染诱导的斑马鱼皮肤组织中提取总RNA,经Biotin荧光标记与拥有15 617个cDNA片段的斑马鱼基因芯片(affymetrix)杂交筛选分析,获得斑马鱼皮肤免疫相关差异表达基因88个,其中有74个上调表达基因和14个下调表达基因;进一步根据基因功能聚类(GO)分析,初步将88个差异表达基因分为8个生物学功能,其中主要参与补体激活、急性期反应、应激防御反应、细胞凋亡、抗原加工提呈、细胞迁移粘附、凝血因子和血小板激活等免疫应答过程;同时进行信号通路(pathway)分析,结果表明MAPK(hsp70、daxx、nfkbiab)、JAK/STAT(ifn1)和TGF-β(thbs1)等信号通路参与斑马鱼皮肤抗弗氏柠檬酸杆菌感染免疫应答。采用基因芯片方法筛选与鱼类皮肤免疫相关的功能基因,为将来以斑马鱼为模型研究鱼类皮肤局部免疫应答的分子机制提供科学依据。
- 吕爱军胡秀彩朱静榕薛军王艺程超
- 关键词：斑马鱼皮肤免疫相关基因基因芯片
- IL-1β在鱼类皮肤免疫应答中的作用机制被引量：4
- 2012年
- 白细胞介素1（interleukin 1,IL-1）是一种重要的促炎性细胞因子,是体内调节免疫和炎症反应的中心介质,在哺乳动物中已发现11种IL-1家族成员,包括IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-18、IL-1F5和IL-33等[1],目前在鱼类中只发现了IL-1β和IL-18。研究表明。
- 王艺胡秀彩吕爱军
- 关键词：IL-1Β皮肤免疫应答鱼类
- 斑马鱼肠道中一株酵母菌菌株的鉴定与系统发育分析被引量：7
- 2011年
- 从斑马鱼肠道中分离到一株酵母菌,编号为ZF-5,进行了形态学观察、生理特征测定和26S rDNA D1/D2序列分析,并构建系统发育树。结果表明ZF-5菌株细胞呈卵圆形或杆状,为芽殖,有假菌丝;除乳糖外,能够发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等多种碳源;26S rDNA D1/D2区序列分析表明与季也蒙毕赤酵母Pichia guilliermondii的序列相似性最高,构建的系统发育进化树显示菌株ZF-5与Pichia guilliermondii模式菌株CBS2030(=NRRL Y-2075)亲缘关系最近,序列相似性为99.8%,因此鉴定ZF-5菌株为季也蒙毕赤酵母。
- 吕爱军顾丹胡秀彩戚冰洁梁爽
- 关键词：斑马鱼酵母菌RDNA
- 重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响。方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析分离纯化。在不添加佐剂的情况下以纯化的HSP65通过3次鼻黏膜免疫非肥胖型1型糖尿病模型动物(NOD)小鼠,每月采集小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测血清中抗体的产生,利用自动生化分析仪检测血糖浓度。结果:通过鼻黏膜免疫途径可成功诱导小鼠产生特异的抗HSP65抗体,组织病理学分析也显示HSP65通过鼻黏膜免疫能降低NOD小鼠胰腺病变的产生。结论:HSP65通过鼻黏膜免疫能预防NOD小鼠糖尿病的发生,证实了HSP65经鼻黏膜免疫能降低和自身免疫性糖尿病有关的炎症过程的严重性,对1型糖尿病的治疗提供了一个新的途径。
- 朱爱华金亮刘景晶刘美艳吕爱军郑元林
- 关键词：热休克蛋白鼻内胰腺炎
- 鲫鱼鳃中迟钝爱德华氏菌的分离与鉴定被引量：7
- 2013年
- 以市售鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,从鳃中分离获得一株细菌,编号为Et-1,通过细菌形态学观察、理化特征鉴定、16S rDNA克隆测序及系统发育进化树构建等方法进行系统鉴定,结果表明Et-1菌株为革兰阴性杆菌,进一步PCR扩增Et-1菌株的16S rDNA序列为1 508 bp;系统进化树分析表明,Et-1菌株与迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)亲缘关系最近,自然聚为一支,序列同源性达98.7%～100%,最终确定Et-1为迟钝爱德华氏菌。
- 王艺李槿年兰云胡秀彩沈晓静李雪吕爱军
- 关键词：鲫鱼迟钝爱德华氏菌DNA测序
