广东省自然科学基金(S2011020002769)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：林忠宁林育纯陈慧峰廖昆夏斌更多>>
- 相关机构：中山大学厦门大学广东省职业病防治院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
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- DEHP对人肝L02细胞毒性作用及其核因子-κB机制研究
- 1.引言邻苯二甲酸酯类(PAEs)化合物是一类包含有多种成分的持久性环境污染物;其中邻苯二甲酸二-(2-乙基)乙酯(DEHP)是使用最广泛的PAEs增塑剂。研究表明DEHP可导致多种有害效应,包括肝、肾毒性,睾丸毒性,但...
- 胡耀明陈宇曦李晓杰陈慧峰麦剑荣夏斌张玉静廖昆林育纯林忠宁
- 核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究
- 2013年
- 目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P<0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G>A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P<0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P<0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。
- 麦剑荣林育纯陈慧峰陈宇曦夏斌廖昆张玉静高艳芳林忠宁
- 关键词：蛋白磷酸酶2A
- 小白菊内酯对不同环氧合酶-2表达的鼻咽癌细胞株中干性侧群细胞转归的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨倍半萜烯内酯(sesquiterpene Iactones,SLs)类化合物对不同环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达水平的人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞中癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)转归的影响。方法:分别采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测人鼻咽癌高分化CNE1L和低分化CNE2L细胞株中COX-2 mRNA和蛋白本底表达水平。给予不同剂量SLs活性成分小白菊内酯(parthenolide,PN)处理2种细胞株后,再分别采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性;qRT-PCR检测细胞中干性相关基因COX-2、ABCG2、BMI1、OCT4 mRNA水平;流式细胞术分析干性侧群(side population,SP)细胞的相对含量;平板克隆集落形成实验检测干性细胞的自我更新和分化增殖能力。结果:CNE1L和CNE2L细胞中COX-2 mRNA和蛋白本底水平显著不同,在CNE1L细胞中明显高于CNE2L细胞(P<0.05);与对照组比较,PN处理后,细胞增殖抑制率随PN浓度(10～100μmol/L)增加呈剂量依赖性增高(P<0.05),细胞中COX-2 mRNA在CNE1L中升高、在CNE2L中降低,干性相关基因ABCG2、BMI1 mRNA在CNE1L细胞中升高、而OCT4 mRNA在两株细胞中均降低(P均<0.05);SP细胞抑制率亦随PN浓度(2.5～40μmol/L作用24 h)增加呈剂量依赖性增高(P<0.05);而细胞的集落形成能力随PN浓度(0.25～1.5μmol/L作用72 h)增加显著降低(P<0.05);上述结果在CNE1L和CNE2L细胞株间差异均有统计学意义(P<0.05),在CNE1L细胞中变化作用更强。结论:PN对不同NPC细胞株中的干性细胞功能具有抑制作用且存在明显差别,可能与不同细胞间COX-2表达的差异性有关。
- 李晓杰林丽娜麦剑荣陈慧峰胡耀明廖昆黄奕俊林忠宁林育纯
- 关键词：环氧合酶-2鼻咽肿瘤小白菊内酯
- PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的人肝L02细胞DNA损伤被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制。方法:构建PP2A-B56γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型;两种细胞分别给予CdCl_2(Cd)、TNFα单独处理及联合处理后,实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测不同处理组PPP2R5C和金属硫蛋白1B(MTIB)mRNA转录水平;彗星试验(SCGE)检测细胞DNA断裂损伤情况;并按照3×2的析因设计分析不同处理之间是否存在联合作用及作用类型。结果:与L02-pBabe细胞相比较,L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C、外源性PPP2R5C-FLAG mRNA显著高表达(P<0.05),细胞株构建成功。3种因素单独处理时,与阴性对照组相比,Cd降低PPP2R5C、升高MT1B mRNA表达,PPP2R5C基因高表达诱导的效应与Cd处理相反,TNFα降低PPP2R5C和MT1B mRNA表达(均P<0.05);析因分析表明,在PPP2R5C和PPP2R5C-FLAG mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd、与TNFα之间均存在协同性交互效应(P<0.05);在MT1B mRNA检测中,PPP2R5C高表达与cd和TNFα之间均表现为拮抗作用,PPP2R5C高表达与TNFα为协同抑制作用(均P<0.05)。SCGE检测表明,与阴性对照相比.Cd诱导彗星尾长、尾矩、尾部DNA含量和拖尾细胞阳性率显著增高(P<0.05),TNFα、PPP2R5C高表达单独作用均不引起DNA损伤(P>0.05),但两两联合作用的析因分析结果表明,TNFα预处理与Cd处理对DNA损伤具有协同作用,PPP2R5C高表达与Cd处理存在拮抗作用,交互作用均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Cd抑制肝细胞PPP2A-B56γ编码基因的转录并显著诱导DNA损伤,PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的DNA损伤,而炎症因子可增强镉对细胞DNA的损伤。
- 林丽娜林育纯陈慧峰罗洁李晓杰胡耀明李文张树江陈雯林忠宁
- 关键词：镉肝细胞毒性基因转录调控
- FB1经由PXR介导肝细胞中PP2A-B56γ抑制和诱导细胞毒性
- 目的:黄曲霉毒素B1（AFB1）作为常见于食物中的环境污染物,其靶向肝脏发挥毒性作用:除了慢性致癌作用,AFB1急性暴露引起的肝细胞毒性损伤受到关注。本研究拟探讨AFB1诱导肝细胞毒性作用中孕烷X受体（PXR）介导的蛋白...
- 夏斌廖昆张玉静庄群瑛邱杨骆冰何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：肝细胞毒性
- 文献传递
- 孕烷X受体诱导活化参与PP2A不同亚基基因转录调控
- 目的 探讨孕烷X受体(PXR)作为转录因子对PP2A不同亚基基因的转录调控作用及其对外源化学物诱导肝细胞毒性转归的影响.方法 采用人肝L02细胞转染NR1/2基因构建PXR稳定高表达的L02-PXR细胞,以L02-pB空...
- 高艳芳廖昆张玉静夏斌殷花何承勇林忠宁林育纯
- 关键词：转录调控
- DEHP对人肝L02细胞毒性作用及其核因子-κB机制研究
- ＜正＞1.引言邻苯二甲酸酯类（PAEs）化合物是一类包含有多种成分的持久性环境污染物;其中邻苯二甲酸二-（2-乙基）乙酯（DEHP）是使用最广泛的PAEs增塑剂。研究表明DEHP可导致多种有害效应,包括肝、肾毒性,睾丸毒...
- 胡耀明陈宇曦李晓杰陈慧峰麦剑荣夏斌张玉静廖昆林育纯林忠宁
- 镉对肝细胞中PPP2R1A启动子区甲基化及其转录水平的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：分析镉染毒处理肝细胞中蛋白磷酸酶2A（ PP2A）-Aα支架亚基基因PPP2R1A启动子区甲基化状态及其转录水平的改变。方法采用永生化人正常肝L02细胞及肝细胞癌HepG2细胞为研究对象，对其进行以下分组和处理：①低、中和高剂量氯化镉（ CdCl2）处理组，分别予浓度为20.0、40.0和60.0 μmol/L CdCl2处理24 h；②低、中和高剂量5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-dC）处理组，分别予浓度为2.5、5.0和10.0 μmol/L 5-Aza-dC处理48 h；③5-Aza-dC组予浓度为5.0 μmol/L的5-Aza-dC处理48 h，CdCl2组予浓度为40.0 μmol/L 的 CdCl2处理24 h，（5-Aza-dC＋CdCl2）组予浓度为5.0 μmol/L的5-Aza-dC预处理48 h后再予浓度为40.0 μmol/L CdCl2处理24 h；④ CdCl2处理组予浓度为40.0 μmol/L CdCl2处理24 h。上述4种分组均设对照组，予等体积生理氯化钠溶液或二甲基亚砜处理。经①~③处理后的细胞采用实时荧光定量聚合酶链反应（ PCR）检测PPP2R1A、金属硫蛋白1B（MT1B）和DNA甲基转移酶3A（DNMT3A）的mRNA转录水平（以对照组水平为1.00）。经④处理后的细胞采用亚硫酸氢盐修饰后PCR扩增PPP2R1A启动子区克隆测序检测CpG岛的甲基化情况。结果 L02细胞和HepG2细胞中，不同剂量CdCl2处理组PPP2R1A mRNA转录水平随镉处理剂量增高呈剂量依赖性下降（ P〈0.05）；不同剂量5-Aza-dC处理组PPP2R1A mRNA转录水平随5-Aza-dC处理剂量增加呈剂量依赖性升高（P〈0.05）。2种细胞中，分别与对照组和5-Aza-dC处理组比较，CdCl2处理组和（5-Aza-dC＋CdCl2）处理组PPP2R1A mRNA转录水平均下降（P〈0.05），MT1B和DNMT3A的mRNA转录水平均升高（P〈0.05）；与CdCl2处理组比较，（5-Aza-dC＋CdCl2）处理组PPP2R1A mRNA转录水平均升高（P〈0.05），MT1B和DNMT3A的mRNA转录水平均下降（P〈0.05）。甲基化测序结果显示，L02细胞 CdCl2处理组 PPP2R1A 启动子区甲基化率高于对照组（6.35％ vs 2.31�
- 张玉静陈慧峰廖昆夏斌殷花何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：镉L02细胞HEPG2细胞启动子区甲基化
- 孕烷X受体参与DEHP介导PPP2R5C基因5'-侧翼区多态性功能的调控
- 目的:蛋白磷酸酶2A(PP2A)通过对毒理学信号通路中关键调控蛋白的去磷酸化作用,参与外源化学物诱导细胞毒性的过程。邻苯二甲酸酯类(DEHP)暴露诱导的毒性危害受到关注;我们前期发现DEHP可诱导核受体(NRs)超家族成...
- 林育纯陈慧峰高艳芳张玉静廖昆何承勇林忠宁
- 关键词：基因启动子区多态性
- 镉对蛋白磷酸酶2A-B55δ高表达L02细胞周期和核因子-κB活化影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨镉对蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B55δ亚基高表达和不同多态性单体型调控高表达的肝细胞周期的影响及其与核因子-kappaB(NF-κB)活化的关系。方法选择永生化人正常肝L02细胞,采用B55δ编码基因PPP2R2D序列构建高表达的L02-2R2Dc细胞、与不同启动子区单体型调控高表达的L02-2R2D-PC1和L02-2R2D-PC3细胞株,以导入空载体的L02-pBabe为对照细胞。各细胞给予5～80μmol/L的氯化镉(CdCl2)处理建立细胞模型。噻唑蓝法检测各细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测细胞核内NF-κBp65蛋白的活化情况;荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA水平的改变。结果与对照组比较,CdCl2组各细胞的增殖抑制率随镉水平增高呈剂量依赖性增高(Pearson’s r均P<0.05);与CdCl2组比较,冈田酸+CdCl2组各细胞的增殖抑制率明显增加(P<0.05);与对照组比较,CdCl2组细胞G1期比例下降、S期比例增加(P<0.05);胞核p65蛋白水平增高,COX-2 mRNA水平上调;这种效应在不同细胞株之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论镉可引起PP2A-B55δ高表达的人肝L02细胞增殖功能抑制并导致细胞周期S期阻滞,这种效应与NF-κB信号通路的活化有关。
- 胡耀明陈慧峰罗洁李晓杰陈宇曦林丽娜麦剑荣陈雯林忠宁林育纯
- 关键词：蛋白磷酸酶2A细胞周期核因子-ΚBL02细胞
