安徽高等学校省级自然科学研究项目(KJ2009A163)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：刘会春张军贾兴胜周少波李三红更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：安徽高等学校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA干扰EP—CAM基因表达对胆囊癌细胞增殖及凋亡的影响
- 2010年
- 目的：利用RNA干扰技术抑制人胆囊癌GBC-SD细胞中上皮细胞黏附分子（EP-CAM）基因的表达,探讨抑制EP-CAM基因后对GBC-SD细胞增殖、凋亡的影响.方法：构建靶向EP-CAM基因的miRNA重组质粒,转染GBC-SD细胞,用RT-PCR和Western Blot分别检测EP-CAM基因的mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果：靶向EP-CAM的miRNA重组质粒pcDNA^TM6.2-GW/EmGFPmiR-EPCAM-1构建成功,重组质粒能显著抑制靶基因EP-CAM的mRNA及蛋白表达.与对照组比较,干扰后的细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）,但细胞增殖活性受到明显抑制（P＜0.05）.结论：靶向EP-CAM基因的miRNA重组质粒能有效抑制EP-CAM基因的表达,抑制GBC-SD细胞的增殖.
- 刘会春贾兴胜张军
- 关键词：胆囊癌上皮细胞黏附分子RNA干扰细胞增殖
- miRNA干扰乙酰肝素酶基因对胆囊癌细胞侵袭、迁移的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察miRNA干扰沉默乙酰肝素酶（HPA）基因表达对人胆囊癌GBC—SD细胞侵袭和迁移的影响。方法根据人HPA基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA，同时合成1对阴性对照质粒表达载体。采用阳离子脂质体转染法将以上质粒转染人人胆囊癌GBC—SD细胞，采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测转染前后HPAmRNA表达的变化，选出对HPA沉默效果最佳的质粒，使用抗生素Blasticidin2ms／L加压筛选阳性克隆并扩增培养传代，获得稳定表达细胞株，供下一步实验。通过划痕损伤实验和Transwell小室细胞侵袭、迁移实验检测干扰沉默HPA表达后对人胆囊癌GBC．SD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果质粒pcDNA6．2-GW／EmGFP—miR-HPA-2沉默人胆囊癌GBC—SD细胞HPAmRNA表达的效果最好。pcDNA6．2-GW／EmGFP-miR-HPA-2组中穿过Transwell小室基质的胆囊癌GBC—SD细胞数明显低于阴性对照组（P〈0．05）和空白对照组。胆囊癌GBC—SD细胞的迁移距离在0、12、24hpcDNA6．2-GW／EmGFP—miR—HPA-2组明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论miRNA干扰沉默人胆囊癌GBC—SD细胞中HPAmRNA表达，从而抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的侵袭和迁移能力。
- 李三红刘会春周少波
- 关键词：胆囊癌基因沉默乙酰肝素酶肿瘤侵袭
- 靶向上皮细胞黏附分子的微小RNA抑制胆囊癌细胞增殖的研究被引量：2
- 2011年
- 目的观察RNA干扰（RNAi）技术抑制上皮细胞黏附分子（EP—CAM）的表达后对胆囊癌GBC．SD细胞增殖、凋亡的影响。方法针对EP—CAM基因的不同位点构建4个微小RNA（miRNA）重组质粒，转染GBC．SD细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测转染48h后EP—CAMmRNA及蛋白的表达水平，选用干扰效率最强的质粒再转染GBC—SD细胞，噻唑蓝（MTr）比色法检测细胞增殖的变化，流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果4个miRNA重组质粒构建成功；RT—PCR显示干扰质粒-1、-2、-3、4组EP—CAMmRNA的表达量分别为0．26±0．02、0．79±0．03、0．37．4-0．02、0．45±0．04均低于空白对照组0．94±0．03及阴性对照组0．92±0．03（P〈0．01）；Westernblot显示，干扰质粒-1、-2、-3、4组EP—CAM蛋白的表达量分别为0．22±0．03、0．71±0．03、0．32±0．02、0．41±0．04均低于空白对照组0．85±0．05及阴性对照组0．84-4-0．04（P〈0．01）；选用效果最佳的干扰质粒-1转染GBC-SD细胞后，MTr法显示干扰组细胞增殖活性受到抑制，转染48h后最显著，抑制率为39％，流式细胞仪检测显示3组细胞的凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论针对EP—CAM的miRNA重组质粒能特异地抑制EP—CAM基因表达，抑制GBC—SD细胞的增殖。
- 贾兴胜刘会春张军
- 关键词：胆囊癌上皮细胞黏附分子RNAI
- RNA干扰对胆囊癌细胞上皮细胞黏附因子表达的影响
- 2010年
- 目的:观察RNA干扰(RNAi)对胆囊癌GBC-SD细胞株中上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EP-CAM)表达的抑制作用。方法:针对EP-CAM基因的不同位点构建4个miRNA重组质粒。经DNA测序后,用LipofectamineTM2000介导转染人胆囊癌GBC-SD细胞株,48 h后用RT-PCR和Western blot检测EP-CAM的mRNA和蛋白的表达变化情况。结果:经测序分析证实,靶向EP-CAM的4个miRNA重组质粒均构建成功。RT-PCR及Western Blot技术显示,4个重组质粒均不同程度地抑制靶基因EP-CAM的表达。结论:针对人EP-CAM基因的miRNA表达载体能有效地下调GBC-SD细胞中EP-CAMmRNA及蛋白的表达。
- 贾兴胜刘会春张军
- 关键词：胆囊肿瘤上皮细胞黏附分子RNA干扰
