国家科技攻关计划(2003BA712A03-09)
- 作品数：3 被引量：33H指数：2
- 相关作者：王升启陈苏红张敏丽杨宁敏张政更多>>
- 相关机构：军事医学科学院浙江省疾病预防控制中心内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 复合探针实时荧光PCR检测大肠杆菌O157:H7被引量：18
- 2005年
- 目的建立一种快速、准确、特异的肠出血性大肠杆菌O157:H7的定量检测方法。方法以rfbE基因作为待检靶基因,根据复合探针荧光定量分析原理设计检测引物和探针,建立检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量PCR方法。并对本方法检测的特异性、灵敏度、重复性等进行评价。结果所有O157:H7的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达10 cfu.mL-1,定量检测的批间和批内差异均小于5%。在模拟污染牛奶中,可检出1×101cfu.μL-1的细菌。结论本文建立的复合探针实时荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地对大肠杆菌O157:H7进行定量分析,为大肠杆菌O157:H7的检测提供了新的方法。
- 陈苏红张敏丽张政朱水荣杨宁敏姚军王升启
- 关键词：大肠杆菌O157:H7实时荧光PCR
- 基因芯片技术鉴定出血性大肠杆菌O157∶H7和霍乱弧菌O139被引量：14
- 2006年
- 目的:建立一种同时快速检测肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7和霍乱弧菌O139的基因芯片,并验证该芯片的特异性和敏感性。方法:选择EHEC O157∶H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(u idA);霍乱弧菌O139的肠毒素A亚单位(ctxA)、毒力协调菌毛A亚单位(tcpA)、糖基转移酶(glycosotransferaseLPSgt)基因序列分别设计引物和探针,反向引物用荧光素Cy3标记,探针在3′端氨基修饰。在优化的PCR和杂交反应条件下,分别进行三重PCR扩增,产物混合后与芯片进行杂交,产生特异性荧光信号,进一步筛选探针。随后将筛选出的探针制备芯片用于检测临床样本。结果:PCR产物在相应探针处均产生特异性杂交信号,临床样本检测结果表明,此芯片比常规细菌学检测方法灵敏。结论:所研制的同时定性检测EHEC O157∶H7和霍乱弧菌O139的基因芯片是特异、灵敏而且快速的,为这两种肠道致病菌感染的快速诊断提供了新的方法。
- 徐晓静文思远陈苏红马学恩王华王升启
- 关键词：基因芯片多重PCR大肠杆菌O157:H7霍乱弧菌O139
- 霍乱弧菌O139实时荧光PCR检测方法的建立及应用被引量：2
- 2005年
- 目的:建立检测霍乱弧菌O139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌O139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测O139特异基因———编码糖基转移酶的基因。结果:本方法特异性好,检测非O139肠道菌均无响应;灵敏度高,可检测低至10 CFU的细菌;重复性较好,批间批内变异系数均小于3%。对采自浙江省O139霍乱弧菌感染患者的335份标本进行检测,共有133份为阳性,而采用常规细菌培养法,仅检测出90份阳性。结论:本方法的建立为霍乱的诊断提供了又一有效手段。
- 陈苏红张政张敏丽杨宁敏姚军朱水荣程苏云丁雨王升启
- 关键词：实时荧光PCR霍乱弧菌O139
