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边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法的建立被引量：1: 2008年; 将边缘无浆体MSP5基因在大肠杆菌DH5α中表达,获得45 ku的融合蛋白。Western-blot检测证实该表达蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原,建立了边缘无浆体MSP5的间接ELISA检测方法。该方法对边缘无浆体阴性、阳性血清(各100份)的阳性检出率和阴性符合率分别为100%和98%,与双芽巴贝虫、大巴贝虫、环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫、衣原体、血吸虫和羊肝片吸虫的阳性血清无交叉反应,与羊无浆体阳性血清有交叉反应。结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性。; 马米玲殷宏关贵全李有全高金亮刘志杰刘爱红刘军龙任巧云罗建勋; 关键词：边缘无浆体间接ELISA

硬蜱生防真菌制剂的研究及应用被引量：3: 2012年; 昆虫病原真菌作为一种很有潜力的生物控制因子,已在农业害虫生物防治领域得到广泛的应用,而在兽医外寄生虫病防治的研究才刚刚起步。针对目前用于蜱化学药物防治的药效持久期短的技术难点,建立和改进蜱虫的防治体系,降低环境污染,减少或禁用化学农药势在必行,开发高效、稳定的生物农药已成为当务之急。作者等结合蜱生物防治的初步研究成果,特别是针对栖息土壤环境中的昆虫病原微生物对蜱的致病力筛选及其生防制剂进行探讨,以促进这一研究领域的可持续发展,这对于保护环境、维持生态平衡、发展无污染的绿色畜牧业产品以及对畜牧业的可持续发展具有极为重要的意义。; 孙明王晓燕罗建勋; 关键词：昆虫病原真菌生防制剂

吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选被引量：5: 2009年; 【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×106PFU,扩增文库的滴度为8.2×108PFU·ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。; 李有全罗建勋高金亮关贵全马米玲刘志杰刘军龙刘爱红任巧云党志胜鲁炳义刘光远白启殷宏; 关键词：CDNA表达文库免疫筛选

甘肃省景泰县羊无浆体病的诊断被引量：11: 2012年; 为建立羊无浆体病简便快捷的病原学检测方法,论文以马米玲等已建立的边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法对甘肃省景泰县多地采集的219份田间样品进行羊无浆体ELISA检测,以PCR检测方法进行病原学的检测和验证。同时为进一步验证MSP5基因在边缘无浆体和羊无浆体之间的保守性,Western blot检测证实边缘无浆体重组蛋白在45ku处与羊无浆体阳性血清反应,与羊其他病原阳性血清均不反应,表明该重组蛋白适合作为羊无浆体病的诊断抗原。在被检的219份样品中,ELISA方法检测阳性率为34.7%(76/219),PCR方法阳性率为30.6%(67/219),证实该地区存在羊无浆体病,与以往调查结果相比,阳性率有所下降。利用边缘无浆体MSP5重组抗原建立的EILSA方法具有良好的特异性和敏感性,可以检测羊无浆体病,为羊无浆体病的血清学诊断及流行病学调查提供了手段。; 孙明刘志杰马米玲关贵全罗建勋殷宏; 关键词：ELISA PCR

边缘无浆体病诊断方法的研究进展被引量：2: 2008年; 综述了边缘无浆体病的常规病原学诊断方法、血清学诊断方法和分子生物学检测方法的国内外研究现状和发展水平,并探讨了核酸探针、PCR和反向线状印迹杂交技术在边缘无浆体病诊断中的应用及研究进展。; 马米玲罗建勋殷宏刘志杰; 关键词：无浆体病

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甘肃省科技重大专项计划(0801NKDA033)