广东省海洋渔业科技推广专项项目(A200901H06)
- 作品数：3 被引量：31H指数：3
- 相关作者：胡忠伦镜盛夏常艳黄通旺郭川更多>>
- 相关机构：汕头大学汕头市疾病预防控制中心中国科学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省海洋渔业科技推广专项项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 副溶血弧菌EMA-PCR检测技术的建立被引量：21
- 2011年
- PCR技术被广泛应用于副溶血弧菌的检测中,但传统的PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,往往使检测结果出现较高的假阳性。因此,将叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bro-mide,EMA)与PCR技术结合,建立一种快速、准确的副溶血弧菌检测方法。以dnaJ基因为检测副溶血弧菌的靶基因,分别用副溶血弧菌的纯培养细胞及其基因组DNA作模板进行PCR检测,灵敏度分别为2.5×104 CFU/mL和6×102 fg/μL。在检测样品前处理过程中加入EMA,当EMA的浓度小于5 mg/L时,EMA对活菌靶基因的扩增没有明显的抑制;而终浓度为2 mg/L的EMA,能有效抑制1×108 CFU/mL副溶血弧菌死菌的扩增。活菌和死菌混合体系的PCR结果表明,EMA-PCR能有效降低副溶血弧菌检测过程中的假阳性。
- 伦镜盛夏常艳罗鹏梁嘉明黄通旺胡忠
- 关键词：副溶血弧菌
- 副溶血性弧菌的免疫捕获PCR检测被引量：3
- 2010年
- 目的:将免疫捕获PCR法应用于副溶血性弧菌检测。方法:将脱毒后的副溶血性弧菌作为抗原免疫家兔,得到抗血清包被PCR管,对待检的副溶血弧菌进行免疫捕获,利用捕获到的菌体作为模板进行PCR检测。结果:PCR体系对副溶血性弧菌的tlh基因扩增具有特异性;抗体对副溶血弧菌起到一定程度的富集作用,包被抗血清后使PCR扩增出来的阳性结果更为明显,而抗血清本身没有扩增出DNA条带。结论:该检测方法能够对副溶血性弧菌进行特异性的检测,同时包被抗体的捕获对提高检测灵敏度起到一定的作用。
- 郭川林洁敏伦镜盛胡忠林耀盛方小衡
- 关键词：副溶血性弧菌抗血清
- 弧菌外膜蛋白OmpK免疫交叉反应性的分析被引量：7
- 2013年
- 本研究旨在研究弧菌外膜蛋白（oute rmembrane protein，OMP）OmpK免疫交叉反应的特征，探讨OmpK免疫交叉反应性的分子机制．利用克隆得到5株弧菌的ompK基因，通过比对10种（22株）弧菌的OmpK基因序列发现，ompK基因在弧菌中高度保守，其核苷酸序列的相似性达77％～93％．对副溶血弧菌（V．parahaemolyticus）VPL4—90的ompK基因进行原核表达，利用纯化的OmpK重组蛋白，制备了兔抗OmpK血清．通过westernblot分析发现，OmpK抗血清能够与16种不同的弧菌发生交叉识别反应，其中V．proteolyticus、y．furnissii、V．damsela和V．metschnikovii这4种弧菌OmpK的免疫交叉反应为首次报道，并且证实弧菌OmpK的免疫交叉反应具有种属特异性．通过抗原表位预测和比对发现，弧菌的OmpK具有8个保守的抗原表位，包括7个T细胞表位以及1个T细胞和B细胞的共同表位．流式细胞术分析显示，OmpK抗体能够识别这些相同或相似的抗原表位，提示这些抗原表位可能位于细菌表面．结果表明，这些保守的且位于细胞表面的OmpK抗原表位可能是弧菌OmpK具有免疫交叉反应性的分子基础．
- 伦镜盛袁传飞夏常艳王娅琴郭川黄通旺胡忠
- 关键词：弧菌外膜蛋白
