中国博士后科学基金(20060390192)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 相关作者：哈小琴张尚弟杨志华张俊郭馨云更多>>
- 相关机构：兰州军区兰州总医院军事医学科学院兰州大学第一医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金甘肃省科技重大专项计划甘肃省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带肝细胞生长因子基因的减毒鼠伤寒沙门菌对溃疡性结肠炎大鼠免疫的影响
- 2008年
- 目的:探讨携带肝细胞生长因子基因的减毒鼠伤寒沙门茵对TNBS诱发大鼠实验性结肠炎模型外周血T细胞亚群和免疫球蛋白的影响。方法:50只Wistar大鼠经TNBS灌肠诱发溃疡性结肠炎模型,并随机分为4组:Ty治疗组、Typl-HGF治疗组、Yypl-GFP观察组、模型对照组,除模型对照组20只外,其余每组10只;另设生理盐水灌肠的正常对照组10只。造模后第3天各组灌胃进行治疗,依次给予1×109cfu的Ty、Typl-HGF、Typl-GFP茵液,每只0.5ml,隔日1次,模型和正常对照组给予同体积的100g/LNaHCO3。3次和6次灌胃后1周,各组分别采集全血,用流式细胞仪检测各组CD4+T、CD8+T、IgM、IgG1、IgA水平;Typl-GFP组观察目的基因的组织表达。结果:灌胃3次和6次后模型对照组与正常对照组相比CD4+T细胞均无明显变化,但CD8+T细胞下降明显(P<0.01),CD4+/CD8+T比值明显升高(P<0.05);Typl-HGF组3次灌胃后CD4+T低于模型组(P<0.05),6次灌胃后CD4+T、CD4+/CD8+T比值均明显低于模型对照组和Ty组(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05)。灌胃3次和6次后模型对照组与正常对照组相比IgM、IgG1、IgA均明显增加(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01);灌胃3次和6次Ty组与同期模型对照组、Typl-HGF组相比IgM明显增加(P<0.01,P<0.01),而6次Typl-HGF组与模型对照组相比IgM、IgG,明显降低(P<0.05,P<0.05)。在荧光显微镜下可观察到Typl-GFP茵液灌胃后在结肠组织GFP强表达。结论:大鼠实验性结肠炎发病过程中,机体免疫功能处于亢进状态,Typl-HGF能够抑制T细胞增殖和B淋巴细胞抗体的产生,它可能代表了一种新的药物用于治疗结肠炎疾病。
- 哈小琴刘登瑞吕同德高明太白海吴祖泽
- 肿瘤生物治疗的新技术——靶向基因治疗被引量：3
- 2014年
- 目前，恶性肿瘤已经成为影响人类健康和危及生命的主要疾病。传统的肿瘤治疗方法主要有手术、放疗和化疗，尽管能在短时间内取得较好的效果，但是肿瘤细胞自身的毒副作用和残留成分往往会导致肿瘤细胞的转移复发率增加，而且它对于机体自身的正常细胞尤其是造血系统和免疫系统也会造成严重的损害，因此对于已发生肿瘤转移的患者很难达到较好的远期疗效。 Rosenberg 等[1-2]已经于20世纪80年代建立了以生物治疗技术为基础的现代肿瘤理论。随着肿瘤分子机制的进一步发展，基于生物技术的治疗模式已成为当今肿瘤治疗的第4种治疗模式。作为当今发展最快的领域之一，肿瘤生物治疗主要包括基于分子靶向药物、基因、细胞因子和免疫学方法等的治疗[3-9]。由于肿瘤生物治疗具备特异性较高而毒副作用较低的优点，目前已广泛应用于临床工作中。但是治疗基因如何高效特异的向肿瘤组织传递以及如何向临床进行转化就成为目前肿瘤基因治疗迫切需要解决的重大问题，也是当前肿瘤治疗研究的热点。
- 哈小琴张尚弟杨志华张俊
- 关键词：肿瘤分子靶向治疗基因
- 携带IL-2和NK4双基因真核共表达载体的减毒沙门菌株的构建
- 2014年
- 目的构建携带IL-2/NK4双基因真核表达载体的减毒沙门菌菌株。方法利用分子克隆技术将IL-2及NK4基因分别插入PIRES-SEQ质粒IRES序列的上下游中,构建为双基因真核共表达载体pCMV-IL-2-IRES-NK4,将该质粒利用脂质体转染入细胞,采用ELISA及PCR法检测pCMV-IL-2-IRES-NK4转染细胞后IL-2/NK4基因及蛋白表达情况。将所构建质粒以电转化法转化减毒沙门菌菌株Ty21a,从而得到能够表达IL-2/NK4双基因的重组减毒沙门菌菌株。结果 ELISA及PCR法检测该质粒可在细胞中以较高的效率稳定表达IL-2及NK4基因和蛋白;同时表达IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN构建成功。结论本研究成功构建了携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株。
- 张尚弟哈小琴杨志华李兵邓芝云姜东红张俊王剑锋
- 含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究
- 2014年
- 目的制备含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌TPIN并检测其稳定性。方法将pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌Ty21a感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株TPIN;将TPIN在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的LB培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR扩增酶切鉴定;TPIN转染HepG2细胞后采用RT-PCR检测IL-2和NK4基因表达,ELISA法检测细胞培养上清IL-2和NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR扩增获得目的基因IL-2、NK4特异条带;在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养板传代培养40代的TPIN菌株均可扩增并双酶切出目的基因IL-2及NK4;TPIN体外转染HepG2细胞后,IL-2及NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。
- 杨志华哈小琴张尚弟冯强生薛荣利杨淑娟赵勇杨迎桂
- 关键词：NK4
- TPIN对HepG2肝癌细胞生物学特性的影响
- 2014年
- 目的研究重组减毒沙门菌菌株TPIN对HepG2细胞生物学性能的影响。方法 TPIN转染HepG2细胞36 h时收集细胞表达上清,MTT法检测表达产物对HepG2细胞生长的作用;Transwell迁移实验观察TPIN表达产物对HepG2细胞迁移的影响;将不同剂量表达产物分别加入甲基纤维素小碟,并将小碟小心放入鸡胚绒毛尿囊膜,37.8℃继续孵化3 d,观察IL-2/NK4表达产物体外对鸡胚绒膜尿囊膜血管的效应。结果 TPIN表达上清显著抑制HepG2细胞增殖的活性,且有一定剂量依赖效应;表达产物可明显抑制肿瘤细胞迁移,且明显抑制鸡胚绒膜尿囊膜血管形成。结论 TPIN在体外能高效转染肿瘤细胞,表达目的蛋白IL-2及NK4,且表达产物能够抑制HepG2细胞的增殖和迁移,对鸡胚绒膜尿囊膜血管的形成有抑制效应。
- 樊红艳哈小琴张尚弟杨志华宋月娟李晓云刘延彤徐越斌林静
- 关键词：白细胞介素血管抑制素类
- 口服重组减毒沙门菌TPIN抗小鼠黑色素瘤研究被引量：1
- 2014年
- 目的观察重组沙门菌TPIN对小鼠黑色素瘤治疗的作用。方法应用小鼠黑色素瘤B16细胞给16只C57纯系小鼠建立荷黑色素瘤动物模型;将模型组随机分为对照组(PBS组)及治疗组(TPIN),每组各8只。治疗组应用重组减毒沙门菌TPIN菌灌胃,对照组PBS缓冲溶液灌胃,每周1次共4次,在此期间记录瘤体体积。最后1次灌胃1周后,荷瘤小鼠心脏采血后处死,检测CD3+/CD4+、CD3+/CD8+的T淋巴细胞表型的变化,瘤组织γ-干扰素(IFN-γ)含量及各组织脏器CMV的表达水平。结果成功构建了荷瘤小鼠模型,与治疗组比较,对照组肿瘤体积差异有显著性(P<0.01);治疗组血CD3、CD3+/CD8+、肿瘤组织中IFN-γ表达量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),治疗组小鼠的肠、肾、肝、脾、胃、肿瘤组织中均可扩增出与CMV瘤体大小相符的片段而对照组未扩增出相应片段。结论口服DNA疫苗TPIN免疫荷黑色素瘤小鼠可激起小鼠体内有效的免疫反应并能有效抑制瘤体的生长。
- 哈小琴张尚弟杨志华孙琳郭馨云彭俊华董菊子张媛媛
- 关键词：白细胞介素小鼠
