国家重点基础研究发展计划(G19990160) 作品数:17 被引量:108 H指数:7 相关作者: 祖元刚 齐力旺 张守攻 宋文芹 李秀兰 更多>> 相关机构: 中国林业科学研究院 东北林业大学 南开大学 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 引进国际先进农业科技计划 山西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
虫生真菌中对松墨天牛高毒性蛋白的筛选及性质测定 被引量:8 2005年 从 6株虫生真菌中分离纯化了 4 8种蛋白。以松墨天牛Monochamusalternatus为试虫 ,通过生测筛选出 4种高毒性蛋白 ,并从 4种高毒性蛋白中筛选出毒力最强的蛋白Bb36W D。蛋白Bb36W D含 2个亚基 ,大亚基和小亚基的分子量分别约为 2 4kD和 17kD ;等电点分别为 9 4 7和 9 32。该蛋白含 16种氨基酸 ,其中精氨酸、组氨酸及丙氨酸含量较高。 李建庆 张永安 张星耀 袁锋 王玉珠关键词:虫生真菌 松墨天牛 毒蛋白 分子量 等电点 白僵菌代谢蛋白对松墨天牛毒性生测方法试验 被引量:5 2007年 从白僵菌代谢物中提取蛋白类毒素用于防治松墨天牛,以松墨天牛幼虫为试虫,采用饲喂、口服、表皮接触和血腔注射4种生测方法测定了白僵菌蛋白类代谢物提取液的毒性。结果表明,4种生测方法样品均表现一定的毒性,血腔注射生测所表现的毒性最高。通过对4种生测方法的比较分析,表明白僵菌代谢物中毒素物质的毒性采用血腔注射法最容易检测到。 梅增霞 李建庆 张永安 陈印平关键词:球孢白僵菌 生测方法 松墨天牛 96-Ⅱ喜树叶片高频率植株再生体系建立 被引量:4 2012年 用96-Ⅱ喜树无菌苗叶片为外植体,筛选出了96-Ⅱ喜树最佳愈伤组织诱导培养基为WPM+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+2,4-D0.1 mg/L,愈伤组织诱导率95%以上;愈伤组织分化培养基为WPM+6-BA0.5 mg/L,分化率达90%;最佳生根培养基为WPM+IBA0.8 mg/L,生根率为94%以上,平均根数为4~8条;移栽成活率达到95%以上。 董凤丽 祖元刚 王慧梅关键词:叶片 植株再生 干旱胁迫下黄檗幼苗cDNA消减文库的构建和分析 被引量:10 2008年 以干旱胁迫下的黄檗幼苗cDNA为tester,正常生长的黄檗幼苗cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了干旱胁迫下黄檗幼苗的消减文库并对其进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取20个阳性克隆,提取质粒进行酶切和PCR鉴定,显示丈库克隆的重组率大于95%,插入片段大小大部分集中在300~800bp之间。随机挑取816个克隆进行测序,得到265个基因。将其进行同源性分析,划分为16类。获得了热激蛋白70、脱水响应蛋白(RD22)、通用胁迫蛋白、金属硫蛋白(MTII),晚期胚胎丰富蛋白(LEA14)等44种与干旱胁迫相关的基因,它们涉及了植物的渗透调节、信号传递、转录调控、活性氧清除等方面。本研究为抗逆基因克隆和系统研究干旱胁迫下黄檗基因的表达奠定了重要的理论基础。 王慧梅 王延兵 祖元刚 孙莲慧关键词:干旱胁迫 黄檗 抑制性消减杂交 EST序列分析 长春花金属硫蛋白基因原核表达载体的构建及表达研究 被引量:3 2007年 将从长春花中克隆的金属硫蛋白基因(GenBank登录号:DQ016341)构建到高效原核表达载体pGEX-6P-1,并命名为pGEX-6P-1-CrMT,并对GST-CrMT融合蛋白的表达进行诱导和条件优化。对不同的诱导温度、IPTG诱导浓度和诱导时间等条件的优化结果表明,随诱导时间增长GST-CrMT融合蛋白表达量提高,22℃,24 h和37℃,240 m in均能诱导GST-CrMT融合蛋白的最大量表达,在0.8 mmol.L-1IPTG浓度下可以有效诱导GST-CrMT融合蛋白的表达。 祖元刚 房思良 聂明珠关键词:金属硫蛋白 原核表达 黄檗(Phellodendron amuranse)叶片总RNA提取方法研究 被引量:7 2007年 以黄檗(Phellodendron amuranseRupr.)叶片为材料,分别利用改进的盐酸胍法、Trizol法、CTAB法提取黄檗叶片总RNA,通过RNA产率、纯度、电泳图谱等分析,确立了1种从黄檗叶片中快速分离总RNA的方法。研究结果表明,改进盐酸胍法所提取的总RNA的A260/A280为1.928,28S和18S条带清晰谱图完整性好,而且具有产率高、时间短、成本低的特点,所提取的总RNA适用于mRNA分离、cDNA文库的建立、Northern杂交等分析。 祖元刚 王延兵 王慧梅 孙莲慧关键词:黄檗 叶片 RNA 杨属(Populus)黑杨组(Aigeiros)种(品种)间核型比较 被引量:11 2005年 对杨属黑杨组(Aigeiros)的15个种(品种)核型进行了分析,结果如下:箭杆杨(Populus nigravar.thevestina),2n=38=3M+29m+5sm+1st;盖杨(P.del.cv.×Lux×P.×canadensiscv.Shan haiguanensis),2n=38=2M+27m+4sm+5st(4SAT);欧美杨107(P.×euramericanacv.‘74/76’),2n= 38=1M+29m(1SAT)+5sm+3st(3SAT);欧美杨13(P.×euramericanaCL13),2n=38=3M+23m+ 6sm+3st(1SAT)+3t(3SAT);加杨(P.×canadensisMoench),2n=38=1M+27m+6sm+4st(4SAT); 辽杨×美洲黑杨(P.maximowicziiHenry×P.deltoidsBartr.),2n=38=1M+24m+9sm(2SAT)+4st;中尚 8号(P.×Zhongshangnensis),2n=38=4M+27m(1SAT)+2sm+3st(2SAT)+2t;北京杨(P.×beijin gensis),2n=38=3M+28m+3sm+4st(2SAT);鲁山杨(P.×Liaoningensis),2n=38=1M+27m+3sm+ 6st(1SAT)+1t(1SAT);廊坊1号(P.CL‘Langfang1’),2n=38=3M+28m+3sm+4st(2SAT);圣 山杨(盖杨类)(P.×gaixianesis),2n=38=2M+27m+4sm(1SAT)+4st(3SAT)+1t;抗-2〔P.del toidsCL2(GMO)〕,2n=38=26m+7sm(2SAT)+4st(1SAT)+1t(1SAT);群改3号(P.×Qungainen sis3),2n=38=1M+27m+8st(2SAT)+2t(2SAT);中金2号(P.×Zhongjinnensis2),2n=38=1M+ 18m+13sm(1SAT)+5st(2SAT) 张守攻 齐力旺 韩素英 陈成彬 李秀兰 宋文芹 陈瑞阳关键词:杨属 黑杨 核型分析 欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建 被引量:11 2006年 以欧洲山杨(Populus tremula)根尖细胞为材料,采用玻璃针分离法,通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头,进行两轮PCR扩增,得到了200~3000bp的DNA扩增片段。以DIG-dUTP标记的欧洲山杨基因组DNA为探针进行Southern杂交,结果表明显微分离出的染色体扩增片段与欧洲山杨基因组DNA同源,从而证明一号染色体DNA确实已被成功地扩增。以一号染色体第2轮PCR产物为探针进行荧光原位杂交,发现荧光信号较密集的分布于一号染色体,但同时荧光信号也出现在其它染色体的着丝粒及端粒区域。对第2轮PCR产物进行克隆,构建单条染色体DNA文库,经分析,该微克隆文库包含约3×10^5个重组子。随机挑选160个重组子进行鉴定,证明该文库的插入片段主要介于230~2200bp之间,平均800bp。该文库的构建为欧洲山杨1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆等研究奠定了基础。 张守攻 张勇 刘博 李秀兰 宋文芹 韩素英 齐力旺关键词:欧洲山杨 染色体 显微分离 荧光原位杂交 白僵菌和绿僵菌蛋白对松墨天牛致病性的研究 被引量:16 2006年 从4株白僵菌和1株绿僵菌中提取了10种全蛋白提取液,以林业害虫松墨天牛幼虫为试虫,筛选出菌株Bb36的全蛋白提取液Bb36W-Z和Bb36N-Z,再从中分离出12种单一蛋白提取液,生测发现虫生真菌蛋白Bb36W-D对松墨天牛幼虫具有较强的注射毒性,经其处理后的试虫酯酶谱发生明显变化,致使松墨天牛幼虫内部组织发生病变. 李建庆 张永安 梅增霞 石东里关键词:松墨天牛 致病蛋白 球孢白僵菌 金龟子绿僵菌 三倍体杨树核型分析 被引量:20 2004年 对4种三倍体杨树核型进行了比较分析,三倍体毛白杨核型为:2n=3x=57=1M+31m+10sm+15st;三倍体I-214为:2n=3x=57=2M+33m(2SAT)+10sm(1SAT)+10st(3SAT)+2t;三倍体武黑1号为:2n=3x=57=2M+38m(4SAT)+14sm(2SAT)+3st;三倍体廊坊3号为:2n=3x=57=35m+10sm(1SAT)+10st(2SAT)+2t(1SAT)。结果显示三倍体毛白杨核型与三倍体黑杨核型有显著不同,表明它们的基因组结构不同,起源各异。 陈成彬 齐力旺 张守攻 韩素英 李秀兰 宋文芹 陈瑞阳关键词:杨树 三倍体 核型分析