国家质检总局科技计划项目(2011IK010)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：梁成珠雷质文孙涛王群邓明俊更多>>
- 相关机构：山东出入境检验检疫局济南出入境检验检疫局中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 含马动脉炎病毒N基因的病毒样颗粒的制备被引量：1
- 2014年
- 为了构建易于纯化且耐RNase酶的含有马动脉炎病毒N基因的病毒样颗粒,通过RT-RCR扩增马病毒性动脉炎病毒的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS2his载体中,构建重组原核表达载体pNH-MS2his-N。将重组质粒pNH-MS2his-N转化表达菌株大肠杆菌BL21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导表达、纯化。对病毒样颗粒进行鉴定及稳定性实验。结果表明该病毒样颗粒含马病毒性动脉炎病毒N基因,并且稳定性良好,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。
- 王宇张晓文王群梁成珠汪东风
- 关键词：马动脉炎病毒病毒样颗粒
- 沙门氏菌invA基因重组质粒标准的构建被引量：4
- 2014年
- 目的研制沙门氏菌invA基因重组质粒,为分子生物学方法快速检测沙门氏菌提供质粒标准。方法通过PCR扩增目的片段,连接至pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,测序方法证实目的片段已成功重组,荧光定量PCR方法定性检测分析,采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法对标准质粒分子进行定值。结果 invA基因目的片段成功重组至pMD 18-T载体上,荧光定量PCR结果显示制备重组质粒标准为沙门氏菌核酸标准,重组质粒标准的浓度为2.9μg/mL。结论成功构建沙门氏菌invA基因重组质粒,为快速检测沙门氏菌奠定了基础。
- 李正义梁成珠贾俊涛姜英辉孙涛王宇雷质文
- 关键词：沙门氏菌重组质粒
- 新城疫病毒中强毒株核酸检测用标准样品的研制被引量：1
- 2014年
- 为制备新城疫病毒（NDV）中强毒株核酸检测阳性标准参考样品，本研究以NDV中强毒株RNA为模板，设计NDV融合蛋白F基因特异性引物，通过RT-PCR扩增全长F基因，克隆于pGEM-T载体中，采用体外转录方法制备RNA纯品，初步定量稀释后，混合分装作为核酸标准样品候选物。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验，并委托其他实验室采用外标定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝），并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5 %，稳定性试验表明室温20 ℃～25 ℃ 14 d，2 ℃～8 ℃ 3个月以及 -20 ℃保存一年RNA的含量均无明显变化。核酸标准样品定值为（1.632±0.029）×10^7拷贝，可以用作NDV中强毒株核酸检测的标准质控品。
- 孙涛周世良邓明俊郑小龙王群雷质文曹丙蕾凌宗帅梁成珠
- 关键词：新城疫病毒荧光定量RT-PCR
- A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析被引量：5
- 2014年
- 利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线和协作标定的方式,计算标准物质含量（拷贝）,并进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20~25℃（相对湿度20%~50%）14d,2~8℃3个月以及-20℃保存1年的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为（3.120±0.345）×10^8拷贝数,可用作禽流感病毒通用核酸检测的标准质控品。
- 孙涛雷质文邓明俊王群郑小龙梁成珠曹丙蕾凌宗帅
- 关键词：计量学禽流感病毒荧光定量RT-PCR
- O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备被引量：3
- 2014年
- 利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝数）,并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃（相对湿度20％～50％）14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为（1.260士0.485）×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品.
- 孙涛梁成珠邓明俊郑小龙王群雷质文曹丙蕾凌宗帅
- 关键词：定值O型口蹄疫病毒实时定量RT-PCR
