李会
作品数： 31被引量：236H指数：6
  • 所属机构:重庆医科大学
  • 所在地区:重庆市
  • 研究方向:医药卫生
  • 发文基金:国家自然科学基金

相关作者

冯文莉
作品数：214被引量：736H指数：13
供职机构：重庆医科大学
研究主题：慢性粒细胞白血病 白血病 K562细胞 BCR-ABL BCR/ABL
黄峥兰
作品数：47被引量：57H指数：5
供职机构：重庆医科大学
研究主题：慢性粒细胞白血病 BCR-ABL K562细胞 ABL 白血病
刘张玲
作品数：9被引量：23H指数：3
供职机构：重庆医科大学检验医学院
研究主题：吲哚美辛 K562细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路 白血病急变 CD34+细胞
胡晶
作品数：37被引量：188H指数：7
供职机构：重庆医科大学检验医学院
研究主题：K562细胞 吲哚美辛 慢性髓系白血病 当归多糖 造血干
刘鑫
作品数：12被引量：25H指数：3
供职机构：重庆医科大学检验医学院
研究主题：肺炎链球菌 慢性粒细胞白血病 突变体 ABL 白血病
作品列表
重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8对耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响被引量：1
2015年
目的:研究表达融合蛋白SH2-Caspase 8的重组腺病毒Ad E-SH2-Caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响。方法:K562/G01细胞经重组的腺病毒SC感染后,分别设突变Ad E-SH2m-Caspase 8-HA-GFP(Sm C)组、病毒空载Ad EGFP(CM V)组和PBS对照组。荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达水平,光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达水平。结果:重组腺病毒在K562/G01细胞中的感染效率较高;Western blot能检测到目的蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达;与对照组比较,瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变,FCM检测结果表明SC组早前凋亡细胞明显增高(P<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组出现明显细胞凋亡特异性的梯度条带,Western blot结果表明SC组凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论:重组腺病毒SC表达的SH2-Caspase 8融合蛋白能明显诱导K562/G01细胞的凋亡。
王林王林费嫦黄峥兰李会刘张玲
关键词：细胞凋亡BCR-ABL融合蛋白SH2结构域
重组腺病毒表达的融合蛋白SH2-caspase 8对K562细胞凋亡的影响被引量：1
2013年
目的研究表达融合蛋白SH2-caspase 8的重组腺病毒AdE-SH2-caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的影响。方法将重组的腺病毒SC转染K562细胞(SC组),分别设突变AdE-SH2m-caspase 8-HA-GFP(SmC)组、病毒空载体AdEGFP(CMV)组和PBS对照组。用荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒转染效率,western blot检测融合蛋白及凋亡相关蛋白caspase 3、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的表达情况,用光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况。结果 FCM和荧光显微镜检查结果显示,重组腺病毒在K562细胞中的转染效率较高;融合蛋白SH2-caspase 8-HA和SH2m-caspase 8-HA可在K562细胞中表达;瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变;FCM检测结果表明,SC组与SmC组、CMV组和PBS组相比较,其早期凋亡细胞明显增高(t分别为6.945、19.083和16.470,P均<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组和SmC组可出现细胞凋亡特异性的梯度条带,western blot结果表明,SC组和SmC组凋亡相关蛋白caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论重组腺病毒SC表达的SH2-caspase 8融合蛋白能明显诱导K562细胞的凋亡。
王林李会刘章玲祖白玲黄峥兰向华冯文莉
关键词：细胞凋亡SH2结构域融合蛋白K562细胞
中国人群LEPR基因多态性与2型糖尿病相关性的Meta分析被引量：12
2015年
目的评价中国人群瘦素受体（L E P R）基因多态性与2型糖尿病的相关性。方法在中文数据库（中国知网、维普、万方、中国生物医学文献数据库）中以＂瘦素受体基因＂、＂2型糖尿病＂为检索词,英文数据库（Pub Med、Web of Know ledge、EBSCO）中以＂leptin receptor gene＂、＂LEPR＂、＂OBR＂、＂OB-R＂、＂ty pe 2diabetes＂和＂T2DM＂为检索词,检索研究中国人群LEPR基因多态性与2型糖尿病相关性的文献,日期截至2014年9月20日。采用Rev Man 5.0和Stata 11.0软件进行Meta分析,并采用纽卡斯尔-渥太华量表从研究对象选择、可比性和结果评价三方面进行文献质量评价。结果共纳入17篇病例对照研究,包含病例12 533例,对照3348例。Meta分析显示,LEPR基因rs1137100位点多态性与2型糖尿病相关（隐性遗传模型：OR=0.67,95%CI 0.52~0.88,P=0.00;等位基因遗传模型：OR=1.46,95%CI 1.15~1.85,P=0.00）。LEPR基因rs1137101位点多态性与2型糖尿病相关（加性遗传模型：OR=1.54,95%CI 1.20~1.98,P=0.00;等位基因遗传模型：OR=1.15,95%CI 1.01~1.30,P=0.00）。LEPR基因rs1805096位点多态性与2型糖尿病相关（显性遗传模型：OR=1.32,95%CI 1.07~1.62,P=0.00;隐性遗传模型：OR=1.30,95%CI1.09~1.54,P=0.00;等位基因遗传模型：OR=0.67,95%CI 0.59~0.75,P=0.00）。结论在中国人群中,LEPR基因的rs1137100和rs1805096位点在等位基因遗传模型与隐性遗传模型下与2型糖尿病均相关;在加性遗传模型下,rs1137101位点与2型糖尿病相关,在显性遗传模型下,rs1805096位点多态性与2型糖尿病相关。等位基因A携带者为2型糖尿病的高危人群。
何苗傅倩晰李会金娅娜唐晓君
关键词：瘦素META分析
吲哚美辛对慢性粒细胞白血病急变期CD34^+细胞的影响研究被引量：5
2016年
目的探讨吲哚美辛(IN)对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)急变期CD34+细胞凋亡和周期的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路初步探讨其可能的分子机制。方法采用免疫磁珠分选技术分选慢粒慢性期、急变期患者骨髓标本和正常脐带血标本中的CD34+细胞,流式细胞术鉴定其分选纯度,瑞氏染色观察其细胞形态,采用免疫荧光技术检测CD34+细胞中β-catenin和BCR/ABL的表达及定位。使用IN联合伊马替尼(IM)处理CD34+细胞,免疫荧光技术检测β-catenin蛋白变化,瑞氏染色和流式细胞术观察细胞凋亡及细胞周期,定量PCR检测靶基因c-myc和cyclin D1的m RNA水平,流式细胞术和免疫荧光技术检测BCR/ABL蛋白变化。结果成功分选出CD34+细胞,纯度达90%以上;β-catenin和BCR/ABL均在慢粒急变期CD34+细胞中高表达,主要定位于胞质。IN与IM联用能够显著抑制慢粒急变期CD34+细胞中β-catenin的表达,使慢粒急变期CD34+细胞的细胞周期被阻滞在G0/G1期,明显增加细胞的凋亡,明显降低c-myc和cyclin D1的m RNA水平,并使BCR/ABL的蛋白水平显著下降,但对正常CD34+细胞没有影响。结论 IN通过影响细胞周期和细胞凋亡,增强IM对慢粒急变期CD34+细胞的杀伤力,其机制可能是与降低β-catenin的表达,抑制c-myc和cyclin D1的转录及BCR/ABL的蛋白水平有关。
胡晶冯敏刘毅刘张玲李会黄峥兰冯文莉
关键词：CD34+细胞吲哚美辛
靶向G偶联蛋白受体87基因shRNA重组表达质粒的构建及鉴定
2014年
目的构建靶向G偶联蛋白受体(G protein-coupled receptor,GPR)87基因的shRNA重组表达质粒,并进行鉴定。方法根据NCBI基因数据库中的GPR87基因mRNA序列设计并合成3对靶向GPR87基因的shRNA,同时设阴性对照GPR87-HK序列,分别与线性化质粒pGenesil-1.1连接,构建靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒GPR87-1、GPR87-2、GPR87-3及GPR87-HK,在Lipofectamine 2000介导下,分别转染BIU87膀胱癌细胞,通过RTPCR和Western blot法检测各组细胞中GPR87基因mRNA转录和蛋白表达水平,并计算表达抑制率。结果 3种重组质粒经单酶切及测序鉴定,证明构建正确;转染BIU87膀胱癌细胞48 h后,镜下观察均可见绿色荧光;GPR87-1组、GPR87-2组和GPR87-3组细胞中GPR87基因和蛋白表达水平均显著低于GPR87-HK组(P<0.01),mRNA表达抑制率分别为76%、52%和50%,蛋白表达抑制率分别为90%、45%和41%。结论成功构建了靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒,为后续研究GPR87基因对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及耐药的影响奠定了基础。
鲁力文李亚娟李会王方钟梁冯文莉
关键词：RNA干扰膀胱癌
Meta分析在基因多态性与糖尿病相关性研究中的应用
目的:应用Meta分析方法，研究基因多态性与糖尿病易感性之间的关系，包括:①细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因上游rs10811661单核苷酸多态性与2型糖尿病易感性的Meta分析;②中国人群瘦素受体基因多态性与...
李会
关键词：2型糖尿病妊娠期糖尿病基因多态性META分析
吲哚美辛对K562细胞株BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的影响被引量：9
2015年
目的探讨吲哚美辛对K562细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛作用于K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,克隆形成实验检测吲哚美辛对K562细胞克隆形成能力的影响。RT-PCR分别检测bcr-abl、β-catenin的mRNA表达变化,Western blot分别检测p BCR/ABL、总BCR/ABL、β-catenin、p GSK-3β、c-myc的蛋白表达变化。结果 100、200、400μmol/L吲哚美辛作用细胞48 h后,以浓度依赖性方式抑制K562细胞的增殖和克隆形成能力。3种浓度的吲哚美辛处理K562细胞后,p BCR/ABL、总BCR/ABL的蛋白表达依次减少,而bcr-abl mRNA水平没有明显变化。β-catenin mRNA和蛋白水平依次减少;p GSK-3β、c-myc的蛋白水平均明显降低。结论吲哚美辛可通过抑制BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力。
刘张玲胡晶黄峥兰李会刘鑫冯文莉
关键词：吲哚美辛慢性粒细胞白血病K562细胞信号通路
探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响被引量：1
2017年
目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后克隆至穿梭质粒p Ad Track-CMV,经Ad Easy构建系统获得腺病毒Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和Ad-Bcr/Abl,并在HEK293细胞中进行包装。将细胞分为3组,Ad-GFP组、Ad-Bcr/Abl组以及Ad-Bcr/Abl-ΔFABD组,分别加入对应的腺病毒。Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的表达水平,间接免疫荧光法检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的定位。流式细胞术、MTT法分别检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞凋亡、增殖的影响。结果:双酶切以及测序验证穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切验证重组腺病毒质粒重组成功;绿色荧光显示重组腺病毒包装成功;Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD可在293T细胞中表达;间接免疫荧光发现Bcr-Abl蛋白在细胞内的分布依赖于F-actin;FABD缺失后虽然不能使Bcr/Abl入核,但使其在细胞内的分布方式由均匀变为点状或块状聚集;FABD缺失后,Bcr/Abl在细胞内呈块状聚集的方式与IM处理后的结果相似。流式细胞术和MTT结果显示,与Bcr/Abl相比,Bcr/Abl-ΔFABD组293T细胞的凋亡比例增加(P<0.05),增殖能力降低(P<0.05)。结论:成功构建Ad-Bcr/Abl和Ad-Bcr/Abl-ΔFABD重组腺病毒,FABD缺失后使Bcr/Abl蛋白在细胞质中的分布方式发生改变,并能抑制Bcr/Abl的抗凋亡能力和促增殖能力。
王腾黄峥兰高淼李会周芳竹冯文莉
关键词：细胞定位伊马替尼
FKBP-RAP-FRB系统转运BCR-ABL入核对K562细胞的增殖抑制效应被引量：1
2014年
BCR-ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病的基础。其中,BCR-ABL只能定位于细胞浆、不能易位至细胞核是其致病的关键因素。因此,转运BCRABL入核可能是治疗CML的潜在方法。该研究利用基因重组技术,构建HA-2FKBP-ABD(HF2A)和FLAG-3NLS-FRB*(FN3R)重组腺病毒,与雷帕霉素类似物(Rapamycin analog)一同组成FKBP-RAPFRB系统,转运K562细胞胞浆中的BCR-ABL癌蛋白至细胞核,并探究其对K562细胞增殖的影响。结果显示,成功构建了高滴度的重组腺病毒,Western blot证实目的蛋白在K562细胞内成功表达。FKBP-RAP-FRB系统可通过转运BCR-ABL入核,抑制K562细胞生长和克隆形成的能力。结果揭示,FKBP-RAP-FRB系统转运BCR-ABL入核有望为CML提供新的治疗手段。
高淼黄峥兰曹唯希李千音李会冯文莉
关键词：慢性粒细胞白血病BCR-ABLK562细胞重组腺病毒
BCR-ABL SH3-T79Y突变体重组腺病毒载体的构建及促进白血病K562/G01细胞凋亡
2017年
目的探讨构建BCR-ABL SH3-T79Y突变体(简称SH3-T79Y突变体)的重组腺病毒载体及其对白血病耐药细胞株K562/G01细胞凋亡的影响。方法以p Mig210质粒为模板,用重叠延伸PCR扩增SH3-T79Y突变体片段,将其克隆入重组腺病毒载体,通过鉴定、包装、扩增后得到含SH3-T79Y突变体的重组腺病毒。将重组腺病毒感染白血病K562/G01细胞株,测定其感染效率,瑞氏染色检查细胞形态学,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测BCR-ABL、Crk L磷酸化及总蛋白水平。结果重组腺病毒载体构建成功。SH3-T79Y突变体转染K562/G01细胞株72 h效率大于80%,可见明显的凋亡小体、核聚集等凋亡现象,凋亡率为32.46%,较对照组显著增加(P<0.05);明显抑制BCR-ABL和Crk L的磷酸化水平,降低BCR-ABL总蛋白表达(P<0.05)。结论成功构建SH3-T79Y突变体重组腺病毒载体,并证实其通过抑制BCR-ABL及底物Crk L磷酸化水平促进K562/G01细胞凋亡。
文良雪刘鑫李会黄宁姝黄峥兰冯文莉
关键词：慢性粒细胞白血病BCR-ABL重组腺病毒
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