王俊华
作品数： 50被引量：125H指数：7
  • 所属机构:新疆医科大学第一附属医院
  • 所在地区:新疆 乌鲁木齐市
  • 研究方向:医药卫生
  • 发文基金:国家自然科学基金

相关作者

林仁勇
作品数：269被引量：1,038H指数：17
供职机构：新疆医科大学第一附属医院
研究主题：泡球蚴 细粒棘球蚴 包虫病 细粒棘球绦虫 囊型包虫病
温浩
作品数：789被引量：3,008H指数：26
供职机构：新疆医科大学
研究主题：包虫病 棘球蚴病 细粒棘球蚴 肝泡型包虫病 阿苯达唑
吕国栋
作品数：128被引量：335H指数：9
供职机构：新疆医科大学第一附属医院
研究主题：细粒棘球蚴 细粒棘球绦虫 泡球蚴 囊型包虫病 原头蚴
张传山
作品数：70被引量：136H指数：7
供职机构：新疆医科大学基础医学院
研究主题：细粒棘球蚴 泡球蚴 多房棘球蚴 泡球蚴感染 囊型包虫病
卢晓梅
作品数：151被引量：416H指数：10
供职机构：新疆医科大学第一附属医院
研究主题：泡球蚴 食管癌 食管鳞癌 食管鳞状细胞癌 哈萨克族
作品列表
转化生长因子-β1及凋亡相关因子在泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中的表达及其意义被引量：4
2011年
目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1（TGF-p1）、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化，免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细胞TGF-β1以及凋亡相关因子Caspase-3的表达与分布，原位末端标记技术（TUNEL）检测病灶旁免疫细胞凋亡。结果泡型包虫患者及泡球蚴感染小鼠病灶旁及汇管区均有大量炎性细胞灶性浸润，TGF—β1（P〈0．01）和凋亡相关因子Caspase-3（P〈0．01）高表达，TUNEL结果表明病灶旁免疫细胞发生凋亡，与对照比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论泡球蚴在感染宿主过程中可能通过引起宿主TGF—β1高表达，造成免疫细胞发生凋亡而达到逃避宿主免疫反应长期寄生的目的。
王俊华卢晓梅张传山魏绪法温浩林仁勇
关键词：泡球蚴免疫细胞转化生长因子-Β1
老年患者血清25羟维生素D3与冠状动脉狭窄程度的相关性研究被引量：10
2015年
目的 探讨血清25羟维生素D3与老年患者冠状动脉狭窄程度相关性.方法 对269例老年患者行冠状动脉造影术,分为狭窄组114例和正常组1 55例,应用Gensini积分判断冠状动脉狭窄程度.测定血清25羟维生素D3水平,按照25羟维生素D3四分位数分为：Q1组（＜15.0 nmol/L）60例,Q2组（15.0～22.1 nmol/L）74例,Q3组（22.2～35.6 nmol/L）68例,Q4组（＞35.6 nmol/L）67例.结果 狭窄组与正常组25羟维生素D3比较,差异有统计学意义[（25.05±16.08）nmol/L vs （31.83±22.36）nmol/L,P=0.004];Q1组、Q2组、Q3组与Q4组Gensini 积分比较,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）.血清25羟维生素D3与C反应蛋白呈负相关（r=0.548,P=0.000）,与Gensini评分呈负相关（r=-0.183,P=0.003）.多元logistic回归分析显示,血清25羟维生素D3是老年患者冠状动脉狭窄独立保护因素（P＜0.01）.结论 低水平25羟维生素D3与老年患者冠状动脉狭窄程度相关,需进一步研究证实补充25羟维生素D3是否会减少老年冠心病的发病.
李晖张源明刘永兵王俊华李鲁高翠荣赵园
关键词：冠状动脉狭窄冠状血管造影术维生素D缺乏
实时荧光定量PCR检测多房棘球蚴感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因方法的建立被引量：2
2009年
目的建立多房棘球蚴（泡球蚴）感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因（Serpina3g）实时荧光定量PCR（RT—qPCR）的检测方法及与常规RT—PCR检测方法的比较。方法肉眼直视下肝脏穿刺注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型，3个月后将小鼠处死，Trizol法提取肝脏总RNA，反转录获得cDNA。依据Serpina3g的编码基因（NM_009251）保守序列，通过Primer5软件设计定量引物，以β—actin作为内参。以健康小鼠肝脏获得的cDNA依次10倍梯度稀释制备标准品（1×10^2～1×10^6pg），利用SYBR Green RT-qPCR方法检测Serpina3g基因，然后根据cDNA浓度与循环值（Ct）的线性关系，绘制标准曲线，确定RT—qPCR检测的最佳条件和重复性；并将RT—qPCR结果与常规RT—PCR琼脂糖凝胶电泳结果进行特异性、灵敏度和定量等方面的比较。结果筛选出Serpina3g基因定量引物，最佳退火温度为56．g℃；RT—qPCR无非特异性扩增，标准品及样品熔解温度均在80．5℃，熔解峰单一；标准曲线斜率为-2．833（效率），相关系数r=0．996：5个不同梯度的样本（1×10^2～1×10^6pg）重复检测5次均为阳性，变异〈5％；mRNA检出限为1×10^2pg，总RNA在1×10^2-1×10^6pg内均可以进行扩增；常规RT-PCR方法mRNA检出限仅为1×10^6pg。结论成功建立了小鼠源Serpina3g的RT—qPCR检测方法，在特异性、灵敏度、重复性和定量方面优于常规RT—PCR。
王俊华刘涛王慧吕国栋卢晓梅王星姜涛温浩林仁勇
泡球蚴囊液对大鼠肝细胞TGF-βⅡ型受体及Smads信号蛋白表达的影响
2011年
目的观察泡球蚴(Em)囊液对Wistar大鼠肝细胞TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)及信号蛋白Smad2/3、Smad4及Smad7表达的影响。方法以Wistar大鼠作肝细胞供者,采用胶原酶肝脏原位灌流消化法分离,1×106接种于Ⅰ型胶原铺底35 mm培养皿,无血清培养20 h后,以泡球蚴囊液置换培养液培养2 h,提取蛋白,Western blot检测TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、p-Smad2/3、Smad4及Smad7在肝细胞的表达。结果 Western blot显示,泡球蚴囊液处理2 h后,大鼠肝细胞内TβRⅡ、p-Smad2/3、Smad4及Smad7分别为4.71±0.73、2.37±0.34、2.08±0.23和0.19±0.05,对照组分别为1.55±0.21、0.42±0.09、0.37±0.07和0.59±0.12,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论泡球蚴囊液对大鼠肝细胞TβRⅡ、p-Smad2/3、Smad4蛋白表达均有上调作用,而对Smad7蛋白表达具有下调作用,提示泡球蚴侵染宿主过程中通过影响TGF-/βSmads信号通路而造成宿主肝损伤。
王俊华张雪李静魏绪法周晓涛张传山吕国栋卢晓梅温浩林仁勇
关键词：泡球蚴囊液肝细胞SMADS
多房棘球绦虫原头蚴对体外培养宿主肝细胞MAPK信号通路影响的初步研究被引量：6
2011年
目的探讨多房棘球绦虫原头蚴对体外培养宿主肝细胞丝裂素活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响。方法采用宿主大鼠肝细胞BRL3A和人源肝癌细胞系HepG2,分别与多房棘球绦虫原头蚴体外无血清共培养。实验组(与多房棘球绦虫原头蚴共培养)每瓶细胞接种约3×103个原头蚴;处理组(U0126)每瓶细胞先用20μmol/L U0126处理3 h,再接种约3×103个原头蚴,继续共培养,分别在12、24、48、72、96和120 h收集细胞,同时收集对照组(无血清培养基)细胞。利用免疫印迹技术(Western blot)检测p-ERK1/2、p-p38和p-JNK的变化。结果在48 h,肝细胞BRL3A共培养组p-ERK1/2表达活性与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),在12、24和48 h,p-JNK和p-p38表达活性分别有微弱升高;在72和96 h肝细胞HepG2共培养组p-ERK1/2表达活性与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),p-JNK和p-p38表达活性无明显变化;U0126处理组p-ERK1/2活性受抑制。结论多房棘球绦虫原头蚴可能自身分泌细胞因子EmIns、EmBMP1/2、EmAct或egfd,通过与宿主表面受体结合激活宿主肝细胞MAPK信号通路。
张传山李朝旺范金亮李静吕国栋王俊华卢晓梅温浩林仁勇
关键词：多房棘球绦虫原头蚴肝细胞MAPK
PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用被引量：2
2012年
目的建立real-time R T-qPCR(实时荧光定量R T-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mR NA的水平。方法两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组(LEW→BN)模型,术后7 d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR GreenⅠreal-time RT-qPCR检测法。利用该方法检测移植肝中PD-L1和β-actin的初始模板量,PD-L1/β-actin计算PD-L1 mRNA的相对表达量。结果异基因LEW→BN组出现急性排斥反应,ALT、AST排斥组均高于耐受组(均P<0.05)。RAI评分排斥组高于耐受组(均P<0.05)。PD-L1扩增效率为98.8%,相关系数为0.996;溶解曲线为特异单峰;变异系数小于2.0%;移植肝中PD-L1 mRNA相对表达为耐受组([0.95±0.10)×10-2]高于排斥组([0.81±0.09)×10-2],差异有统计学意义(t=2.62,P=0.026)。结论成功建立了大鼠源PD-L1的real-time R T-qPCR检测方法,耐受组PD-L1的高表达提示其可能有利于大鼠移植肝的存活,为研究肝移植免疫耐受奠定了理论基础。
巫姜李涛赵晋明王俊华刘向伟林仁勇温浩
关键词：肝移植PD-L1实时荧光定量RT-PCRSYBR
泡球蚴感染对BALB/c小鼠肝细胞ERK1/2和p38表达变化的初步研究被引量：5
2009年
目的通过检测ERK1/2和p38在泡球蚴感染小鼠肝组织中的表达,探讨其在肝泡球蚴病发生中的作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学的方法检测16例感染组小鼠和16例对照组小鼠肝组织中的ERK1/2和p38的表达水平。结果感染组ERK1/2表达水平较对照组有统计学差异(P<0.05),p38的表达在感染组与对照组无统计学差异。结论在泡球蚴感染早期,肝细胞增殖占主导。
纪静王俊华姜涛吕国栋刘辉李瑶王红丽卢晓梅王星段新宇温浩买买提祖农林仁勇
关键词：泡球蚴ERK1/2P38小鼠
细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性被引量：2
2009年
目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱(GST-sepharose4B)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量(Mr)为40800,纯化蛋白含量为78.4%。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%(95/120)和51.1%(23/45),但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2%(95/120)和81.0%(98/121),均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103)和特异性(76.9%,30/39)。结论重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。
吕国栋刘涛林仁勇王星王俊华任智慧温浩卢晓梅
关键词：细粒棘球绦虫免疫诊断
细粒棘球蚴转化生长因子βⅠ型受体胞内域原核表达载体的构建及蛋白纯化
2013年
目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)转化生长因子βⅠ型受体胞内域(transforming growth factor-βtypeⅠreceptor intracellular domain,TβRⅠ-Ⅰ)原核表达载体,诱导表达并纯化EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白。方法采集感染Eg的羊源原头蚴,Trizol法提取原头蚴总RNA,RT-PCR扩增EgTβRⅠ-Ⅰ基因片段,克隆至原核表达载体pET28a(+),经限制性内切酶双酶切和序列鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌感受态细胞BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。结果 pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体构建成功,经IPTG诱导可表达EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白(分子质量单位为48ku),纯化后获得大量纯度较高的可溶性蛋白。结论成功构建pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体,并获得纯化的可溶性目的蛋白,为研究EgTβRⅠ-Ⅰ在Eg体内的生物学作用及其作用方式奠定了基础。
杨乐王丽敏张传山李亮王俊华吕国栋王慧温浩林仁勇
关键词：细粒棘球绦虫基因表达蛋白纯化
泡球蚴感染小鼠IL-17基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立与检测被引量：3
2011年
目的建立检测泡球蚴感染小鼠IL-17的实时荧光定量RT-PCR方法,并用于泡球蚴病小鼠IL-17基因检测。方法通过腹腔注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,感染1个月后处死,提取肝脏总RNA,反转录得到cDNA;登陆GenBank,得到IL-17基因（U43088.1）全序列,选取保守序列,应用pri mer 5设计引物,β-actin作为内参,以10倍梯度稀释IL-17 PCR产物为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR以确定方法的特异性和灵敏度;绘制标准曲线,确定IL-17基因检测的最佳条件。结果用建立的实时定量RT-PCR检测IL-17基因无非特异性扩增,各样品熔解温度均在81.0℃,熔解峰单一;mRNA检出限为1×102pg,106~102pg总RNA均有扩增;泡球蚴感染1个月后,IL-17基因表达显著增加,感染组和对照组分别为（0.008728±0.000984）和（0.003823±0.00082）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论成功建立了小鼠源IL-17基因实时定量RT-PCR检测体系。经检测,小鼠感染泡球蚴1个月后IL-17基因表达增加,表明IL-17在泡球蚴感染免疫调节中可能起重要作用。
张志王俊华张传山吕国栋卢晓梅姜涛林仁勇温浩
关键词：泡球蚴实时荧光定量RT-PCRIL-17
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