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肖徽
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- 所属机构:华中科技大学同济医学院
- 所在地区:湖北省 武汉市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 陶德定
- 作品数：163被引量：718H指数：14
- 供职机构：华中科技大学同济医学院
- 研究主题：流式细胞术 细胞周期 细胞凋亡 细胞增殖 MOLT-4细胞
- 龚建平
- 作品数：281被引量：1,345H指数：19
- 供职机构：华中科技大学同济医学院
- 研究主题：流式细胞术 细胞周期 细胞凋亡 细胞增殖 胃癌
- 李小兰
- 作品数：76被引量：249H指数：9
- 供职机构：华中科技大学同济医学院
- 研究主题：细胞周期 流式细胞术 细胞凋亡 细胞增殖 结肠癌
- 胡俊波
- 作品数：125被引量：553H指数：11
- 供职机构：华中科技大学同济医学院
- 研究主题：细胞周期 细胞增殖 流式细胞术 增殖 胃癌
- 黄丹
- 作品数：15被引量：55H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院
- 研究主题：细胞周期 流式细胞术 MOLT-4细胞 细胞凋亡 细胞周期素
- 奥沙利铂诱导人骨髓造血细胞凋亡及DNA损伤修复被引量：3
- 2015年
- 目的探讨在细胞毒药物奥沙利铂诱导下,人骨髓CD34^+前体造血细胞与CD34^-成熟造血细胞发生细胞凋亡及DNA损伤修复信号通路上相关基因表达的情况。方法采用免疫磁珠法分选出16例人骨髓单个核细胞中的CD34^+及CD34^-细胞,并应用流式细胞术检测其纯度。用奥沙利铂(终末浓度为10μg/mL)诱导2种细胞凋亡,检测诱导不同时间的2种细胞凋亡率的差异。提取细胞RNA,并利用基因芯片技术,分析比较药物诱导前后的CD34^+及CD34^-细胞中DNA损伤修复信号通路相关基因的表达情况。结果16份骨髓样本CD34^+阳性率为(4.75±1.82)%;免疫磁珠法分选后,流式细胞术检测CD34^+细胞的纯度为(81.24±5.68)%,所得CD34^-细胞的纯度为(97.67±1.21)%。CD34^+细胞在经过奥沙利铂诱导后4、8、12h,凋亡率分别为(27.44±4.12)%、(53.58±7.89)%,(84.65±6.20)%,CD34^-细胞在诱导后4、8、12h,凋亡率分别为(18.40±3.07)%、(39.11±5.28)%、(71.65±7.73)%,各时间点2种细胞的凋亡率差异均有统计学意义(均P<0.05)。基因芯片结果显示,在加入奥沙利铂诱导前,CD34^+细胞与CD34^-细胞表达差异2倍以上的基因有9种,其中前者有7种基因表达高于后者,2种基因表达低于后者,在奥沙利铂诱导8h后,CD34^+细胞与CD34^-细胞表达差异2倍以上的基因有14种,均为前者高于后者。结论在奥沙利铂诱导下,骨髓前体CD34^+细胞和成熟的CD34^-细胞相比,其DNA损伤修复系统相关基因表达水平较高,但更易于发生细胞凋亡。
- 邹游黄丹李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：CD34细胞凋亡DNA损伤奥沙利铂
- HAX1和EGFP共表达重组腺病毒载体的构建、鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术，将目的基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack—CMV中，并转化于大肠埃希菌DH5a；筛选出重组质粒pAdTrack—CMV—HAX1，并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体；用lipofectamine将其转染HEK293细胞，包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pad—HAX1-EGFP，酶切和序列测定鉴定；用制备好的Ad—HAX1-EGFP感染HEK293细胞，流式细胞术检测其感染效率，RT—PCR、Western印迹鉴定外源基因HAX1的表达。BrdU检测感染了Ad—HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况。结果pAdTrack—CMV—HAX1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—HAX1质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符。构建好的Ad—HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞；外源基因能在239细胞中有效表达。HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高。结论成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体，HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖。
- 李小兰徐向上李兆明王桂华魏欣罗学来刘慎沛肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：重组腺病毒增殖
- 大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白水平的相关性被引量：3
- 2011年
- 目的研究大肠癌组织的细胞周期分布状态与临床病理因素的关系,以及和细胞周期调节蛋白的表达水平是否相关。方法应用流式细胞术检测45例大肠癌临床标本细胞周期中G0/G1、S、G2/M期所占的比例,并检测每例标本的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE、CyclinA、CyclinB1的表达水平。结合临床病理因素进行统计分析。结果肿瘤细胞G0/G1、S、G2/M期所占的比例和患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期均无明显相关性,均P>0.05。G0/G1期的比例与CyclinD1、CyclinE,S期与CyclinE、CyclinA,G2/M期与CyclinA的表达水平均不相关,均P>0.05;但是G2/M期的比例与CyclinB1的表达水平正相关,r=0.335,P=0.035。结论大肠癌肿瘤细胞的周期分布和临床病理因素无关,肿瘤细胞周期蛋白的表达特点与体外培养的细胞系不同,表现得更加复杂多样。
- 于冬冬张永红邹游李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：大肠肿瘤细胞周期细胞周期蛋白
- 质粒DNA及其协同IFN-γ、CH50在巨噬细胞免疫功能激活中的作用被引量：5
- 2003年
- 目的 :研究真核表达质粒DNA在巨噬细胞免疫功能激活中的作用及其机制。方法 :体外培养巨噬细胞 ,检测巨噬细胞一氧化氮 (NO)分泌水平、FACS检测巨噬细胞表面分子的表达、MTT法测定巨噬细胞的细胞毒作用 ,以这些指标测定质粒DNA、质粒DNA IFN γ、质粒DNA CH5 0多肽对体外巨噬细胞的直接激活作用。或腹腔注射质粒DNA ,取腹腔巨噬细胞进行功能检测。结果 :pCH5 10质粒和pcDNA3 1质粒在体内、外均可刺激巨噬细胞产生NO。激活的巨噬细胞表面分子MHC Ⅱ、B7 1表达增加 ,细胞毒作用增强。在体外 ,质粒DNA协同IFN γ对巨噬细胞产生更强的激活作用 ,而CH5 0多肽与质粒DNA没有协同作用 ;腹腔注射质粒DNA后 ,取出巨噬细胞再与IFN γ共培养时 ,巨噬细胞的激活程度没有改变 ,而再与CH5 0作用时 ,巨噬细胞的激活明显增强。结论 :质粒DNA在体内外能够激活巨噬细胞 ,但在体内、外的作用显然具有不同的机制 ,体外可以直接刺激巨噬细胞 ,且与IFN γ有协同作用 ;体内则是间接激活巨噬细胞 ,这些巨噬细胞随后可被CH5 0多肽进一步激活。真核表达质粒用于肿瘤的基因治疗时 ,除了其表达产物的功能之外 ,质粒自身的免疫激活作用将进一步增强肿瘤治疗作用。
- 肖徽冯作化张桂梅李东
- 关键词：质粒巨噬细胞免疫激活
- 共转染CDK1、CDK2siRNA对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响
- 2009年
- 目的研究共转染CDK1、CDK2siRNA同时抑制CDKI、CDK2蛋白表达对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响，探讨细胞周期主要调控分子在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象，用脂质体lipofectamine2000同时转染CDKl和CDK2siRNA。在转染后48、60h收集细胞，用Western印迹检测CDKl、CDK2蛋白的表达，AnnexinV／PI检测转染细胞的凋亡，流式细胞术DNA含量检测分析细胞周期。转染细胞进行瑞氏一姬姆萨染色（Wright—Giemsa）后在显微镜下观察其形态变化i结果共转染CDKl、CDK2siRNA后48和60h，Western印迹结果显示CDKl和CDK2蛋白的表达都同时降低。共转染CDKl、CDK2siRNA后，细胞周期S期和G1／M期比例与对照相比有明显增加；共转染细胞经瑞氏一姬姆萨染色后在显微镜下可见双核或多核细胞增多；AnnexinV／PI检测结果显示共转染CDK1、CDK2siRNA的细胞在48和60h细胞凋亡率与对照相比有显著的升高。结论siRNA干扰导致的CDKI、CDK2表达同时降低不仅导致细胞周期s期和G1／M期的阻滞，也诱导了肿瘤细胞的凋亡。
- 肖徽魏欣于东东徐向上黄丹王贵华李小兰陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期依赖性蛋白激酶细胞周期阻滞肿瘤细胞凋亡
- 真核表达载体质粒pCH510的体内免疫调节作用
- 纤维结合素(Fibronectin,Fn)是具有多个功能结构域的细胞外基质糖蛋白,在抗肿瘤的研究中显示出重要的应用价值.该课题组已构建出能表达更小免疫原性、更高活性的接近天然状态的人Fn重组多肽CH50的真核表达载体质粒...
- 肖徽
- 关键词：纤维结合素巨噬细胞激活
- 文献传递
- 人重组Fas配体体外诱导细胞周期特异性凋亡模型的建立被引量：3
- 2007年
- 目的运用人重组Fas配体(rhFasL),体外诱导稳定而又典型的Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型,为针对其细胞凋亡过程中的细胞周期机制研究、肿瘤的生物学治疗和自身免疫性疾病的防治等提供科学的研究平台。方法以白血病细胞系(Molt-4和Jurkat细胞系)和进入细胞周期的外周血淋巴细胞为载体,用人重组Fas配体诱导细胞6～36h后,用亚G1峰法、传统的AnnexinⅤ/PI和改良后的API法进行标记并用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果改良后的API法显示人重组Fas配体诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性及始动位点;传统的AnnexinⅤ/PI显示在将细胞凋亡控制在10%～20%并以早期细胞凋亡为主时诱导的模型最典型;亚G1峰法只能检测晚期细胞凋亡和进行DNA直方图分析。结论人重组Fas配体体外诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期,联合应用传统的Annex-in-Ⅴ/PI及改良后的API法能为建立稳定而又典型的体外Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型提供技术支撑。
- 何小军肖田王尊葛军娜黄丹徐惠婷李小兰肖徽陶德定龚建平
- 关键词：细胞周期细胞凋亡流式细胞术
- 流式细胞术的凋亡检测技术在人胃肠实体瘤药敏试验中的应用被引量：4
- 2007年
- 目的化疗药能诱导肿瘤细胞凋亡,据此将流式细胞术的经典凋亡检测技术应用到临床特异性抗肿瘤药物的筛查,实现快速,准确的药物敏感性报告。方法应用流式细胞术的An- nexin V/PI技术,检测67例临床手术切除的胃肠肿瘤在不同化疗药物诱导下发生的凋亡。结果7种化疗药物诱导的胃肠肿瘤凋亡率有显著差异,胃癌的凋亡率以紫杉醇,丝裂霉素,氟尿嘧啶最高;而大肠癌以氟尿嘧啶,丝裂霉素,奥沙利铂诱导的凋亡率最高。联合化疗方案,胃癌以氟尿嘧啶联合紫杉醇的敏感率及凋亡率最高;大肠癌以氟尿嘧啶联合奥沙利铂的敏感率及凋亡率最高。结论不同肿瘤或同一肿瘤的不同个体,对化疗药物的敏感性均不同。临床可应用凋亡检测技术作为快速的药物敏感性检测方法,为肿瘤化疗筛选合适的个体化有效方案,避免无效化疗。
- 姚静谢大兴吴剑宏李小兰肖徽陶德定龚建平
- 关键词：流式细胞术脱噬作用药物敏感性
- 饥饿诱导肿瘤细胞自噬对细胞周期的影响被引量：8
- 2008年
- 背景与目的:无血清饥饿方法可以诱发细胞自噬,同时也可以引起细胞周期阻滞。虽然研究者们对细胞自噬与细胞周期已经进行了深入的研究,但是对于两者之间的关系还是知之甚少。本研究旨在通过研究细胞周期素(Cyclin)在饥饿诱导的细胞发生自噬时表达的变化,来探讨自噬对细胞周期的影响。方法:对照组:d-Hanks液代替培养基饥饿诱导处于对数生长期的HeLa细胞,收获饥饿0、3、6、12h的细胞。实验组:用d-Hanks液开始饥饿的同时加入3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),收获饥饿0、3、6、12h的细胞,用流式细胞术和Western blot法检测细胞周期素和特异性标记自噬的兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC-3)。结果:饥饿3h对照组HeLa细胞中有LC-3表达,并随饥饿时间延长而逐渐增加。Cyclin E、Cyclin D3在饥饿3h开始减少,在饥饿6h降低至最低水平,而Cyclin A、Cyclin B1在饥饿6h开始下降。实验组HeLa细胞在饥饿3h时LC-3的表达水平较低,随饥饿时间的延长LC-3表达基本不变化,Cyclin D3、Cyclin E、Cyclin A、Cyclin B1表达的下降速度也较对照组减慢。结论:自噬参与饥饿诱导的Cyclin降解的水解过程,Cyclin D3、Cyclin E水解比Cyclin A、Cyclin B1出现早,降解速度快。
- 葛军娜黄丹肖田王尊李小兰肖徽陶德定龚建平
- 关键词：HELA细胞自噬细胞周期素细胞周期流式细胞术
- 鼠源TRAIL真核表达质粒的构建及其抑瘤效应的初步观察被引量：1
- 2002年
- 采用 RT- PCR自小鼠脾细胞 RNA中扩增出鼠 TRAIL 基因的全长 c DNA,利用 DNA重组技术将其插入到真核表达载体 pc DNA3.1中获得重组质粒 p X1。经酶切鉴定及序列分析 ,表明成功构建 TRAIL 的真核表达质粒。通过直接肌肉内注射进行基因转染 ,p X1具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌生长的作用。表明 TRAIL
- 薛胜利冯作化张桂梅黎培员王洪涛肖徽
- 关键词：TRAIL凋亡诱导配体肝癌基因治疗
