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王穗海
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- 所属机构:南方医科大学生物技术学院
- 所在地区:广东省 广州市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家高技术研究发展计划
相关作者
- 李明
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- 王穗海
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- 徐伟文马瑞娟王穗海李明
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- 目的探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1(VCC-1)基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果Western blot结果显示RNA干扰组(shVCC1-1组)细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01),MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组(P<0.05)。结论 siRNA靶向抑制VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。
- 牟霞陈瑶王穗海李明
- 关键词：肝癌SMMC7721细胞SIRNA
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- 李明王穗海黄湘李月董慧敏
- lncRNA UCA1靶向调控p21对黑色素瘤细胞增殖、侵袭的影响被引量：3
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- 目的探讨长链非编码RNA尿路上皮癌相关1(UCA1)在黑色素瘤组织和细胞中的表达及其介导的肿瘤细胞增殖和侵袭行为。方法采用实时荧光定量PCR检测UCA1在黑色素瘤组织和3种黑色素瘤细胞株(M21、B16、A375)中的表达情况;利用siRNA技术敲低M21、A375细胞UCA1的表达,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率;Real-time PCR和Western blot检测敲低M21、A375细胞UCA1表达后p21表达变化情况。结果 UCA1在黑色素瘤组织和黑色素瘤细胞株(M21、B16、A375)中表达明显高于正常皮肤色素痣组织和正常黑色素细胞HEM,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。将UCA1 siRNA(si-UCA1)分别转染至黑色素瘤细胞M21和A375,与对照组(si-NC)比较,si-UCA1组增殖活性明显降低,G_0/G_1期细胞比例明显升高,细胞凋亡率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。M21和A375细胞的si-UCA1组穿膜细胞数和迁移细胞数明显低于si-NC组(均P<0.01)。p21 mRNA在黑色素瘤组织表达明显低于正常皮肤色素痣组织,差异具有统计学意义(P<0.01);相关分析显示,黑色素瘤组织UCA1与p21 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.291,P<0.01)。敲低M21和A375细胞中UCA1表达明显升高p21 mRNA和蛋白表达水平,而转染p21 siRNA则显著降低由si-UCA1诱导的p21表达(均P<0.01)。结论长链非编码RNA UCA1在黑色素瘤中高表达,UCA1可能通过靶向调控p21参与黑色素瘤细胞的增殖和侵袭。
- 闫璐邱贤文王穗海魏姗姗黄东兰谭锐李鹏飞关志广
- 关键词：长链非编码RNA黑色素瘤增殖
- RNA干扰对乳腺癌细胞株MCF-7/Adr多药耐药性的逆转被引量：2
- 2005年
- 目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果该SiRNA能使耐药细胞株MCF-7/Adr的mdrlmRNA和Pgp表达水平分别显著下调(P<0.01),并使阿霉素对MCF7/Adr的IC50显著降低(P<0.01)。结论RNA干扰可逆转乳腺癌MCF7/Adr细胞株的多药耐药性。
- 曾爱华何蕴韶王穗海王伟毅钟女奇
- 关键词：RNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7多药耐药性乳腺癌耐药细胞
- 一种抗人蛋白RN181的单克隆抗体及杂交瘤细胞株3953与试剂盒
- 本发明公开了一种抗人蛋白RN181的单克隆抗体及杂交瘤细胞株3953与试剂盒。一种杂交瘤细胞株，其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.3953。一种抗人蛋白RN181的单克隆抗体，由上述杂交...
- 李明王穗海黄湘李月董慧敏
- FcεRⅠ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的通过基因重组的方法表达IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基,并用重组蛋白制备单克隆抗体。方法用RT-PCR的方法从过敏性疾病病人外周血嗜碱性粒细胞调取FcεRⅠα蛋白基因,经T-A克隆、亚克隆至pET28a(+)原核表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),IPTG诱导表达FcεRⅠα亚基蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白;并用其免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体,用细胞免疫荧光法对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功调取了人IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基的基因,且测序正确;构建原核表达质粒FcεRⅠα-pET28a(+);成功建立4株稳定分泌抗FcεRⅠα亚基的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为G101、C22、G113、G42。通过细胞免疫荧光实验证实,4株单克隆抗体均能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基。结论成功利用基因重组技术制备了FcεRⅠα亚基蛋白,制备了4株效价高、特异性好的抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体,为FcεRⅠα亚基及其抗体在过敏性疾病中的生物学功能研究奠定了基础。
- 宋晓妮王穗海曲焕王萍魏伟王文敬董文其
- 关键词：IGE单克隆抗体
- 降钙素原的克隆、表达及多抗制备被引量：2
- 2007年
- 目的合成降钙素原的全长基因,表达出降钙素原的融合蛋白并制备多抗,为降钙素原(PCT)的功能研究及单抗制备提供有力的实验基础。方法采用多引物人工一步合成基因技术合成降钙素原的全长基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1表达出重组蛋白,将初步纯化的蛋白免疫小鼠制备多抗并进行Western blot鉴定。结果成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,Western blot证实所制备的PCT多抗可与所获得的融合蛋白和病人血清发生特异性反应。结论成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,为明确降钙素原来源和病理生理作用的研究奠定了基础,以及为制备其单克隆抗体提供实验材料。
- 陈跃瑜吴英松徐伟文王穗海姜永玮彭娟李明
- 关键词：降钙素原融合蛋白克隆
- 沉默RNF181基因表达可促进结肠癌SW480细胞的生长被引量：9
- 2016年
- 目的 :研究沉默环指蛋白181(ring finger protein 181,RNF181)基因表达对结肠癌细胞SW480生长的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :采用慢病毒感染的方法将靶向沉默RNF181基因表达的重组慢病毒颗粒LV3-RNF181-KD转入人结肠癌SW480细胞中[以感染重组慢病毒颗粒LV3-negative control(NC)为阴性对照)]。病毒感染48 h后,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测SW480细胞中RNF181m RNA及蛋白的表达水平;CCK-8法和平板克隆法检测RNF 181基因沉默对SW480细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及其磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)表达的影响。结果 :实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,重组慢病毒颗粒LV3-RNF181-KD转入SW480细胞后,细胞中RNF181 m RNA和蛋白的表达水平均较阴性对照组(感染重组慢病毒颗粒LV3-NC的SW480细胞)明显下调,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。CCK-8及平板克隆实验证实,沉默RNF181基因表达后SW480细胞的增殖能力明显增强(P值均<0.01)。细胞中ERK蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05),而p-ERK蛋白的表达水平明显升高(P<0.01)。结论 :沉默RNF181基因的表达可增强人结肠癌细胞SW480的增殖能力,其机制可能与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activate protein kinase,MAPK)/ERK信号转导通路的活化有关。
- 牛文博王穗海李鹏王明清高彦君董宁宁何沛嵘石相宜李纪良
- 关键词：结肠肿瘤慢病毒感染细胞增殖
