李旭刚
作品数: 29被引量:301H指数:10
  • 所属机构:中国科学院遗传与发育生物学研究所
  • 所在地区:北京市
  • 研究方向:生物学
  • 发文基金:国家自然科学基金

相关作者

朱祯
作品数:270被引量:2,822H指数:33
供职机构:中国科学院遗传与发育生物学研究所
研究主题:抗虫基因 转基因 转基因植物 转基因植株 水稻
徐军望
作品数:23被引量:197H指数:9
供职机构:中国科学院遗传与发育生物学研究所
研究主题:核基质结合区 莽草酸 烯醇 转基因烟草 马铃薯X病毒
冯德江
作品数:18被引量:144H指数:8
供职机构:中国科学院遗传与发育生物学研究所
研究主题:马铃薯X病毒 植物转化 基因表达 病毒 外壳蛋白
常团结
作品数:32被引量:256H指数:9
供职机构:中国科学院
研究主题:基因表达 菊芋 植物基因工程 蛋白 基因烟草
肖桂芳
作品数:21被引量:368H指数:11
供职机构:中国科学院遗传与发育生物学研究所
研究主题:转基因烟草 抗虫基因 转基因植物 转基因 核基质结合区
有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化被引量:19
2003年
为了提高根农杆菌籼稻转化效率 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt分别置于紧密相连的 2个T -DNA上 ,构建载体 pCDMARUSCK -HPT ,电激法将表达载体转化农杆菌LBA4 40 4获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4 40 4的抑制效果 ,试验得出提门叮在 5 0 0mg/L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌 ,而且低浓度条件下 (2 5 0mg/L)就能有效地抑制工程菌LBA4 40 4 ,并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4 40 4菌液浓度OD值 0 8,浸染时间 5min为明恢 86合适的转化参数。在此基础上 ,采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢 86 ,获得转基因植株 12 7个克隆 ,转化效率 4 5 %。
曾千春李旭刚马炳田陈松彪徐鸿林孟昆魏晓丽朱祯
关键词:籼稻农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
核基质结合区的研究进展
李旭刚徐军望朱祯
核基质结合区(Matrix attachment region, MAR)是真核生物染色质中可以与核基质结合的一段DNA序列。它能使染色质形成环状结构,还可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录。在基因工程研究中发现,...
关键词:
关键词:核基质结合区MAR调控基因表达
水稻EPSP合酶第一内含子增强外源基因的表达被引量:14
2003年
分离并克隆了水稻5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的第一内含子(EPI)。序列分析表明,EPI长704bp,GC含量为36.2%。为进一步研究EPI序列在转基因植物中对外源基因表达水平的影响,将EPI序列插入CaMV35S启动子和报导基因β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(gus)之间。采用基因枪法转化烟草叶片,gus基因瞬时表达表明,EPI序列的存在可以使GUS的表达水平提高。利用农杆菌法转化烟草,获得了gus基因稳定表达的植株。GUS活性检测表明EPI内含子的存在可以显著提高GUS基因的表达(P<0.01)。Northern blot分析表明,在转录水平上gus基因在含EPI内含子的转基因植株中的表达高于不含EPIgus基因的表达,并且成熟的gus mRNA中EPI被正确剪取掉了,表明是一种非转译的内含子。GUS定量检测表明,EPI存在可以使GUS的平均表达水平提高3倍,最高单株可提高6倍。
徐军望冯德江宋贵生魏晓丽陈蕾伍晓丽李旭刚朱祯
关键词:水稻EPSP合酶第一内含子
豌豆核基质结合区的功能研究被引量:5
2000年
将豌豆基因组中分离的核基质结合区 (Matrixattachmentregions ,MARs)构建在植物表达载体的T DNA结构域中 ,使得报导基因 β 葡糖醛酸酶 (β glucuronidase ,GUS)基因位于两段MARs序列之间。将此载体与不包含MARs序列的植物表达载体经农杆菌介导转化烟草。GUS活性检测表明 ,MARs可以提高GUS基因的表达水平 ,和不包含MARs的转基因植株相比 ,MARs序列使GUS基因的平均表达水平提高 2倍。但在瞬时表达中 ,MARs对GUS基因的表达没有影响。
李旭刚吴茜朱祯肖桂芳
关键词:核基质结合区外源基因表达豌豆
烟草tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响被引量:1
2002年
烟草DNA结合蛋白TGA1a可特异地作用于CaMV35S增强子的激活序列as-1(-83~-63),并表现为转录激活功能.为了研究tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响,将它置于维管束特异性启动子rolC下游,并与CaMV35S启动子控制的报道基因串联成一种反式调控系统,构建了植物表达载体,同时,以CaMV35S和rolC分别控制的报道基因构建植物表达载体为阳性对照.通过农杆菌介导方法转化烟草和分子鉴定,证明报道基因存在于转化烟草基因组中,分别测定了不同转基因单株的GUS活性,结果表明:rolC控制下的tga1a的表达显著增强了CaMV35S控制下的报道基因表达,其GUS活性明显高于CaMV35S或rolC单独调控报道基因的转化植株,单株的最高GUS活性达到两个阳性对照的10倍以上.组织化学定位证实该串联系统使GUS蛋白主要集中在维管束组织.这一研究结果为提高外源基因在转基因植株中的表达水平和外源基因的组织特异性表达创立了一个新模式.
路子显常团结李旭刚徐军望李慧芬陈宛新冯德江肖桂芳朱祯
关键词:外源基因DNA结合蛋白植物转化报道基因植物基因工程
植物转基因失活及MAR功能研究 无选择标记转基因植物研究
李旭刚
关键词:植物基因工程基因失活转基因植物
Maize Transformation of cry1Ac3 Gene and Insect Resistance of Their Transgenic Plants被引量:9
2002年
The success for genetic transformation of maize (Zea mays L.) is highly related to genotype of target material. A few model varieties can be induced into type Ⅱ callus, which can be easily transformed with high regeneration frequency. However, most of cultivars could be only induced into type Ⅰ callus, which is difficult to be transformed with low regeneration. Thus, studying on the conditions of induction and transformation for type Ⅰ callus will show great importance for improving elite of maize directly with genetic engineering. Bacillus thuringiensis toxin protein (cry1Ac3) gene was successfully delivered into type Ⅰ calli of two elite inbred lines of maize, 340 and E28, via particle bombardment in this work. Fertile transgenic corn plants were obtained through phosphinothricin (PPT) or hygromycin B (HygB) selection, and the results of PCR, Southern blot assay and ELISA showed that foreign genes had been integrated into maize genome and expressed. In the meantime, strong resistance of some transgenic plants to corn borer was showed through bioassay. In addition, the comparison of selective effect between PPT and HygB showed that PPT, as a selective agent, was better than HygB for the growth and regeneration of resistant calli.
李慧芬李旭刚刘翔常团结肖桂芳朱祯
关键词:MAIZE
DNA甲基化对转基因表达的影响被引量:16
2001年
DNA甲基化在调节真核生物基因表达过程中起着十分重要的作用. 在植物转基因研究中, 外源DNA甲基化往往易导致外源目的基因失活. 利用农杆菌介导将?-葡糖醛酸酶基因(uidA)导入烟草, 发现外源uidA基因在部分转基因植株中发生了基因失活现象. Northern杂交实验证实, 基因失活的植株内检测不到外源uidA基因的转录产物, 同时伴随着基因上游启动子区域的DNA甲基化现象. 上述实验结果提示, 转基因失活很可能是由于启动子区域甲基化引起的.
李旭刚朱祯冯德江常团结刘翔
关键词:DNA甲基化基因失活基因工程基因表达植物分子生物学
水稻EPSP合酶基因的克隆、结构分析和定位被引量:6
2002年
5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶是芳香族氨基酸合成途径中的一个关键酶,该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值.根据水稻EPSP合酶基因的EST序列设计探针,在水稻TAC基因组文库中筛选到16个阳性克隆.对阳性克隆E11进行亚克隆,由此获得了由3661核苷酸组成的水稻EPSP合酶基因全序列.序列分析和同源性比较揭示,该基因由8个外显子和7个内含子组成.以窄叶青8号/京系17组合构建的DH群体和分子图谱将水稻EPSP合酶基因定位于水稻第6条染色体的上端.
徐军望冯德江李旭刚常团结朱祯
关键词:EPSP合酶基因分离DNA序列染色体定位
一种利用双T-DNA载体培育无选择标记转基因水稻的方法
本发明提供了一种生产无选择标记转基因水稻的方法,包括:构建选择标记基因和目的基因分别位于两个独立T-DNA结构域的带MAR序列单子叶植物表达载体;利用表达载体转化单子叶植物水稻;分子检测筛选双T-DNA发生共转移的转化植...
朱祯李旭刚
文献传递