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刘艳
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- 所属机构:中国食品药品检定研究院
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家高技术研究发展计划
相关作者
- 高尚先
- 作品数：108被引量：168H指数：6
- 供职机构：中国食品药品检定研究院
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- 国泰
- 作品数：51被引量：87H指数：5
- 供职机构：中国食品药品检定研究院
- 研究主题：轮状病毒 疫苗 轮状病毒疫苗 丙型肝炎 国家参考品
- 刘悦越
- 作品数：43被引量：62H指数：4
- 供职机构：中国食品药品检定研究院
- 研究主题：轮状病毒 疫苗 脊髓灰质炎 减毒活疫苗 脊髓灰质炎疫苗
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- 供职机构：中国食品药品检定研究院
- 研究主题：试剂盒 标记免疫分析 医疗器械 体外诊断试剂 国家标准品
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- 刘艳
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- 总甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒行业标准的制定
- 目的对总甲状腺素(TT4)定量标记免疫分析试剂盒行业标准的制定及实验室验证进行讨论。方法选择具有代表性的5家国内外厂家试剂盒对总甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒行业标准中规定的8个条款进行实验验证,并通过详细分析论证了行业...
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- 人丙氨酸转氨酶高效重组表达体系的构建
- 2014年
- 目的：构建人丙氨酸转氨酶（ ALT）高效重组表达体系，为ALT相关参考物质的原料制备奠定基础。方法利用生物信息学方法优化编码人ALT核苷酸序列中的密码子，合成人ALT新的基因，并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中。重组表达质粒pRSF-Duet-ALT转化大肠埃希菌BL21，以2 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导目的蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS-PAGE）及蛋白质免疫印迹（ Western blot）鉴定蛋白的性质，并对重组蛋白的活性、不同储存条件下在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的ALT核苷酸密码子在大肠埃希菌中的使用频率均在10％以上；经表达优化，在IPTG 终浓度为2 mmol/L、25℃、150 rpm振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率；纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷丙转氨酶，活性可达80000 U/L。重组ALT在2～8℃、25℃均可稳定2～8 d，相对偏差均在5％以内。结论通过密码子优化，成功构建了重组ALT的高效表达系统，本重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。
- 王玉梅徐超刘艳高尚先杨昭鹏
- 关键词：丙氨酸转氨酶重组蛋白质类密码子
- 柯萨奇病毒A组16型感染性滴度检测用国家参考品的制备及标定被引量：2
- 2016年
- 目的 制备柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）感染性滴度检测用国家参考品,为CA16疫苗生产过程中的病毒滴度控制和CA16疫苗的免疫效果评价提供国家参考品.方法 将验证合格的CA16（C1亚型）培养液分装（0.5 ml/支）制成候选参考品.3个独立实验室分别对候选参考品进行协作标定,用细胞培养法检测CA16感染性滴度,用Behrens-K（a）rber法计算半数细胞感染量（50％ cell culture infective does,CCID50）.同时,将CA16参考品分别置于-20、4、22～25（室温）和37℃条件下或反复冻融,进行热稳定性、长期稳定性和冻存稳定性研究.结果 制备的CA16参考品的病毒滴度为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.CA16参考品于-60℃保存12个月、-20℃保存6个月和4℃保存28 d后的病毒滴度无显著下降,表明稳定性较好;在22～25℃（室温）和37℃条件下,CA16参考品每天的病毒滴度损失率分别为3.4％和4.4％,而且分别保存27和21 d后病毒滴度无明显下降;对CA16参考品反复冻融的病毒滴度损失率为4.8％/次.结论 成功制备了CA16感染性滴度检测用候选国家参考品,将CA16参考品赋值确定为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.
- 杜加亮刘悦越于晓方张文艳贾双双刘艳赵岩国泰
- 关键词：肠道病毒属国家参考品
- 丙型肝炎病毒阳性血清体外感染人肝细胞的研究
- 2008年
- 目的研究丙型肝炎病毒（HCV）抗体（Ab）阴性，HCV—RNA阳性血清建立体外感染肝细胞模型。方法HCVAb阴性，HCV—RNA阳性的窗口期血清与人肝细胞共同培养，用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫荧光染色、Western blot、共聚焦显微镜和透射电镜等方法检测细胞内HCV核酸复制、蛋白质表达及超微结构改变。结果细胞与病毒共同培养7～45d，细胞内和／或培养上清中可间断检出HCV正、负链RNA；细胞浆内有HCV核心和NS3抗原的表达；细胞超微结构有改变，并于感染后第24天时观察到类似病毒样颗粒。结论窗口期血清中的HCV能在人肝细胞7701中复制一段时间。
- 刘艳祁自柏张贺秋李河民谷金莲于洋杨振陈坤
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 刘锐教授肾病舌脉合参经验及临床应用
- 舌脉合参是指在临床中将舌诊和脉诊采集到的客观病症资料，进行相互比照、分析，进而判断确定患者证候特点的诊断方法。它是中医四诊合参的组成部分，是中医四诊中最具客观化诊断的方法之一。刘锐教授认为，舌脉合参的基本方法是以传统的舌...
- 孙万森吴喜利王竹李睿萍刘艳谢君
- 关键词：肾病中医证候
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒核酸检测试剂国家参考品的制备
- 2014年
- 目的 制备丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）核酸检测试剂国家参考品。方法 收集我国不同地区的献血员血浆,用核酸筛查试剂筛查HCV RNA情况,并通过PCR法对人细小病毒B19进行定性测定,筛选阳性参考品、阴性参考品和最低检出限参考品。对HCV RNA阳性样本进行基因分型;3家实验室以WHO HCV RNA国际标准品为对照品,对参考品进行协同标定;并检测参考品的稳定性和适用性。结果 筛选出10份HCV阳性,而HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阳性参考品,其中有6份为1b型,1份为2a型,1份为3a型,1份为3b型,1份为6a型;10份HCV、HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阴性参考品;1份冻干的HCV RNA阳性,HBV、HIV、B19为阴性的样本作为最低检出限参考品,基因型为1b型。3个实验室经协作标定,阴性参考品的结果均为阴性,阳性参考品的HCV RNA浓度在104～105IU/ml之间,最低检出限参考品的HCV RNA浓度为6.18×106IU/ml。-20℃放置4周、4℃放置12 d、室温放置7 d以及反复冻融5次对参考品的HCV RNA含量无明显影响。参考品适用于目前国内市场上主要国产血液筛查和定量试剂的检测。结论 制备了HCV核酸检测试剂国家参考品,可用于HCV核酸诊断试剂的质量评价和控制。
- 刘悦越刘艳杜加亮范行良高加梅国泰
- 关键词：丙型肝炎病毒核酸参考品
- 甲型流感病毒抗原检测试剂盒质控参考品的研制被引量：1
- 2014年
- 目的研制甲型流感病毒抗原检测试剂盒质控参考品。方法收集甲型流感病毒阳性样本、乙型流感病毒阳性样本和非流感病毒样本,采用流感病毒抗原检测试剂盒方法对样本进行验证。通过协同标定参考品,确定最低检出限范围,3家单位进行适用性检测。反复冻融观察其稳定性。结果所用的16株病毒经3家单位联合检测,特异性良好,均为甲型流感病毒,检测结果符合率为100%;反复冻融5次后,稳定性良好。结论建立了第1套甲型流感病毒抗原检测试剂盒质控参考品及相应的质量标准。
- 范行良刘悦越陈天游刘艳邵铭赵慧王军志
- 关键词：甲型流感病毒抗原
- 肺炎衣原体IgG抗体检测试剂用国家参考品的制备和标定
- 2019年
- 目的:制备肺炎衣原体(Chlamydia pneumonia,CP)IgG抗体检测试剂的国家参考品。方法:利用国内外9个厂家ELISA试剂和免疫印迹法试剂对候选血浆样本进行筛选和确认,确定肺炎衣原体检测试剂国家参考盘。通过5家试剂生产厂家的协作标定最终确定国家参考品的质量标准,用一种试剂盒对确定的参考品盘的均匀性和稳定性进行全面考察。结果:参考品由10份支阴性参考品、10份阳性参考品、5份最低检测限参考品和1份重复性参考品组成。质量标准为:阴性参考品符合率至少为9/10;阳性参考品符合率至少为9/10;检出下限样本稀释度不低于1∶4;连续检测重复性参考品10次,其A值的RSD不高于10. 0%。该参考盘均匀性较好,-20℃长期保存稳定性较好,37℃保存影响其稳定性。结论:建立一套适用于ELISA方法的肺炎衣原体IgG抗体检测试剂用国家参考品,可用于该类试剂盒的质量评价。
- 刘艳周海卫沈舒田亚宾白东亭王玉梅张春涛
- 关键词：肺炎衣原体IGG抗体诊断试剂国家参考品酶联免疫分析法
- 人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品的制备被引量：3
- 2014年
- 目的 制备人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品。方法 培养人脲原体两大生物群14个标准血清型菌株,培养液灭活后经颜色改变单位（color change unit,CCU）法与PCR相结合的方法进行定值,组成能覆盖脲原体所有表型及基因型的14份阳性参考品P1-P14（浓度为106CCU/ml）及14份检测限参考品L1-L14（浓度为104CCU/ml）;选择6份能排除脲原体核酸检测试剂盒非特异性或交叉反应的样品组成阴性参考品N1-N6;选择生物群1的微小脲原体（ureaplasma parvum,UP）1和UP14作为重复性参考品R1、R2（浓度分别为105和104CCU/ml）。用5家公司生产的脲原体核酸检测试剂盒对参考品进行验证,确定准确性、特异性、检测限、重复性、稀释线性的性能指标;并考察参考品在不同条件下（2～8℃放置7 d,37℃放置3、7、12 d,-20℃及常温反复冻融5次）的稳定性。结果 支原体各培养液经CCU法测定,浓度均在106～107CCU/ml之间,以CCU法测定浓度为靶值,绝对偏差均在依0.5个数量级以内。4家公司生产的不同试剂盒检测参考品,在准确性、特异性、检测限及重复性上均符合要求;在稀释线性上,最低稀释浓度为102CCU/ml的样品只有2家可以检出,其他几家的稀释线性相关系数以103～1064个浓度计算,r值均〉0.990 0;1家（RNA检测）检测R2的重复性,CV为5.5%。经不同条件处理的参考品的稳定性有轻微变化,但均处于设定的可接受范围内。结论 制备了人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品,该参考品可满足人脲原体核酸分型、定性及定量检测要求,经多家实验室进行验证,可用于国内大多数试剂盒的性能评价及临床实验室质量评价。
- 王玉梅李尔华曾灵风刘艳高尚先
- 关键词：脲原体血清型核酸试剂盒参考品
