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蒋大伟
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- 所属机构:河南农业大学
- 所在地区:河南省 郑州市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家自然科学基金
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- 为使鸡源志贺氏菌IpaC蛋白保持天然的生物学活性,在毕赤酵母表达系统中实现分泌表达,进一步研究IpaC蛋白的生物学功能,本研究在不改变IpaC蛋白氨基酸序列的情况下,根据酵母密码子偏爱性优化合成IpaC#基因,利用真核表达载体p GAPZA和8种真核信号肽,分别构建真核表达载体pGAPZA-Inu/Inv/Kil/Lys/Mat/Amy/Glu/Ser-IpaC#,然后将线性化的重组质粒电转化至毕赤酵母X-33中,对阳性转化子进行表达,并用SDS-PAGE及Western-blot检测其表达产物。结果表明:在8种重组菌表达产物的菌体沉淀中检测到大小约为60 ku的目的蛋白。说明鸡源志贺氏菌IpaC基因成功实现了在毕赤酵母的胞内表达。
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- 鸡源志贺菌IpaC基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
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- 为使IpaC基因表达产物保持天然的生物学活性,实现在酵母表达系统中高效表达,本研究在不改变IpaC蛋白氨基酸序列的情况下,根据酵母密码子偏爱性优化合成IpaC#基因,分别构建真核表达载体pGAPZαA-IpaC和pGAPZαA-IpaC#,然后将线性化重组质粒电转化至毕赤酵母X-33中,对阳性转化子用SDS-PAGE及Westernblot检测其表达产物。结果表明,经SDS-PAGE及Westernblot检测,仅在pGAPZαA-IpaC#/X-33重组菌表达产物菌体沉淀中检测到大小为70ku的目的蛋白,实现了鸡源志贺菌IpaC#基因在毕赤酵母中的胞内表达,从而验证毕赤酵母表达系统与外源基因序列的相关性,为进一步提高鸡源志贺菌IpaC基因在毕赤酵母中的高效表达提供科学依据,对研究该病的发病机制具有重要意义。
- 韩志霞马金玉王雪云蒋大伟刘芳许兰菊李克宇
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- 河南省鸡志贺氏菌病和鸡白痢的血清流行病学调查被引量：15
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- 为了解腹泻病鸡群中鸡志贺氏菌病和鸡白痢的发生情况，利用鸡鲍氏型、鸡痢疾型志贺氏菌凝集抗原和鸡白痢鸡伤寒多价抗原对河南省6个县市52家鸡场的鸡血清进行血清抗体检测。结果显示：鸡鲍氏型、痢疾型志贺氏菌血清抗体阳性率分别为31．5％和14．6％，鸡白痢为3．2％。所有县市的鸡鲍氏型志贺氏菌血清抗体阳性，4／5的县市鸡痢疾型和鸡白痢血清抗体阳性；78．8％的鸡场为鲍氏型血清抗体阳性，61．2％的鸡场为痢疾型血清抗体阳性，24．4％鸡场为鸡白痢血清抗体阳性。不同鸡群中，鸡鲍氏型血清抗体阳性率为4．4％～85．7％，鸡痢疾型为0．0～60．0％，鸡白痢为0．0～30．0％。不同品种鸡中，罗曼鸡鲍氏型、痢疾型血清抗体阳性率都较高，其次为固始鸡。不同日龄中，22～28日龄鸡的血清抗体阳性率最高，鸡鲍氏型为68．8％，鸡痢疾型为27．1％，而鸡白痢仅为6．5％。混合感染中，鸡鲍氏型和痢疾型混合感染占待检血清总数的10．1％。
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