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范开
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- 所属机构:重庆理工大学药学与生物工程学院
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家科技重大专项
相关作者
- 罗岚
- 作品数：8被引量：15H指数：3
- 供职机构：重庆理工大学药学与生物工程学院
- 研究主题：生物活性 TRAIL 体内外 FC 抗病毒活性
- 黄程
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- 供职机构：重庆理工大学
- 研究主题：毕赤酵母 产业结构升级 活性 可逆转 水蛭素
- 蔡晓娜
- 作品数：5被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆理工大学药学与生物工程学院
- 研究主题：类似物 SP-B Α螺旋 疏水性 促胰岛素分泌
- 刘立平
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- 贺晓强
- 作品数：4被引量：5H指数：2
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- 研究主题：促胰岛素分泌 类似物 聚乙二醇化 修饰 聚乙二醇
- 地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究被引量：2
- 2014年
- 重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善微循环，是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物，
- 蔡晓娜王鹏贺晓强刘立平陈海容郭晋霞范开
- 关键词：嵌合蛋白水蛭肽地高辛标记探针检测宿主
- RP-HPLC法测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的方法被引量：4
- 2010年
- 建立一种快速、稳定、灵敏度高的测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的高效液相色谱方法。将血浆样品与尿酸反应5 min,加入高氯酸终止,经高速离心,取上清液20μL检测。色谱柱采用Waters symmetry C18(4.6×250 mm,5μm),流动相为磷酸-甲醇-超纯水(3∶10∶487),流速1.0 mL/min,检测波长293 nm。通过体系中尿酸的降低值间接测定血浆中聚乙二醇尿酸酶的浓度。结果表明,聚乙二醇尿酸酶在31.25 ng/mL^20μg/mL范围内呈线性关系,r=0.999 4,日内、日间精密度均小于10%,回收率在88%~105%。
- 范开马雪丰谢敏胡春兰谭克海
- 大肠杆菌中可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21及制备被引量：1
- 2011年
- 为在大肠杆菌中高效、非融合、可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF-21),研究了纯化方法,以获得具有较高生物活性的rhFGF-21。全基因合成人成纤维细胞生长因子21cDNA序列,克隆进原核表达载体pET-3c,在转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行表达。表达产物经盐析、层析等方法纯化后,利用3T3-L1细胞鉴定其促葡萄糖摄取的生物学活性。结果表明:rhFGF-21在BL21(DE3)PlysS实现了高效、非融合、可溶性表达,目的蛋白占菌体总蛋白的20%左右;表达产物经纯化后,纯度可达95%以上;表达产物能够明显促进3T3-L1细胞对葡萄糖的吸收。该方法成功实现了rhFGF-21在大肠杆菌中高效可溶性表达。
- 范开谭克海张淳张益
- 关键词：可溶性表达葡萄糖摄取
- 聚乙二醇化重组集成α干扰素在食蟹猴长期毒性中结合抗体和中和抗体的活性
- 2010年
- 研究了食蟹猴皮下注射聚乙二醇化重组集成α干扰素(代号PEG-SA)低、中、高剂量(10,30,90μg/kg及对照组)1次/7 d,共180 d后血清中第15,29,43,57,71,92,113,134,162,180 d及停药后30 d的结合抗体及中和抗体滴度。结合抗体测定采用的是间接ELISA法,中和抗体测定采用的是细胞病变抑制法。结合抗体滴度以OD值大于阴性对照组OD值2.1倍为阳性。中和抗体活性的产生以保护50%细胞免受病毒侵犯为判断依据,即50%细胞病变表明产生中和抗体。结果表明,两者活性均在57 d到达高峰,停药后结合抗体和中和抗体活性减弱或消失,中高剂量组抗体活性高于同时段低剂量组活性。PEG-SA皮下注射后,可诱导食蟹猴产生结合抗体及中和抗体,二者活性具有剂量相关性。
- 范开杨华君罗岚
- 关键词：ELISA食蟹猴中和抗体
- 重组赖氨酸内肽酶构建表达及活性方法研究被引量：1
- 2015年
- 设计了重组赖氨酸内肽酶蛋白氨基酸序列,根据P.Pastoris酵母密码子偏爱性原则设计c DNA序列,其中TGA和TAA为两个终止密码子序列,并在序列5’端和3’端分别设计Xho I(CTCGAG)和Not I(GCGGCCGC)限制性酶切位点,将其重组到原核表达质粒p MD19-T中,得到p MD19-T-Lys-C,并在毕赤酵母中获得表达。应用SDS-PAGE电泳及免疫斑点法检测其表达,RP-HPLC分析重组赖氨酸内肽酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的氨基酸残基,证明该重组的赖氨酸内肽酶可替代Lysyl Endopeptidase应用于胰岛素的制备工艺中。
- 马妍付志成范开
- 关键词：基因重组胰岛素原活性
- 短C肽门冬胰岛素制备工艺的研究
- 2015年
- 为研究门冬胰岛素制备工艺,参照毕赤酵母偏好密码子,设计合成N-端连接引导肽EEAEAEAEPK,以KEWK作为短C肽,A、B链结构完整的门冬胰岛素c DNA序列。利用Xho I-Not I酶切位点将其插入表达质粒p PICZαA,采用电转移方法将重组质粒转入毕赤酵母x-33,筛选高拷贝重组子作为工程菌株进行高密度发酵,表达量可达到0.57 g/L。发酵液经金属螯合层析和SP阳离子层析纯化后鉴定正确。建立CPB/Trypsin双酶切工艺,对不同温度及p H条件下产生的酶切产物进行分析,初步建立了酶切最佳p H值和温度条件。酶切产物经纯化后制得纯度为91.7%的门冬胰岛素,副产物为B链30位缺失的门冬胰岛素。该设计方法为含短C肽EWK门冬胰岛素制备中选用Lys-c酶切成本过高的问题提供了备选解决方案。
- 付志成马妍张增涛刘日勇何勇范开
- 关键词：门冬胰岛素毕赤酵母纯化
- 重组人β干扰素-1b的融合表达及制备被引量：1
- 2010年
- 通过融合表达获得无需复性的重组人β干扰素-1b(17Ser-β-IFN)。运用PCR方法扩增带有EK(肠激酶)蛋白酶酶切位点的人β干扰素-1b基因,构建重组表达载体pET32-a-EK-β-IFN-1b,通过工程菌(pET32-a-EK-β-IFN-1b/Qrigami DE3)表达融合蛋白TRX-β-IFN-1b。经纯化的融合蛋白,在一定的酶切条件下用EK酶酶切后,通过反相C18柱纯化获得高纯度的重组人β-IFN-1b,再经细胞病变抑制法测定其抗病毒比活性。结果表明,TRX-β-IFN-1b融合蛋白表达量达到菌体总蛋白的30%以上,EK酶酶切效率不低于90%。制备的重组人β-IFN-1b的质谱分子量与理论值一致,抗病毒活性比国内外报道的相同蛋白高出2倍以上,达到4.5×107IU/mg。通过融合表达制备的重组人β-IFN-1b具有治疗多发性硬化症或肝炎的临床价值。
- 刘日勇罗岚范开
- 关键词：Β干扰素肠激酶抗病毒活性
- IGF-1基因产物的结构和功能多样化被引量：6
- 2008年
- 胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因包含6个外显子,具有转录和翻译产物多样化的特点,原因在于存在多个转录起始位点的选择性应用,转录产物的选择性剪接,以及不同多聚腺苷酸化位点的使用。长期以来人们普遍关注由外显子3和4编码的循环型IGF-1在生长发育中的作用,最近对肌肉、神经等组织自分泌/旁分泌的局部型IGF-1研究发现,选择性剪接产生的IGF-1变体具有外显子5和6编码的延伸肽(E肽),并表现出特殊的生物学功能,如IGF-1Ea、IGF-1Eb(MGF)及其E肽在骨骼肌、心肌、神经等组织中表现出促进生长和损伤修复的功能,这些特殊功能可能通过细胞表面的一种特殊E肽受体介导。
- 张兵兵王远亮范开
- 关键词：胰岛素样生长因子-1选择性剪接
- 重组人角质细胞生长因子Ⅰ型缺失突变体二硫键配对与生物活性被引量：5
- 2010年
- 研究了大肠杆菌表达的重组Ⅰ型人角质细胞生长因子缺失突变体(△23KGF-Ⅰ)二硫键的配对形式及生物活性。结果表明,重组大肠杆菌可溶性表达的△23KGF-Ⅰ中Cys40,Cys102和Cys106三个游离半胱氨酸间无二硫键形成,经铜离子处理形成Cys102-Cys106配对的二硫键,且经体内外活性研究,发现含二硫键配对的△23KGF-Ⅰ比不含二硫键形式的活性分别高40%和70%左右。
- 张增涛陈清罗岚曹宇范开
- 关键词：二硫键生物活性
- 促胰岛素分泌肽的聚乙二醇化修饰和体内外生物活性研究被引量：3
- 2011年
- 通过基于Byetta结构的促胰岛素分泌肽类似物的PEG修饰和筛选,以期获得一种长效促胰岛素分泌肽修饰物。利用化学合成的方法获得C末端突变成半胱氨酸的Byetta类似物(Ex4C),再用不同分子质量大小的马来酰亚胺活化的mPEG(MAL-mPEG)对其半胱氨酸的游离巯基进行定点修饰,修饰后产物用阴离子交换色谱和反相色谱进行纯化。通过测定其体外刺激RINm5F细胞释放cAMP的水平,以及体内对STZ模型小鼠的降血糖作用来评价其生物活性。MAL-mPEG化的促胰岛素分泌肽的SDS-PAGE及RP-HPLC纯度均达98%以上,且修饰位点专一;促胰岛素分泌肽经5 k、20 k、35 k分子质量大小的mPEG修饰后体外刺激RINm5F细胞释放cAMP的ED50分别为1.61 ng/mL、15.68 ng/mL、32.95 ng/mL;3种修饰物在相同剂量(40μg/kg)皮下给药对正常小鼠和STZ模型小鼠体内均有明显的降血糖作用,维持降血糖时间分别达24 h、48 h和72 h。
- 陈清范开王琳罗岚张淳
- 关键词：PEG修饰生物活性
