搜索到2815篇“ M2亚型“的相关文章
- H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究
- 2024年
- 【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡的临床特征,采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品;感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化,收集气管灌洗液、气管和肺脏组织;通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量;应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律,通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性;通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征,但感染后1~5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸,且感染3 d后病毒载量最高,感染5 d后检测不到病毒核酸;感染5 d时,在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸,其中前两者载量高于肺脏;血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多,感染后5~9 d维持较高水平,且具有较强的病毒中和活性;血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势;但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低,且感染前后无明显变化。【结论】本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型,确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位,H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子,可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。
- 池周颖李天旭吴亚鑫瞿孝云李思婕孙敏华张建峰廖明杜寿文
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒呼吸道感染免疫应答
- 一株H9N2亚型禽流感病毒抗原变异株产生原因的分析
- 2024年
- 目前,H9N2亚型禽流感病毒是我国最主要的低致病性禽流感病毒,造成禽养殖业的严重经济损失。H9N2禽流感病毒灭活疫苗是防控该疫病的最有效方式,然而,H9N2病毒在免疫压力下容易产生抗原变异,导致疫苗免疫失败,其机制尚不清楚。在前期研究中,我们通过模拟H9N2禽流感免疫压力筛选出携带HA_(D201N)单点突变的逃逸株,但HA_(D201N)如何导致H9N2病毒逃逸株出现的原因尚不明确。为此,本研究利用8质粒反向遗传技术方法拯救出1株A/Chicken/Shanghai/1/2006(H9N2)(简称SH1)及其免疫逃逸株rSH1-HA_(D201N)。为了鉴定HA_(D201N)是否通过影响H9N2禽流感病毒复制能力而导致病毒发生免疫逃逸,用0.001 MOI的病毒接种MDCK并测定其生长曲线,结果表明HA_(D201N)点突变可显著降低rSH1病毒的复制能力,且病毒复制能力的变化不是rSH1病毒发生逃逸的主要原因。为了研究HA_(D201N)是否通过影响H9N2病毒抗原变异而产生病毒逃逸株,将原毒株与突变毒株加入佐剂后免疫鸡以制备多克隆抗体血清,利用交叉HI试验,计算R值并分析抗原变异,结果表明rSH1与rSH1-HA_(D201N)的R值为2,说明HA_(D201N)会导致rSH1发生显著的抗原变异,从而使病毒在免疫压力下逃逸。本研究为探索H9N2禽流感病毒抗原变异规律及其疫苗研发奠定了基础。
- 乔淑媛滕巧泱李雪松刘芹防张志飞王思琪李泽君杨健美王彩云
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒反向遗传技术点突变免疫逃逸
- 2019-2021年安徽省外环境H9N2亚型禽流感病毒分子进化分析
- 2024年
- 目的分析安徽省2019—2021年外环境监测中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化特征。方法选取禽流感外环境病原学监测H9N2亚型禽流感病毒阳性样本383份,使用鸡胚分离培养收获21株病毒,采用实时荧光定量PCR方法扩增后进行全基因组测序,用生物信息学软件构建基因进化树分析其遗传进化特征。结果21株H9N2亚型禽流感病毒均为G57基因型,血凝素(HA)基因片段属于JN/99基因型,神经氨酸酶(NA)基因属于G9基因型,基质蛋白(MP)基因属于G1基因型,内部核蛋白(NP)、非结构蛋白(NS)、酸性聚合酶蛋白(PA)、碱性聚合酶蛋白1(PB1)基因属于F/98基因型,碱性聚合酶蛋白2(PB2)基因片段属于ST/7488基因型毒株。HA裂解位点显示低致病性分子特征,存在重要氨基酸位点突变,HA蛋白发生了Q226L、H183N、T189D、A190T氨基酸突变;NA蛋白茎部均发生了62~64位点缺失;大部分毒株未发生PB2-E627K突变,所有毒株均未发生D701N突变;所有毒株PA蛋白具有356R和409N氨基酸突变,M2蛋白均发生S31N氨基酸突变。结论2019—2021年安徽省外环境分离得到的H9N2亚型禽流感病毒为多源重配病毒,且具有逐渐适应哺乳动物宿主相关的分子特征,需密切关注病毒的病原学演化。
- 黄鑫儿周雪杨思天胡敏昊俞峻岭罗婉蓉方惟希何军
- 关键词：H9N2亚型禽流感分子特征
- 空心莲子草乙酸乙酯部位体内外抗H9N2亚型禽流感病毒活性的研究
- 2024年
- [目的]探究空心莲子草乙酸乙酯部位(ethyl acetate extract from Alternanthera philoxeroides,AETAC)体内外抗H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype Avian influenza virus, AIV-H9N2)活性及其作用机制。[方法]利用CCK-8法检测不同浓度AETAC作用不同时间对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的抑制作用,通过预防感染、影响复制、阻止吸附及直接杀灭4种方式作用后检测AETAC对DF-1细胞的毒性,选择体外最佳抗AIV-H9N2作用方式。尿囊腔接种不同浓度AETAC确定其对鸡胚的最大安全浓度;将AETAC以3种不同给药方式作用于AIV-H9N2感染后鸡胚,选择体内最佳给药方式。经尿囊腔同时接种AETAC和AIV-H9N2,统计各组鸡胚存活数,测定血凝效价,并观察胚胎的发育情况和鸡胚法氏囊病理组织变化。[结果]在一定范围内,随着AETAC浓度升高或作用时间延长,AETAC对DF-1细胞的抑制率升高。与空白对照组相比,4种抗AIV-H9N2作用方式下,病毒对照组和药物组细胞存活率均显著降低(P<0.05);与病毒对照组相比,AETAC浓度为5~30μg/mL时,4种抗AIV-H9N2作用方式下,药物组细胞存活率均显著升高(P<0.05)。4种作用方式下,DF-1细胞存活率分别为8.15%~64.96%(预防感染)、8.56%~83.83%(影响复制)、1.82%~5.90%(阻止吸附)和6.90%~40.12%(直接杀灭)。AETAC对鸡胚的最大安全浓度为16.41 mg/mL,对感染鸡胚的最佳给药方式为AETAC和病毒混合后接种。以最佳体内作用方式给药后,AETAC中、低浓度组鸡胚存活率为40%~60%,高浓度组鸡胚全部存活,胚胎喙部发育明显,鸡胚法氏囊淋巴滤泡发育完整,滤泡大小和数量正常,充血量少,组织病理状态改善。[结论]AETAC在体内外对AIV-H9N2均具有显著的抑制作用,且主要与影响病毒复制作用方式相关。
- 廖思雨郑新戴琪许诗怡张天旭张秀桥桂春
- 共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价
- 2024年
- 旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。
- 吕亚迪杨洁谢文婷徐婷陈瑞爱
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白载体疫苗
- H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒的构建
- 2024年
- 为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Western-blot鉴定重组蛋白的免疫活性,再将rBV-HA-M1和rBV-NA以最佳感染复数比例共感染昆虫Sf9细胞,经浓缩后获得病毒样颗粒,同时进行血凝滴度测定和透射电镜观察。透射电镜观察结果显示,表达的HA-M1和NA重组蛋白可以在Sf9细胞中自组装形成病毒样颗粒,浓缩的病毒样颗粒能够凝集1%的鸡红细胞,血凝效价为1∶64。试验结果为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒疫苗奠定了基础。
- 王粲张民秀谢芝勋李孟罗思思李丹阮志华谢丽基谢志勤
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型病毒样颗粒
- H9N2亚型AIV NP蛋白的原核表达及其免疫效果
- 2024年
- 旨在探讨H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)NP蛋白对小鼠的免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。试验将H9N2亚型病毒NP基因的扩增产物连接到pET-32a表达载体中,构建重组质粒pET-32a-NP,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞,IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达,用NP重组蛋白免疫小鼠,测定小鼠血清中IgG抗体和脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示:NP基因编码区序列全长1497 bp,NP重组蛋白以可溶性和不可溶性蛋白两种形式存在,Western blot结果可见特异性条带。免疫小鼠后血清产生IgG结合抗体,抗体效价为1∶40000,与对照组相比,IL-2、IL-5、IL-13分泌量极显著提高(P<0.001),IL-6分泌量显著提高。IL-4和IL-12 p70分泌量与对照组相比升高,却没有显著性差异。而免疫组与对照组相比IL-1β、IL-18、G{2}-C{2}F、TNF-α、IFN-γ分泌量被抑制,但差异不显著(P>0.05)。结果表明,NP重组蛋白是一种良好的免疫原,为流感疫苗的深入研究奠定了基础。
- 李小凤谢芝勋阮志华李孟李丹张民秀谢志勤罗思思韦悠谢丽基曾婷婷张艳芳黄娇玲王盛
- 关键词：H9N2亚型禽流感NP蛋白原核表达细胞因子
- 广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选
- 2024年
- 【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。
- 李孟谢芝勋李丹徐倩罗思思张民秀谢丽基黄超沈前程黄娇玲
- 关键词：H9N2亚型油乳灭活疫苗
- 6株H9N2亚型禽流感病毒分子特征及遗传演化分析
- 2024年
- 为了解H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的分子变化特征及其跨物种传播的可能性,对实验室保存的6株H9N2亚型AIV的8个基因片段进行了序列测定及遗传演化分析,并且对6株病毒与选取的代表毒株进行了HA和NA同源性及关键氨基酸位点分析。结果显示,分离的6株病毒均为欧亚系,其中3株为G57基因型;4株病毒的HA蛋白发生了Q226L突变,2株病毒的HA发生了A190V突变。HA和NA均有增加或缺失的潜在糖基化位点。6株病毒的NA茎部均有62~64位的缺失,红细胞结合位点431~433较为保守,而368和369位变化较大。综上,6株病毒为低致病性AIV,HA和NA均含有哺乳动物适应性突变,增大了其跨宿主传播的风险。研究结果为我国H9N2亚型AIV的进化提供了参考依据,为其综合防控提供了理论指导。
- 邢燕茹祝宇翔范春燕于海汪秀会
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型分子特征遗传进化
- 2020-2022年山东地区H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析
- 2024年
- 为了解山东省H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)流行及遗传变异情况,采用H9亚型AIV荧光定量RT-PCR方法对采集自山东部分地区有呼吸道症状养鸡场的492份鸡气管和肺脏组织样品进行检测,并对检测出的阳性样品进行鸡胚接种,利用Illumina {2}iseq测序平台将分离株进行全基因组测序,并构建了进化树,分析了与流感病毒传播能力及致病性相关的关键氨基酸位点的特征。结果显示,492份样品中有72份为H9亚型AIV阳性,阳性率14.63%,阳性样品经鸡胚传代后获得34株H9亚型AIV,通过全基因组测序后分析可得34株分离株均为H9N2亚型AIV。通过HA和NA基因进化树分析,34株分离株HA基因均属于Y280-like分支,NA基因均属于F/98-like分支,在此分支基础上,均存在明显的时间节点小分支,一支为“2013年以前分离株”分支,一支为“2013年以后分离株”分支。分离株HA裂解位点均为^(325)PSRSSR↓GLF^(333),符合低致病性AIV特征,所有病毒均发生了Q226L具有结合哺乳动物α-2,6受体的能力的氨基酸位点突变。内部基因哺乳动物适应性关键氨基酸位点中,所有病毒PB1蛋白发生了I^(368)V增强病毒在哺乳动物传播能力的氨基酸位点突变,部分毒株PB2蛋白发生I292V和A588V哺乳动物适应性增强的氨基酸位点突变。结果表明,山东省H9N2亚型AIV各基因节段存在不同程度的重组和基因变异情况,需加强病毒变异监测。
- 薛瑞雪孙海峰邢林林姜子昕李玉杰陈峰蔺晓月兰邹然张月王贵升
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型遗传进化分析
