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全氟辛烷磺酸及其替代品对BeWo细胞糖皮质激素和营养物质转运功能的影响及机制研究
目的:全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonic acid,PFOS)及其替代品F-53B作为新兴的持久性有机污染物,可对胎儿的生长发育造成危害,但其机制尚未阐明。本研究旨在阐明PFOS及其替代品暴露...
张琪
关键词:BEWO细胞糖皮质激素人绒毛膜促性腺激素
滨蒿内酯在BeWo细胞模型上的摄取转运特性分析
2021年
目的研究茵陈活性成分滨蒿内酯在BeWo细胞模型上的跨胎盘摄取转运特性。方法建立滨蒿内酯及内标物质双氯芬酸钠在细胞裂解液、Hank’s平衡盐溶液(HBSS)中的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,并进行了方法学验证;MTT法考察滨蒿内酯(1、5、20、50、100、200、400、800、1000μmol/L)作用4 h对BeWo细胞活性的影响;应用建立的UPLC-MS/MS法考察给药时间、药物浓度、温度、pH值、转运蛋白抑制剂对BeWo细胞摄取滨蒿内酯的影响;以BeWo单层细胞为体外模型,应用Transwell孔板,考察给药时间、药物浓度、转运蛋白抑制剂对滨蒿内酯的跨胎盘转运的影响。结果建立的UPLC-MS/MS分析方法专属性强,灵敏度高,重现性好,提取回收率、基质效应和样品稳定性等均符合生物样品药物含量的分析测定要求。滨蒿内酯在浓度为1~800μmol/L时对BeWo细胞无明显毒性作用。滨蒿内酯在BeWo细胞上的摄取随时间和浓度变化呈线性增加,在所选取的浓度范围内无饱和趋势,不符合米氏方程;滨蒿内酯在BeWo细胞上的摄取量在4℃和37℃条件无显著性差异,表明摄取转运过程不受温度的影响;与生理条件下(pH 7.4)比较,在酸性条件下(pH 5.0或6.5),摄取量略有降低,无显著性差异;碱性条件下(pH 8.6),摄取量显著减少(P<0.001);滨蒿内酯在细胞膜刷状缘侧的摄取不受各类膜转运蛋白底物或抑制剂的影响。滨蒿内酯在BeWo细胞上的2个方向的转运速率无显著差异;二者表观渗透系数(Papp)值极为接近,药物外排率(Pratio)约为1;在考察的浓度范围(5、50、100、200、400μmol/L)内,滨蒿内酯在母-胎和胎-母2个方向上转运均呈线性增加,且无饱和趋势;滨蒿内酯在BeWo单层细胞的转运不受各类膜转运蛋白底物或抑制剂的影响。结论滨蒿内酯在BeWo细胞上的摄取及跨膜转运机制为非载体蛋白介导的被动转运。
曹慧敏董迎狄留庆狄留庆
关键词:滨蒿内酯BEWO细胞胎盘屏障被动转运
人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达被引量:1
2021年
背景:近年来间充质干细胞已是新药开发领域的研究热点,其旁分泌效应也已应用于多种组织损伤性细胞模型修复评估实验,但目前尚无研究探索其条件培养液是否对缺氧状态下人胎盘滋养层系细胞的紧密连接功能具有修复作用。目的:探讨人胎盘源间充质干细胞条件培养液对缺氧条件下人胎盘绒毛膜癌滋养层系BeWo细胞活力和紧密连接因子表达的影响。方法:采用1000μmol/L氯化钴处理12 h诱导BeWo细胞以构建胎盘屏障缺氧模型,检测细胞活力以及缺氧诱导因子1α和紧密连接因子闭合小环蛋白1、封闭蛋白4、封闭蛋白8的表达量变化;在缺氧模型中添加人胎盘源间充质干细胞条件培养液建立缺氧干预组、复氧修复组,检测细胞活力和上述4个基因的表达量改变;为探讨人胎盘源间充质干细胞条件培养液改变闭合小环蛋白1表达量的潜在机制,建立胰岛素样生长因子1缺氧干预组、胰岛素样生长因子1处理组,检测BeWo细胞活力以及闭合小环蛋白1表达量。结果与结论:①氯化钴诱导缺氧显著下调BeWo细胞活力,上调缺氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达,下调闭合小环蛋白1和封闭蛋白4 mRNA和蛋白表达,上调封闭蛋白8 mRNA表达,但其蛋白表达下降;②人胎盘源间充质干细胞条件培养液明显提升缺氧条件下BeWo细胞活力和闭合小环蛋白1的表达,下调缺氧诱导因子1α的表达,但对封闭蛋白4无作用;③胰岛素样生长因子1干预缓解了缺氧对BeWo细胞活力的抑制作用,并上调闭合小环蛋白1的表达。
林清凡解一新陈婉清叶振忠陈幼芳
关键词:干细胞条件培养液氯化钴缺氧BEWO细胞
单核细胞增生李斯特菌感染对Bewo细胞炎症因子及迁移能力的影响被引量:1
2020年
目的研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染致Bewo细胞炎症因子表达及迁移能力的变化,并探讨其可能的机制。方法Lm以MOI=10感染Bewo细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bewo细胞炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平;划痕试验及Transwell试验检测Bewo细胞的迁移能力;Western Blot检测Bewo细胞迁移相关蛋白(MMP2,MMP9,TIMP-1)以及MAPK家族蛋白(p-p38MAPK,p38MAPK,p-ERK1/2,ERK1/2)的表达水平。结果Lm感染Bewo细胞后炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平与感染1 h相比均升高。Western Blot结果表明,随着感染时间的延长,迁移相关蛋白MMP2逐渐升高;MMP9和TIMP-1变化趋势一致,先上升后下降;Lm感染致MAPK家族p38MAPK及ERK1/2蛋白磷酸化水平升高。结论Lm感染Bewo细胞后导致细胞迁移能力增强,MMP2在调控细胞迁移能力的变化中起主要作用,Lm感染可以激活Bewo细胞MAPK家族p38MAPK及ERK1/2信号通路。
朱昱蓉史倩卢叶凌薇袁琳杨诗娴王蓓蕾姜旭淦陈盛霞
关键词:单核细胞增生李斯特菌BEWO细胞
TBBPA及其衍生物对BeWo细胞活性和类固醇激素分泌的影响
目的:  本研究旨在探讨新兴污染物TBBPA及其衍生物TBBPA-BHEE、TBBPA-BGE、TBBPA-BAE和TBBPA-BDBPE对人胎盘BeWo细胞增殖活性的影响,并检测TBBPA和TBBPA-BHEE对BeW...
李梦雪
关键词:BEWO细胞细胞活性类固醇激素
基于基因芯片整合分析筛选及验证BeWo细胞合体化相关调控因子被引量:1
2019年
目的:合体滋养层细胞(syncytiotrophoblast,STB)是一类多核化上皮细胞位于人类胎盘最外层,由单核滋养细胞(cytotrophoblast,CTB)分化、融合而来,肩负妊娠维持关键激素的分泌和母胎间营养交换的重要职责,也是母胎屏障重要组成部分之一。然而,目前关于胎盘滋养细胞的合体化过程的调控机制仍不明确。本研究即利用生物信息学的方法筛选并初步验证潜在调控绒毛膜癌BeWo细胞合体化调控的关键基因。方法:从GEO数据库检索并下载BeWo细胞合体化前后的基因芯片数据集,并利用生物信息学分析方法对所有相关数据集进行综合分析,筛选出差异表达基因并进行GO及KEGG聚类分析,进一步通过PPI蛋白互作网络寻找节点基因,最后利用qRT-PCR验证候选基因在合体化前后的差异表达。结果:从2组数据中共筛选出137个差异表达基因,其中25个差异基因为2组数据集共有,参与细胞迁移、细胞黏附、激素代谢、MAPK信号通路等。进一步借助蛋白质互作网络分析,得到3个候选基因并通过qRT-PCR验证,结果与信息分析结果一致。结论:本研究为滋养细胞合体化研究提供了潜在靶基因,也为解析其分子调控机制提供了线索。
顾珺巍丁裕斌付利娟王永恒王应雄刘太行
关键词:BEWO基因芯片生物信息
脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对BeWo细胞炎症与凋亡相关基因表达的影响
2019年
目的观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)暴露对人胎盘绒毛癌细胞(BeWo细胞)炎症与凋亡相关基因表达的影响。方法将BeWo细胞进行培养和相应剂量(0~750 nmol/L)DON暴露,ELISA法检测人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平,qPCR法检测基因白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、环氧酶(Cox)-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3和B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl的表达水平。结果与空白对照组相比,50 nmol/L DON暴露组炎症和凋亡相关基因的表达呈显著性改变,即炎症相关基因IL-6、TNF-α和Cox-2在3、12和24 h时表达均显著上调(P<0.01),而IL-8仅在暴露24 h时显著上调(P<0.01),而凋亡相关基因Caspase-3在3、12和24 h时表达均显著低于对照组(P<0.01),而Bcl-xl的表达在暴露24 h时显著高于对照组(P<0.01)。结论 BeWo细胞DON暴露时炎症反应增强,凋亡被抑制,推测以上结果可能是DON胚胎发育毒性的潜在分子机制之一。
俞苗侯伟陈梁凯陈丽梅杨巍
关键词:脱氧雪腐镰刀菌烯醇炎症BEWO细胞
乙型肝炎病毒e抗原对Bewo细胞RIG-I和MAVS表达的作用被引量:1
2018年
目的探讨乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBe Ag)对Bewo细胞维甲酸诱导基因-I(retinoic acidinducible-I,RIG-I)和线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)表达的作用。方法首先以终浓度2μg/m L的RIG-I配体poly(d AT∶d AT)处理Bewo细胞24 h,观察RIG-I、MAVS m RNA的表达。然后将5μg HBe Ag重组质粒pc DNA3.1(+)-HBe转染Bewo细胞,转染48 h后,以2μg/m L的poly(d AT∶d AT)刺激24 h。采用实时荧光定量反转录PCR和酶联免疫吸附测定分别检测细胞RIG-I、MAVS m RNA表达及上清干扰素-β(interferon-β,IFN-β)水平。并采用免疫荧光染色法观察HBe Ag对细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65入核的影响。结果 poly(d AT∶d AT)可诱导Bewo细胞RIG-I、MAVS m RNA表达(27.86±9.49,21.75±8.04),高于对照组(14.51±6.27,11.59±4.73)(P<0.01)。转染5μg HBe Ag重组质粒组poly(d AT∶d AT)可诱导Bewo细胞RIG-I、MAVS m RNA表达(13.33±4.23,10.48±3.17)及IFN-β产生[(14.20±5.01)pg/m L],低于对照组[27.86±9.49,21.75±8.04;(47.69±14.3)pg/m L](P<0.01),但与pc DNA3.1-HBe-5组[11.82±3.58,9.39±3.22;(10.82±3.75)pg/m L]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。且HBe Ag可干扰poly(d AT∶d AT)诱导Bewo细胞NF-κB p65入核,抑制NF-κB的激活。结论 HBe Ag可下调Bewo细胞RIG-I、MAVS m RNA的表达,并抑制NF-κB入核及IFN-β产生,这可能是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)逃避宿主免疫应答的一种重要策略。
王芳资捷刘泽滨邱丽影朱国胜
关键词:乙型肝炎病毒E抗原
汉防己甲素对人绒毛膜癌BeWo细胞凋亡和细胞周期的影响被引量:2
2017年
目的:探讨汉防己甲素对人绒毛膜癌BeWo细胞株凋亡和细胞周期的影响。方法:以不同浓度的汉防己甲素处理人绒毛膜癌BeWo细胞株24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;Western blot检测p53和p21蛋白的表达。结果:汉防己甲素处理后,BeWo细胞株凋亡细胞的比例明显增高(P<0.01),细胞周期G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),p53和p21蛋白表达水平均升高(P<0.01)。结论:汉防己甲素可以对绒毛膜癌BeWo细胞株发挥诱导凋亡及细胞周期阻滞的作用,有望成为绒毛膜癌化疗方案的辅助治疗药物。
方静冀静安瑞芳
关键词:绒毛膜癌细胞凋亡细胞周期
基于代谢组学方法研究生半夏和姜半夏对BeWo细胞的毒性机制被引量:9
2017年
目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析生半夏和姜半夏干预后细胞内代谢物改变,来评价生半夏和姜半夏潜在的发育毒性。方法采用胎盘组织来源的BeWo细胞系构建体外胎盘模型,运用GC-MS检测细胞经生半夏及姜半夏干预后细胞内所含代谢物及其相对含量的变化。结果细胞代谢物中共鉴定出甘氨酸、氨基丙二酸、脯氨酸、葡萄糖、半乳糖、硬脂酸在、肌醇等九种差异性代谢物。结论运用GC-MS代谢组学技术评价半夏及姜半夏的发育毒性具有可行性。
申士富单进军谢辉辉徐建亚汪小蓉狄留庆
关键词:气相色谱-质谱联用半夏姜半夏BEWO细胞发育毒性

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王前
作品数:474被引量:2,765H指数:23
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