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原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人BO血型改造的研究被引量:12
2011年
本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人BO血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化。利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞。结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D600为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时。纯化后α-半乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg。该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞。结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为BO血型改造提供了更有效的工具酶。
高红伟李素波鲍国强檀英霞王玲燕金泗虎王颖丽季守平宫锋
利用新型α-半乳糖苷酶进行BO血型改造被引量:3
2011年
目的利用原核生物来源的α-半乳糖苷酶进行BO血型改造研究。方法应用PCR的方法从脆弱类杆菌(Bacteriodes fragilis)中克隆了新型α-半乳糖苷酶基因,构建原核生物表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导α-半乳糖苷酶的胞内可溶性表达,应用重组酶的上清液进行B型红细胞(RBC)初步酶解试验。结果重组酶分子量约为64.6 kD,超声破碎的菌液上清中的酶活力约为2 U/ml。在26℃及pH 6.8的等渗柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲体系中2,h内完全酶解200μl B型RBC需要30μl的上清液,酶解后的B型RBC与抗-B和抗-A单克隆抗体不凝集,流式细胞术检测结果显示酶解后B型RBC的血型抗原呈现O型特征。结论重组的α-半乳糖苷酶可以有效的将B型RBC转变为O型RBC。
王玲燕高红伟金泗虎李素波虞立霞鲍国强宫锋
关键词:Α-半乳糖苷酶B抗原
BO血型改造装置控制系统的研制(英文)
2009年
BO血型改造在平战时紧急条件下的输血方面具有重大意义。解放军军事医学科学院章扬培教授课题组利用基因工程,成功实现了B型血向O型血的转变,从而使国内的血型改造研究获得重大突破。为实现BO血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套BO血型改造装置,实现了BO血型改造工艺的自动化,将单次血型改造时间缩短到了手工操作的1/4,并且实现了工艺流程的标准化和密闭性,在使用一次性无菌管路耗材的情况下,从外部条件上满足了BO血型改造结果用于临床的要求,为BO血型改造在临床上的广泛推广奠定了基础。文章重点介绍了BO血型改造装置控制系统的研制情况,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为 BO血型改造过程提供了一种安全、高效的途径。
梁晓会黄英宫锋韩颖章扬培
关键词:控制系统自动化
BO血型转换密闭式处理用四联袋及其使用方法
本发明公开了一种将B型红细胞转换为O型红细胞的血型转换密闭式处理用四联袋及其使用方法,包括酶解前和酶解处理四联袋、酶解后处理四联袋,酶解前和酶解处理在一个四联袋中完成,是由四个容量为250ml的塑料袋通过塑料导管相连接,...
吕秋霜章扬培张评宫锋李媛邻由英任芙蓉苗天红张志欣高国静
文献传递
BO血型改造装置控制系统的研制
2007年
为实现BO血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套BO血型改造装置。重点介绍了BO血型改造装置控制系统的研制,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为BO血型改造过程提供了一种安全、高效的途径,为BO血型改造在临床上的广泛应用奠定了基础。
梁晓会黄英宫锋韩颖章扬培
关键词:控制系统自动化
M蛋白血症与ABO血型的相关性分析被引量:1
2007年
目的探讨M蛋白血症与ABO血型的相关性。方法随机收集本院门诊和住院病人的血标本7058例,同时采用琼脂糖凝胶电泳技术检测血清蛋白电泳及ABO血型鉴定,检出在球蛋白区出现M蛋白异常条带的病例122例,统计M蛋白血症在ABO血型系统中的分布频率,分析其与血型抗原表达之间的相关性。结果122例M蛋白血症患者ABO血型抗原分布特征为:A>B>O>AB。不同血型间M蛋白发生率,经χ2检验,P<0.01。结论M蛋白血症与ABO血型系统之间存在相关性,表明不同血型所代表的免疫遗传性状与M蛋白血症之间有一定关系。
万唐刘华廖勇姚卿武
关键词:M蛋白血症
BO血型转换密闭式处理用四联袋
本实用新型公开了一种B型红细胞转换为O型红细胞的血型转换密闭式处理用四联袋,包括酶解前和酶解处理四联袋、酶解后处理四联袋,酶解前和酶解处理在一个四联袋中完成,是由四个容量为250ml的塑料袋通过塑料导管相连接,各袋之间相...
吕秋霜章扬培张评宫锋李媛邻由英任芙蓉苗天红张志欣高国静
文献传递
制备抗α-半乳糖苷酶单克隆抗体用于检测BO血型改造后的微量残留酶被引量:1
2006年
目的:建立一种检测BO血型改造后残留α-半乳糖苷酶的有效方法。方法:利用重组咖啡豆α-半乳糖苷酶为免疫原制备单克隆抗体,再采用间接ELISA法检测BO血型改造后残留的工具酶α-半乳糖苷酶的量。结果:最低可检测出的残留酶量约为2.4ng/mL。结论:为BO血型改造后残留的工具酶的检测提供了有效的方法。
李素波田曙光鲍国强王璇琳檀英霞高红伟宫锋章扬培
关键词:Α-半乳糖苷酶单克隆抗体酶联免疫吸附测定
BO血型转换批量制备通用型红细胞的研究被引量:3
2005年
目的建立BO血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了BO血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。
吕秋霜张评章扬培李媛邻任芙蓉由英苗天红宫锋邱艳高波李慧高国静张志欣
关键词:ABO血型抗原Α-半乳糖苷酶酯酶活性渗透脆性B抗原K^+
BO血型转换密闭式处理用四联袋及其使用方法
本发明公开了一种将B型红细胞转换为O型红细胞的血型转换密闭式处理用四联袋及其使用方法,包括酶解前和酶解处理四联袋、酶解后处理四联袋,酶解前和酶解处理在一个四联袋中完成,是由四个容量为250ml的塑料袋通过塑料导管相连接,...
吕秋霜章扬培张评宫锋李媛邻由英任芙蓉苗天红张志欣高国静
文献传递