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- 庾蕾
- 一种呼吸道合胞病毒的人源单克隆抗体及其应用
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- 高福戴连攀宋健胥森瑜王奇慧
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- 文金生
- 抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建
- 2024年
- 目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。
- 徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛
- 关键词:库容量人源单克隆抗体
- 鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定
- 2024年
- 目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力。结果成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54×10^(8)。抗体文库经LcrV筛选后获得了3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8。3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39。3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L。RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果。结论从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为主,不能有效阻断病菌感染。所获得的单抗为鼠疫免疫基础研究、鼠疫诊断应用提供了候选材料。
- 张黎张黎张琪张琪吴海莲潘红星朱凤才吴海生
- 关键词:鼠疫耶尔森菌噬菌体展示
- 基于单个记忆B细胞筛选抗金黄色葡萄球菌人源单克隆抗体的研究
- 王文皓
- 一种痘病毒人源单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种痘病毒人源单克隆抗体及其应用,属于医药技术领域。本发明以大肠杆菌表达的痘苗病毒表面膜抗原A33蛋白作为抗原,从接种天花疫苗的志愿者的PBMCs中筛选A33蛋白特异性的记忆B细胞,然后对特异性B细胞进行反转...
- 方敏顾秀玲张毓凡姜威卢娇顾光磊
- 一种高灵敏度的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种高灵敏度的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用,属于医药技术领域。本发明以大肠杆菌表达的黄热病毒E蛋白作为抗原,通过流式分选,从一例康复期患者的PBMCs中筛选到可以特异结合黄热病毒E蛋白的记忆B细胞,然后对筛...
- 严景华高福李燕马素芳仵丽丽
- 一种高灵敏度的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种高灵敏度的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用,属于医药技术领域。本发明以大肠杆菌表达的黄热病毒E蛋白作为抗原,通过流式分选,从一例康复期患者的PBMCs中筛选到可以特异结合黄热病毒E蛋白的记忆B细胞,然后对筛...
- 严景华高福李燕马素芳仵丽丽
- 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用,属于医药技术领域。本发明以杆状病毒表达的RVFV糖蛋白Gn和Gc作为抗原,从一例裂谷热康复患者的PBMCs中筛选到可以结合RVFV糖蛋白Gn和Gc的记忆B细胞,且通过单一...
- 严景华王奇慧马桐杨化冰高福马素芳
相关作者
- 高福

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- 严景华

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- 王奇慧

- 作品数:95被引量:7H指数:2
- 供职机构:中国科学院微生物研究所
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- 李燕

- 作品数:77被引量:230H指数:9
- 供职机构:中国科学院微生物研究所
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